中国北方阿尔茨海默病患者载脂蛋白E基因分布特征

王景涛 李 凌 袁 晶

1）郑州大学第一附属医院神经内科 郑州 450052 2）北京协和医院神经科 北京 100730

目前发现的AD候选基因很多，已经公认ApoE基因是唯一与AD关系较肯定的基因，其余尚存在较大争议。国内研究结果显示［1］，ApoEε4在AD患者中出现的频率为20%～29%，在正常对照中为2%～9.5%，但在中国人ApoEε4等位基因频率明显低于白种人中的频率［2］。

目前国内的研究纳入的样本量普遍较小，需要较大样本量的研究明确我国AD患者ApoE基因分布特征。本研究通过对495例中国北方汉族阿尔茨海默病患者群进行研究，以了解我国AD患者ApoE基因分布特征。

1 研究对象与方法

1.1 样本来源 病例组样本来自1999—2010-04北京协和医院认知障碍门诊连续就诊的AD患者，知情同意抽血行ApoE基因型测定。AD患者符合NINCDS-ADRDA制定的很可能及确诊的AD诊断标准及排除标准［3］和（或）2007年修订的NINCDS-ADRDA诊断及排除标准［4］。所有研究对象在认知障碍门诊须完成详细的临床资料评估和认知功能测评，完成头颅CT或头颅海马像检查，对于诊断困难的患者，进一步行腰穿和头颅FDG-PET-CT检查，完成脑脊液β淀粉样蛋白和Tau蛋白的检查。认知功能测试量表包括简易精神状态评分（MMSE）、物体记忆测验（FOM）、语言流畅性测验（RVR）、WISC积木测验、WAIS数字广度测验、Hachinski缺血量表（Hachinski ischemic score，HIS）评分、汉密尔顿抑郁量表评分、日常生活能力量表（ADL）等。

1.2 DNA提取 抽取研究对象晨空腹血4～5mL，加入EDTA抗凝管内，应用饱和盐沉淀-氯仿抽提法提取DNA。并应用分光光度计测定DNA浓度。

1.3 ApoE基因型测定 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法［5］测定ApoE基因型。本课题所用试剂和仪器的厂家、测定详细步骤和ApoE的电泳图见课题组相关论文［6］。

1.4 统计学处理 等位基因频率和基因型频率采用基因计数法，应用拟合优度χ2检验探讨ApoE基因型是否符合Hardy-Weinberg平衡。

2 结果

2.1 研究对象的一般情况 本研究共入组AD患者495例，其中男219例（44.19%），平均年龄（73.30±7.54）岁；EOAD平均发病年龄（57.8±5.3）岁，LOAD平均发病年龄（74.2±6.2）岁；受教育程度：＜7a168例（34.02%），7～12 a135例（27.18%），≥13a192例（38.80%）；有痴呆家族史110例（22.22%）。

2.2 不同痴呆组和对照组ApoE基因型Hardy-Weinberg平衡 拟合优度χ2检验结果显示，AD组ApoE基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。

2.3 AD患者ApoE等位基因和基因型分布 EOAD与LOAD比较：无论是3个等位基因，还是5个基因型，2组均无显著性差异（P＞0.05）。有痴呆家族史患者和无痴呆家族史患者比较，有痴呆家族史患者仅含1个ε2等位基因，ε2等位基因频率和ε2／4基因型频率显著低于无痴呆家族史患者（P＜0.0001）；而ε3和ε4等位基因频率和ε3／3、ε3／4、ε4／4基因型频率均无显著差异（均为P＞0.05）。男性患者和女性患者比较：男女患者3种等位基因频率无显著差异（均P＞0.05），男性ε3／3频率显著高于女性（χ2＝7.233，P＝0.007）；女性ε3／4频率显著高于男性（χ2＝7.950，P＝0.005）；其余基因型均无显著性差异（P＞0.05）。见表1。

表1 不同AD患者ApoE等位基因和基因型分布 ［n（%）］

3 讨论

在AD易感基因的研究方面，科学家们关注的最多是ApoE。ε4被认为是AD的危险因素，可影响家族性AD发病的时间，也是散发型AD最主要的致病因素［7］。在Meta分析中，ε4的纯合子与ε3的纯合子优势比（OR）值在各个人种均＞10。Corder等发现1个APOEε4拷贝就可以把阿尔茨海默病的发病时间提前7～9a。与ε4的作用相反，ε2可减少阿尔茨海默病的发生［8］。

本研究结果显示，我国北方汉族AD患者ε2、ε3、ε4等位基因频率分别为4.85%、70.51%、24.64%；基因型频率分别为ε2／3（5.86%）、ε2／4（3.84%）、ε3／3（50.50%）、ε3／4（34.14%）、ε4／4（5.66%）。为了明确我国汉族人群AD患者ApoE基因的分布与国外人群的差异，将本研究与各洲不同国家的研究结果进行比较发现，挪威、英国、智利等国AD患者ε3频率（分别为53.1%，57.5%和52.0%）较本研究低［9-11］，而ε4频率较本研究高（分别为39.6%、39.1%和40.0%）；而日本和伊朗AD患者的ε3频率（分别为67.0%、78.1%）和ε4频率（分别为31.0%、21.0%）与本研究比较无显著差异［12-13］。以上结果提示我国AD患者ApoE基因分布与亚洲国家相似，与欧美国家有较大差别。

对AD患者的进一步分析发现，EOAD和LOAD无论是3个等位基因的分布还是5种基因型的分布均无显著性差异；在110例具有痴呆家族史AD患者中仅1例携带ε2等位基因，ε2等位基因频率和ε2／4基因型频率显著降低；而ε3和ε4等位基因频率和ε3／3、ε3／4、ε4／4基因型频率均无显著差异。研究［14］显示，具有痴呆家族史的人群中ε4携带者的比例较无痴呆家族史者高，而ε2携带者的比例则较无痴呆家族史者低。在具有痴呆家族史人群中，只有ε4携带者的AD风险才明显增高。这提示痴呆家族史和ε4等位基因在AD发病风险中的协同作用。本研究仅观察到该人群ε2频率和ε2（＋）基因型频率的降低，并未观察到ε4频率和ε4（＋）基因型频率的增高，可能与种族不同有关。

根据性别分层后发现，男女患者3种等位基因频率无显著差异；男性ε3／3频率显著高于女性（57.21%vs 45.05%），而女性ε3／4频率则显著高于男性（39.56%vs 27.48%，）；其余基因型均无显著性差异。已经有研究发，现AD患者不同性别之间ApoE分布的不同。在美国高加索AD患者中，女性ε3／4频率为64%，而男性则为44%，存在较大差异，ε4＋／-型女性患AD的风险（OR＝3.71，95%CI 1.74～7.9）显著高于男性（OR＝1.36，95%CI 0.54～3.46）［15］。另一项针对高加索人群AD患者的研究和对日本AD患者的研究均发现了类似结果［16］。

由此可见，我国AD患者ApoE基因分布与亚洲国家类似，而与欧美国家有较大差别，这可能与人种不同有关。我国ApoE基因频率在不同性别和不同痴呆家族史患者之间存在差异，可能导致不同性别和有无痴呆家族史之间AD发病风险的差别。

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