胶体金免疫层析法和ELISA 法检测乙肝表面抗原的对比

汤晓琳，方芳

(1.沈阳医学院基础医学院机能中心，辽宁 沈阳 110034;2.基础医学院病原生物学教研室)

国内检测乙肝五项指标主要使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法［1］，其特异性和灵敏度得到肯定。近年来使用的胶体金免疫层析(gold immunochromatographic assay，GICA)法由于其操作简便，不需特殊检测仪器和设备，在大面积人群筛查乙肝表面抗原(HBsAg)时被大量使用，已经开始受到关注。本文旨在比较ELISA 法和GICA 法检测HBsAg 的阳性率，探讨影响2 种方法结果的因素。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选择2012年12 月至2014年3 月沈阳市第一五七医院体检患者和住院患者470例，其中男320例，女150例，年龄20～76 岁，平均48 岁。

1.2 试剂与仪器 GICA 法试纸条和ELISA 试剂盒均购自上海科华生物技术有限公司(96 人份)，美国产stat fax2100 型酶标仪。

1.3 方法 470 份血清标本以GICA 试纸条和ELISA 试剂盒进行检测，按照说明书要求操作并判断结果。

ELISA 法:(1)每孔加入待测标本50 μl，设阴阳对照各2 孔，每孔加入阴性对照各50 μl，并设空白对照1 孔;(2)每孔加入酶结合物50 μl(空白对照孔除外)，充分混匀，封板，置37 ℃孵育30 min;(3)手工洗板;(4)每孔加显色剂A液、B 液各50 μl，充分混匀，封板，置37 ℃孵育15 min;(5)每孔加终止液50 μl，混匀;(6)用酶标仪读数，取波长450 nm，先用空白孔校零，然后读取各孔吸光度值。

GICA 法:(1)将试纸条取出，粘贴于不干胶记录纸上相应位置，水平放置并做好标记;(2)用加样器毛细管吸取60 μl 新鲜血清缓慢滴加于试条箭头下方的垫片上;(3)为防止弱阳性标本的漏检，于加样后10 min 观察并记录实验结果。

1.4 统计学方法 采用SPSS 17.0 统计软件进行分析。采用χ2检验进行比较，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2 种方法检测HBsAg 均阴性的437 份，均阳性的31 份，2 种方法检测的符合率为99.57%，灵敏度为93.93%。GICA 法检测出HBsAg 阳性标本31 份，HBsAg 阳性率6.72%。ELISA 法检测出HBsAg 阳性标本33 份，HBsAg 阳性率为7.07%，差异无统计学意义(χ2=1.49，P ＞0.05)。

表1 2 种检测HBsAg 方法的比较

3 讨论

乙型肝炎病毒是乙型肝炎的病原体，乙肝在我国属于突出的公共卫生问题，中国报告每年乙肝新发病例数约50 万。HBsAg 为乙肝病毒感染的最主要的病原标志物和直接证据之一［1］。HBsAg是血清中最早出现的HBV 标志物，在急性肝炎时很快消失，若6个月后血清中HBsAg 仍不消失，可成为慢性肝炎或者HBsAg 携带者，可持续几年或几十年。因此乙肝患者以及乙肝病毒携带者HBsAg 检测的准确性是非常重要的。

本研究应用2 种方法检测470 份血清样品中，结果显示ELISA 法检测出阳性HBsAg 标本33 份(7.07%)，GICA 法检测出阳性标本31 份(6.72%)，差异无统计学意义，GICA 法比ELISA 法少检出2例，有漏检现象，可能因GICA 法灵敏度较ELISA 法低造成。虽然2 种方法差异无统计学意义，但是由于乙肝血清标志物检测原理及方法学上的差异，在实际临床工作中，GICA 法的简单便捷的优势是ELISA 法不具备的，但是替换ELISA 法检测HBsAg 目前是不能实现的，因为GICA 法有方法学原因，会发生漏检和检测假阴性的可能性，应根据具体情况推荐检测机构所使用的方法，例如做腔镜手术患者和献血者［2］等需要快速了解乙肝情况时，可以采用省时、快速的GICA检测法。对于大型综合性医疗机构，则建议使用ELSIA 法检测HBsAg。可行的是在紧急情况发生时可先使用GICA 法检测，建议对有疑问的患者再次用ELISA 法复检，同时操作过程中要注意影响2 种方法检测结果的因素，应用GICA 法筛查和ELISA 法检测的联合模式为临床提出相应正确的指导。

本次检测选用同一厂家GICA 法试剂盒和ELISA 法试剂盒，但是检测最终结果受诸多因素的影响［3］。首先试剂的影响，不同厂家出产的试剂存在一定的差异，资料显示不同厂家试剂的特异性和敏感性分别为89.14%～99.13%，78%～89%，存在较大差异。选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。其次，操作不规范也是影响结果的重要因素，操作过程中观察时间以及温度、洗板、显色等因素都会影响结果的准确性。GICA 法与ELISA 法相比，操作时间已经大大缩短，但层析速度太快时，弱阳性标本可能还未显色，操作者误认为判断时间已到，给出假阴性结果。因此，应达到说明书要求的观察时间，以减少弱阳性标本的漏检率。孵育影响:抗原、抗体结合及酶促反应对温度有严格要求，ELISA 法中加入板孔中的标本在37 ℃环境经过一定时间扩散才能达到反应平衡。洗涤是ELISA 法操作的重要环节，ELISA 法的原理就是靠洗涤来达到分离复合物及酶标记物的目的，本研究使用手工洗板时要避免孔内洗涤液外溢，以防相邻孔互相污染。显色:通常底物显色在37 ℃10～40 min 反应彻底完成，延长时间颜色也不会再加深。最后，必须采用酶标仪检测，显现出的颜色浅不容被肉眼观察出差别，影响结果的准确性，以保证结果的一致性。

［1］高丽，付红，李慧，等.胶体金试纸法与酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原的比较［J］.中国免疫计划，2007，13 (1):51－53.

［2］徐珊珊，王松云.胶体金法快速检测无偿献血HBsAg 漏检原因分析［J］.江西医学检验，2007，25 (8):333－334.

［3］葛君，王丽娜.影响ELISA 法检测乙型肝炎病毒血清学标志物的因素［J］.国际检验医学杂志，2010，31 (3):289－290.