自体骨髓间质干细胞移植治疗多系统萎缩34例分析

屈新辉 项正兵 周 超 高幼奇 张昆南 吴晓牧

江西省人民医院神经内科 江西省神经病学研究所 南昌 330006

多系统萎缩（multiple system atrophy，MSA）是一组成年期发病，病因不明的散发性神经系统变性疾病。临床包括的3个亚型中以小脑症状为主的散发型橄榄－脑桥－小脑萎缩（olivopontocerebellar atrophy，OPCA）多见、以帕金森样症状为主的纹状体黑质变性（striatonigral degeneration，SND）次之，单纯以自主神经功能障碍为突出表现的Shy－Drager综合征（SDS）则少见。迄今尚无有效的治疗方法，临床多以对症治疗为主。近年来在神经系统可塑性和神经再生方面的深入研究，成体干细胞具有多向分化潜能和自我更新的特性，为MSA治疗提供了新的思路和方法［1］。实验采用自体骨髓间质干细胞（mesenchymal stemcells，MSCs）经蛛网膜下腔移植治疗MSA患者，观察自体骨髓MSCs移植治疗改善MSA患者神经功能的临床疗效及安全性。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2010－01—2012－07江西省人民医院神经内科收治的 MSA患者34例，包括OPCA 26例，SND 8例。男20例，女14例；年龄41～56岁，平均47.4岁。患者均住院治疗行包括血、尿、便三大常规、肝肾功能以及胸片、心电图均正常，多项肿瘤标记物均阴性。患者对治疗签署知情同意书，治疗方案经医院医学伦理委员会批准。禁忌证：（1）高度过敏体质或有严重过敏史者。（2）并发重要脏器（心、肺、肝、肾等）功能衰竭。（3）出凝血机制障碍，如血友病等。（4）合并恶性肿瘤。（5）血清学检查阳性者，如艾滋病、梅毒等传染性疾病。（6）局部或全身重症感染。

1.2方法患者应用自体骨髓MSCs通过蛛网膜下腔输注进行移植治疗，1次／周，共治疗2次。具体操作如下：（1）骨髓MSCs动员：采用粒细胞集落刺激因子进行动员，剂量5 mg／（kg·d），连续2d；（2）在局麻下获取自体骨髓液：第3天上午患者在层流室取俯卧位，依次在左右侧髂后上棘穿刺共抽取骨髓液约120mL。（3）分离获取骨髓 MSCs：去除红细胞，密度梯度离心法结合贴壁法获取单个核细胞。（4）骨髓MSCs鉴定及计数：骨髓间质干细胞CD70免疫荧光阳性染色，制成5mL细胞悬液备用，细胞数（5.0～10.0）×107，患者均进行细菌、真菌、支原体和内毒素检测。（5）自体骨髓MSCs移植：第3天下午，患者取侧卧位，取腰3、腰4椎间隙为穿刺点，用9号腰椎穿刺针穿刺，穿刺成功后引流脑脊液约7mL；用无菌注射器抽取干细胞悬液约5mL，缓慢推注至蛛网膜下腔；最后抽取生理盐水约2mL推至蛛网膜下腔，使穿刺针道中的残留细胞完全进入蛛网膜下腔；留针3～5 min后，拔针，按压，无菌纱布覆盖穿刺点。（6）患者去枕平卧位6h。

1.3观察指标主要观察术后不良反应和并发症及入院时与移植后1、3、12个月世界神经病联合会国际合作共济失调评分量表（ICARS）评分，包括姿势和步态障碍、语言障碍、动态功能和眼球运动障碍，统一多系统萎缩评估量表（UMSARS）包括病史回顾、运动检查、自主神经检查和整体失能等级（只做前两部分评分），日常生活能力量表（ADL）中改良的 Barthel指数（MBI）。

2 结果

2.1随访结果骨髓干细胞移植后，34例患者均完成12个月随访，中途无脱落。

2.2骨髓干细胞移植前后患者神经功能评分比较患者移植后1、3个月后ICARS、UMSARS评分较移植前均明显降低 （均P＜0.05），MBI评分较移植前升高 （均P＜0.01），移植12个月后ICARS、UMSARS、MBI评分与移植前比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 骨髓干细胞移植前后患者神经功能评分比较 （s）

表1 骨髓干细胞移植前后患者神经功能评分比较 （s）

注：与治疗前比较，aP＜0.01，b P＜0.05，c P＞0.05

个月ICARS 68.4±9.7 59.6±9.3a61.8±9.4a64.1±9.5功能评分 治疗前 治疗后1个月 3个月 12 c UMSARS 65.2±8.9 58.5±8.6a59.6±8.7 b 61.3±8.8c MBI 18.9±6.8 27.1±7.5a26.9±7.3 a21.9±7.1c

