补肾活血汤对激素性股骨头缺血坏死成骨与破骨的影响

陈汉尧 ，齐振熙，吴敏瑞 ，周李学

（1.福建中医药大学骨伤学院，福建 福州 350122；2.福建中医药大学中西医结合学院，福建 福州350122）

由激素导致的股骨头缺血坏死已成为非创伤性骨坏死的首要病因，研究认为超生理剂量的激素对破骨细胞和成骨细胞调节的影响是研究该病理机制的关键。临床及实验研究均表明中医药可有效地防治此病，补肾活血化瘀法被广泛地应用于该病的治疗。

补肾活血汤源于《伤科大成》，以“肾主骨生髓”“血行则瘀自去”为依据组方，具有补肾益肝、活血化瘀的功效。本实验通过检测SD大鼠体内血清骨碱性磷酸酶（BALP）含量高低，光镜下观察SD大鼠股骨头形态改变，探讨补肾活血汤对激素性股骨头缺血坏死成骨与破骨的影响，评价补肾活血汤促进激素性股骨头缺血坏死修复的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 实验所需60只SD大鼠购于上海斯莱克实验动物有限公司，许可证号码SCXK（沪）：2012-0002，饲养及造模在福建中医药大学实验动物中心SPF级实验室完成，合格证编号：2007000555040。

1.2 实验试剂及仪器 补肾活血汤由福建中医药大学中西医结合研究院中药提取平台制备，药物组成：熟地黄 9 g，杜仲 3 g，枸杞子 3 g，补骨脂 9 g，菟丝子 10 g，归尾 3 g，没药 3 g，山茱萸 3 g，红花 1.5 g，独活3 g，肉苁蓉3 g，药物浓缩，制成含生药浓度为1.0 g／mL的制剂，密封保存备用；脂多糖（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）；甲强龙（甲泼尼龙琥珀酸钠注射液，Pfizer）；BALP检测试剂盒（上海西唐生物科技有限公司）。

1.3 实验方法 购买成年SD大鼠60只，雌雄各半，标准饲料喂养，自由进水，适应性喂养1周后，按随机数字表法随机分为5组：正常组、模型组和补肾活血汤高、中、低剂量组，每组12只。实验第1周，模型组和补肾活血汤高、中、低剂量组连续注射20 μg／kg脂多糖2次，每次间隔24 h，24 h后立即注射甲强龙40 mg／kg，连续注射3次，每次间隔24 h。实验第2～6周，注射甲强龙用量减至20 mg／kg，每周1次，连续5周。正常组注射相同剂量相同频次的生理盐水［1］。

1.4 实验给药 实验第7～10周，按人与大鼠体表面积用药量的换算，计算出每只大鼠所需的剂量，补肾活血汤高、中、低剂量组给予含生药浓度分别为2.5 g／kg、5 g／kg、10 g／kg 的补肾活血汤灌胃，每天早晚各1次；正常组和模型组在第7～10周，以5 g／（kg／d）的生理盐水灌胃，每天早晚各 1 次［2］。 用含生药浓度为1.0 g／mL补肾活血汤制剂计算，低剂量组灌胃剂量为2.5 mL／kg，中剂量组灌胃剂量为5 mL／kg，高剂量组灌胃剂量为 10 mL／kg。

1.5 指标检测

1.5.1 实验第11周，采用10%水合氯醛10 mL／kg腹腔麻醉，成功后，经腹腔动脉采血5～6 mL，放入肝素抗凝试剂管中，采用全自动离心机以3000 r／min，离心10 min，取上清液，置于-20℃冰箱分装保存，用时按大鼠BALP检测试剂盒检测步骤进行指标的检测。

1.5.2 麻醉后，取双侧股骨头，4%甲醛溶液固定24 h，10%乙二胺四乙酸（EDTA）4℃脱钙 2 月，经梯度乙醇脱水，石蜡包埋切片，切片厚5 μm，苏木-伊红（HE）染色，光镜下观察股骨头骨组织变化情况。

