不同频率电针“解郁方”对抑郁大鼠海马内5-TH和血清ACTH含量的影响

陈 冲，闫丽萍，王敏丹，燕 平

（山西中医学院，山西太原 030024）

针灸治疗抑郁症的选穴配伍至今缺乏系统而完整的标准，通过前期研究，我们筛选出治疗抑郁症的较佳穴位配伍处方——“解郁方”。除了穴位，针刺频率也是影响针灸效应的重要因素之一。因此，开展不同针刺频率疗效的研究具有重要意义。本研究旨在探讨不同频率电针“解郁方”对抑郁大鼠血清促肾上腺皮质激素（ACTH）和海马内五羟色胺（5-TH）含量的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 清洁级雄性SD大鼠［北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证编号为SCXK-（军）2007-004］100只，体质量（160±10）g。

1.1.2 实验仪器 ACTH ELISA试剂盒（由美国Becton，Dickinson and Company公司提供）。LH-202型HANS电针仪，离心机，漩涡振荡器，酶标仪，匀浆机，荧光分光光度计。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与造模 相对湿度45%～55%，温度20℃～25℃环境中适应性喂养1w后，进行旷场试验，将成功通过旷场试验筛选的50只大鼠，随机分为空白组、模型组、2Hz组、30Hz组、100Hz组，每组各 10只。除空白组外，各组动物开始接受21d各种不同的应激，包括冷水游泳（4℃，5min）、禁水（24h）、禁食（24h）、昼夜颠倒（24h）、热烘（45℃，5min）、束缚（3h），夹尾（3min），每天随机安排 1种，每种刺激方式使用3～4次。

1.2.2 针刺方法 各电针治疗组于应激造模前1h针刺，各组“解郁方”穴位常规消毒，选用华佗牌0.25mm×25mm针灸针进行针刺。参照《实验动物针灸穴位图谱》取穴，百会穴向前平刺3mm，太冲穴直刺1mm，神门穴直刺2mm，连接到LH-202型HANS电刺激仪。刺激强度以穴位周围肌肉颤动而又不引起大鼠嘶叫为度［1］，一般不超过2mA，共电针20min，1次/d，连续治疗3w；空白组不做处理，模型组抓取、固定，但不做针刺，其他处理同针刺组。

1.2.3 指标测定 各组动物于第21天末次治疗的24h后，大鼠用10%水合氯醛（0.36mL/100g）给大鼠腹腔注射，麻醉后采血4mL，血液在未抗凝试管中静置，4000r/min离心10min，分离血清，保存在-20℃的冰箱中，以备待测。用ELISA方法检测血清ACTH，采血后大鼠快速断头，按大鼠脑图谱标示，冰上分离海马脑，保存于液氮中，以备待测。用荧光分光光度计测大鼠海马内5-TH含量。

1.3 统计学方法

应用SPSS17.0统计软件进行统计分析，统计量用均数±标准差（±s）表示，组间比较用单因素方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

不同频率电针“解郁方”对抑郁大鼠血清ACTH以及海马内5-TH含量的影响，结果见表1。

表1 各组大鼠血清ACTH含量以及海马内5-TH含量比较 （±s）

表1 各组大鼠血清ACTH含量以及海马内5-TH含量比较 （±s）

注：与正常组比较，1）P<0.01；与模型组比较，2）P<0.01；与 30Hz组、100Hz组比较，3）P<0.05

组别 n ACTH（pg/mL） 5-TH（μg/g）正常组 8 14.437±0.459 1.810±0.145模型组 8 16.083±0.6561） 0.584±0.0831）2Hz 组 8 14.992±0.7092）3） 1.166±0.9702）3）30Hz组 8 15.525±0.7642） 0.992±0.0892）100Hz组 8 15.802±0.4632） 0.815±0.0792）

由表1可以看出，与正常组比较，模型组ACTH含量升高，5-TH含量降低（P<0.01），表示抑郁大鼠模型造模成功。各电针治疗组ACTH含量较模型组显著降低（P<0.01），5-TH含量提升（P<0.01）；2Hz组较30Hz组、100Hz组ACTH浓度降低、5-TH含量高（P<0.05）；30Hz组、100Hz组 ACTH 浓度，5-TH 含量比较差异无统计学意义。表明不同频率电针“解郁方”均能降低抑郁大鼠血清ACTH含量，提升海马内5-TH含量，2Hz效果较好。