2.3不良反应7例患者低热（体温37～38.4℃）和4例患者低颅压性头痛，予以解热镇痛药和卧床输液处理后症状完全消失。

3 讨论

多系统萎缩（multiple system atrophy，MSA）是一组以自主神经功能障碍、帕金森病及小脑性共济失调为特征性表现的迟发性神经系统变性疾病。病理特征为中枢神经系统广泛的神经元萎缩、变性、脱失及反应性胶质增生等。病变主要分布于小脑Purkinje细胞、脑桥核、下橄榄核、尾状核、壳核、苍白球、黑质、蓝斑、前庭核、迷走神经背核、脊髓前角细胞、交感及副交感神经核、胸髓中间外侧核等。目前认为，高度磷酸化的α－突触核蛋白的异常聚集是其主要的发病基础。

近年来研究发现，骨髓MSCs具有强大的自我更新能力和多向分化潜能，在适宜的条件可以分化为神经元和星形胶质细胞，并能诱导神经干细胞分化为神经元。干细胞治疗为多系统萎缩等变性性疾病提供了新的治疗手段。Lee等［2］采用自体骨髓MSCs通过动静脉途径移植治疗11例MSA患者，12个月后发现临床症状改善、UMSA评分下降明显。吴立克等［3］采用脐血 MSCs通过蛛网膜下腔移植治疗20例MSA患者，4周后，患者运动迟缓、平衡障碍、体位性低血压、二便障碍等临床症状明显改善，UMSA评分下降明显。胡晴等［4］采用脐血MSC通过静滴和鞘内注射治疗OPCA，治疗3个月后ICARS、UMSARS评分指数均明显降低，Barthel指数升高，未见严重不良反应。

本文结果表明，自体骨髓MSC移植治疗MAS早期有一定疗效，患者临床症状减轻，生活自理能力得到提高，但疗效不够持久。

骨髓MSCs移植治疗神经系统疾病在动物实验和临床上均取得较大进展，但MSCs在促进神经功能恢复方面的作用机制尚不完全明确。目前认为MSCs主要通过以下机制发挥作用：（1）细胞的替代作用，MSCs移植入脑后，在受损部位周围存活形成表达神经标志性蛋白的星形胶质细胞和（或）神经元样细胞，甚至可以移行至全脑［5］。（2）促进血管发生，改善脑动脉供血，MSCs在受损部位可分化成血管内皮细胞、细胞外基质而新生血管［6］。（3）分泌营养因子、促进损伤组织的修复并减少细胞凋亡，在中枢神经系统微环境下刺激损伤部位产生内源性生长因子，或直接分泌脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）等营养因子。（4）重建神经功能区和传导通路，在脑内创造适宜的局部微环境，MSCs通过体外扩增或不同因子诱导分化的方式使其分化为神经细胞，而替代受损细胞重建传导通路及神经功能区［7］。

本文中7例患者出现低热（体温37～38.4℃），4例患者有低颅压性头痛。考虑发热可能与细胞代谢产物或部分细胞崩解碎片有关，低颅压性头痛与腰椎穿刺术相关。上述症状经解热镇痛药或卧床输液处理后3d内症状完全消失。

采用自体骨髓MSCs有获取较容易、无排斥反应、避免异体骨髓可能带来的感染且不存在伦理道德问题。但本实验样本数少，且长期临床疗效不肯定，有待进一步的大样本随机对照验证。

［1］Lee PH，Park HJ.Bone marrow－derived mesenchymal stem cell therapy as a candidate disease－modifying strategy in Parkinson＇s disease and multiple system atrophy［J］.J Clin Neurol，2009，5（1）：1－10.

［2］Lee PH，Kim JW，Bang OY，et al.Autologous mesenchymal stem cell therapy delays the progression of neurological deficits in patients with multiple system atrophy［J］.Clin Pharmacol T－her，2008，83（5）：723－730.

［3］吴立克，王晓娟，许保磊，等 .脐血间充质干细胞移植治疗多系统萎缩20例［J］.中国组织工程研究与临床康复，2009，13（45）：8 975－8978.

［4］胡晴，李瑞芳，曹梦莹，等 .脐带间充质干细胞治疗橄榄桥脑小脑萎缩的安全性及有效性［J］.武汉大学学报（医学版），2012，33（1）：84－88.

［5］Jin GZ，Cho SJ，Choi EG，et al.Rat mesenchymal stem cells increase tyrosine hydroxylase expression and dopamine content in ventral mesencephalic cells in vitro［J］.Cell Biol Int，2008，32（11）：1 433－1 438.

［6］Kim YJ，Park HJ，Lee G，et al.Neuroprotective effects of human－mesenchymal stem cells on dopaminergic neurons through anti－in－flammatory action［J］.Glia，2009，57（1）：13－23.

［7］Bouchez G，Sensebe L，Vourch P，et al.Partial recovery of dopaminergic pathway after graft of adult mesenchymal stem cellsin a rat model of Parkinson，s disease［J］.Neurochem Int，2008，52（7）：1 332－1 342.