1.6 统计学处理 本研究使用SPSS 18.0统计软件分析数据，计数资料采用χ2检验，计量资料符合正态分布的用±s表示，采用单因素方差分析。

2 结 果

2.1 各组骨组织光镜下形态变化情况 ① 正常组：软骨厚度均匀，同源软骨细胞数量正常，骨小梁结构连续无断裂，空骨陷窝较少，骨髓腔内造血组织丰富，脂肪组织较少。②模型组：同源软骨细胞及基质大量减少甚至消失，可见大片云片状的坏死细胞，潮线不连续甚至撕裂；骨小梁断裂、消失，骨质分解成黑色云片状的坏死组织。③高剂量组：软骨细胞排列紊乱，软骨基质不均匀可见大量致密结缔组织增生；软骨层内富含充血扩张的血管或静脉窦，部分栓塞或机化，管腔内炎性细胞聚集，机化的血管周围可新生类骨质，骨小梁基本连续，骨髓腔内可见少量脂肪细胞。④中剂量组：可见同源软骨细胞及基质减少，软骨内骨髓腔形成，可见破骨性软骨吸收，骨小梁稀疏或断裂，骨髓腔内有较多的脂肪细胞堆积，造血组织减少，可见少量因骨质坏死分解成的黑色坏死物。⑤低剂量组：同源软骨细胞及基质大量减少，可见较多的破骨性软骨吸收陷窝，骨髓组织较少，可见分解为黑色的坏死组织，骨小梁稀疏断裂，坏死分解为片状，骨髓腔内填充大量的脂肪细胞，融合成大泡，有较多的空骨陷窝。

2.2 各组血清BALP含量比较 见表1。

表1 各组血清BALP含量比较（±s）pg／mL

表1 各组血清BALP含量比较（±s）pg／mL

注：与正常组比较，1） P＜0.05；与模型组比较，2） P＜0.05。

组别正常组高剂量组中剂量组低剂量组模型组n 1212121212 BALP 0.835±0.0232）0.826±0.0252）0.776±0.0291）0.758±0.5601）0.755±0.0841）

3 讨 论

祖国医学认为激素性股骨头缺血坏死属痹证范畴。本病的发生以正虚为本，邪实为标。《素问·五脏生成篇》载“骨痹不已，复感于邪，内舍于肾。”中医学认为“痹者，闭也”，闭阻不通，则为疼痛，即“不通则痛”。《疡医大全》曰：“跌打骨折…宜活血祛瘀为先，血不活则瘀不去，瘀不去则骨不能接也”。故治疗本病以补肾为本，配合活血化瘀药物，从而达到标本兼治的目的。

补肾活血汤中入熟地黄、杜仲、枸杞子、补骨脂、菟丝子，以填精补髓，壮阳生精，使“阳得阴生，阴得阳化，而泉源不绝”；再入红花、没药、归尾以活血化瘀、行气止痛，使“瘀血去，新血生”，筋骨得养，血脉通畅，而痛自除；再佐以山茱萸以健脾生血，使气血生化有源；使以肉苁蓉润燥、滑肠，使散中有收，收中有散，补泻同施。本方具有补肾、活血、化瘀之功，理论上符合上述原则。

药理学研究表明补肾药物可增强机体内分泌功能，增加机体内激素水平，从而抑制骨吸收，增加骨形成。经菟丝子黄酮灌胃的去卵巢骨质疏松大鼠血Ca、BALP值均明显升高，枸杞子多糖可增强非特异性免疫作用和促进造血功能，减弱激素类药物的免疫抑制作用［3］。动物实验研究证明活血化瘀药物能改善血液微循环，纠正脂质代谢紊乱，改善毛细血管通透性，降低骨内压，从而抑制骨内压增高、微循环障碍致缺血性坏死的恶性循环。红花黄色素可明显延长大鼠血浆的TT、PT和APTT的效应时间，明显降低Fib含量，并可显著抑制由二磷酸腺苷引起的SD大鼠血小板聚集［4］。独活抗炎镇痛的主要成分蛇床子素，能使血清中IGF-1浓度值升高，使股骨骨小梁面积明显增加，矿化沉积率增高［5］。

本实验表明：高剂量组大鼠体内BALP水平较高，软骨层可见新生类骨质，骨小梁基本连续，骨髓腔内脂肪细胞较少，未见因骨质坏死分解成的黑色坏死物。表明高剂量补肾活血汤可以提高雌激素依赖BALP的活性，增强非特异性免疫作用，抑制骨量丢失。补肾活血汤的活血化瘀功效，可抑制股骨头内因骨内压增高、微循环障碍导致的股骨头缺血性坏死的恶性循环，从而起坏死修复作用。

［1］杨卫强，蒋振刚，黄昌林.激素性股骨头坏死模型兔骨组织病理及功能变化［J］.中国组织工程研究与临床康复，2011，15（50）：9319-9322.

［2］魏弘.医学实验动物学［M］.成都：四川科学技术出版社，1998：174.

［3］蔡西国.菟丝子黄酮干预去卵巢大鼠骨代谢研究［J］.中药药理与临床，2007，23（6）：27-29.

［4］赵金明，秦文艳，齐越，等.红花黄色素抗凝血作用及对血小板聚集影响的研究［J］.实验动物科学，2009，26（6）：30-32.

［5］MING L G，ZHOU J，CHENG G Z，et al.Osthol，a coumarin isolated from common cnidium fruit，enhancesthe differentiation and maturation of osteoblasts in vitro［J］.Pharmacology，2011，88（1-2）：33-43.