3 讨 论

针灸治疗抑郁症历史悠久，疗效确切，不同的刺激方法和频率对机体的调节作用不同。 金真等［2］应用功能性磁共振研究人脑对不同频率穴位体表电刺激（TENS）的反应，结果显示，在相同穴位给予不同频率的TENS可以在大脑引起不同的反应，提示不同频率的TENS可以激活不同的脑区，其中低频TENS选择性地激活腹侧丘脑、下丘脑和内嗅叶，而高频TENS则激活背侧丘脑和扣带回。

抑郁症发病是多因素的，神经内分泌系统在抑郁症的发生发展中具有重要作用。HPA轴作为神经内分泌免疫网络的枢纽，主要作用是维持人体内环境的稳定，对外界环境的刺激做出生理心理反应，以适应环境的刺激。ACTH是维持肾上腺正常形态和功能的重要激素，是垂体前叶在下丘脑促皮质素释放激素（CRH）的作用下，在腺垂体嗜碱细胞内进行合成和分泌的。随后激活束状带细胞的腺苷酸环化酶，生成环腺苷酸，进一步生成应激激素皮质类固醇（GC）。抑郁症神经内分泌改变是下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴功能亢进和下丘脑-垂体-甲状腺（HPT）轴功能障碍造成的，电针治疗抑郁症的机制之一就是调整亢进的HPA轴功能。

慢性应激是诱导抑郁症发病的重要原因，其主要原因之一是导致海马内5-HT含量减少。海马是应激激素的靶区，主要功能是参与情绪的控制和反应，对情绪反应起非特异性抑制作用，是前脑抑制系统的一部分，也是介导应激反应最重要的脑区之一。慢性应激（超过24h的持续或反复应激）可以引起海马结构发生器质性改变，造成海马体积缩小，神经元缺失［3］。首先是应激刺激引起缰核活动水平增强，加强了对中缝核的抑制作用（中缝核含有大量5-HT神经元［4］），导致5-HT释放减少，海马功能低下，出现抑郁症状。电刺激外侧缰核经过中缝核使海马神经元发生兴奋［5］，深部脑刺激疗法正是基于此原理起效的。应激刺激激活了机体的5-HT系统和HPA轴之间原已存在的交互调节作用［6］，这两个系统的病理性变化是抑郁症症状的重要原因，而且与中枢神经系统海马和缰核的活动存在着极密切关系［7］。HPA轴活动持续增强是抑郁症的重要原因，海马抑制HPA轴活动，也抑制缰核活动。高频刺激（刺激参数大于100Hz，可引起与损毁术类似效应）外侧缰核能降低其活动水平。实验结果表明，不同频率电针“解郁方”都能降低抑郁大鼠血清ACTH，抑郁大鼠海马内5-TH含量增加，以2Hz频率最明显。这一实验结果为“解郁方”的临床应用提供了实验室依据，但其作用机制有待进一步研究。

［1］卢俊，时宇静，金智秀，等.不同频率电针对模型大鼠抗抑郁效应的比较研究［J］.北京中医药大学学报，2003，26（6）：83-84.

［2］金真，张蔚婷，罗非，等.人脑对不同频率穴位电刺激反应的功能性磁共振成像［J］.生理学报，2001，53（4）：275-280.

［3］Ferraro G，Montalbano M E，Sardo P，et al.Lateral habenula and hippocampus：a complex interaction raphe cells-mediated［J］.J Neural Transm，1997，104（6-7）：615-631.

［4］孙华，张有志，韩毳，等.电针对慢性应激抑郁模型大鼠大脑皮层5-HT1和5-HT2受体数量和结合活性的影响［J］.中国针灸，2003，23（9）：553-555.

［5］龚燕，王延武.电针对脑卒中后抑郁模型大鼠行为学和脑组织NE、5-TH含量的影响［J］.中国中医药科技，2009，16（3）：163-164.

［6］Herman J P，Ostrander M M，Mueller N K，et al.Limbic system mechanisms of stress regulation：Hypothalamo-pituitary-adrenocortical axis［J］.Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry，2005，29（8）：1201-1213.

［7］王绍.缰核-治疗难治性抑郁症的新靶标［J］.生理科学进展，2011，42（6）：407-411.