干扰素-α抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

龙向淑，宋 方，黄 晶，吴 强

(贵州省人民医院 心血管内科， 贵州 贵阳 550002)

干扰素-α抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

龙向淑，宋 方，黄 晶，吴 强*

(贵州省人民医院 心血管内科， 贵州 贵阳 550002)

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)过度增殖是血管成形术后再狭窄、动脉粥样硬化及高血压等血管增殖性疾病的共同病理基础，有效抑制VSMCs增殖对上述疾病的防治具有重要的临床意义。干扰素(Interferon, IFN)具有抗病毒、免疫调节及抑制肿瘤细胞增长等作用，但其对VSMCs增殖的影响及其机制尚未完全明确。本研究探讨IFN-α对大鼠VSMCs增殖的影响及其部分机制，为其临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 动物和试剂(盒)：清洁级SD大鼠(雌性1只，雄性2只)，体质量120～140 g[第三军医大学实验动物中心，合格证号：SCXK(渝)2012-0003]。IFN-α(北京三元基因工程有限公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(Hyclone公司)；细胞周期检测试剂盒(C1052)(碧云天公司)；100 bp DNA Ladder(北京天根公司)；RT-PCR试剂盒(TaKaRa公司)；PCR扩增引物由宝生物工程(大连)有限公司合成(表1)；P204抗体(Santa Cruz公司)；Western 中分子质量蛋白Marker(北京康为世纪生物科技有限公司)。

1.2 细胞培养及实验分组：按文献[1]的方法进行VSMCs培养。取4～6代细胞用于实验。实验分3组，即对照组(control)、IFN-α干预组(IFN)和20% FBS+IFN-α组(F+I)；IFN组用终浓度为2×106U/L IFN-α干预6 h，F+I组予20% FBS刺激12 h后与IFN组同步加IFN-α，继续培养48 h收集细胞。

1.3 MTT实验：按文献[2]的方法操作。

1.4 流式细胞术检测细胞周期：按试剂盒(C1052)说明书操作。

1.5 RT-PCR检测mRNA表达：常规提取总RNA和反转录，定量PCR扩增目的基因。

1.6 Western blot 检测蛋白表达：按文献[2]的方法操作。

表1 引物序列Table 1 The sequences of primers

2 结果

2.1 IFN-α对VSMCs增殖及细胞周期的影响：与对照组比较，IFN组、F+I组的MTT吸光度A值降低(P<0.05)；IFN和F+I组的G0/G1期细胞增多，S期细胞减少(P<0.05)(表2)。

2.2 IFN-α对P204 mRNA及蛋白表达的影响：IFN组、F+I组的P204 mRNA及蛋白表达较对照组升高(P<0.05)(图1，表2)。

3 讨论

VSMCs增殖是血管增殖性疾病重要的病理改变。VSMCs增殖是多阶段及多因子参与的调节过程，抑制VSMCs增殖、迁移以及表型转化等是血管增殖性疾病领域研究的热点和难点。

IFN是一组具有抗病毒、抗增殖、影响细胞生长和分化、调节免疫应答等功能的活性细胞因子家族。IFN与相应受体结合，诱导一系列IFN诱导蛋白的表达而发挥其抗病毒及影响细胞增殖等生物学效应。IFN的抗病毒及免疫调节功效已明确，而其调节细胞生长的功能，如抗增殖、促凋亡或存活、促进衰老和分化及抑制血管生成的作用及机制尚存在争议。P204(interferon-inducible protein 204, P204)是IFN诱导蛋白P200家族的鼠类蛋白成员。近期研究[2]表明，IFN-α可促进P204表达而抑制大鼠主动脉外膜成纤维细胞增殖。本结果显示， IFN-α干预可降低VSMCs细胞活力，阻滞或延缓VSMCs细胞周期由G0/G1期进入S期，在此过程中，伴P204 mRNA和蛋白表达上调；同时，IFN-α可抑制胎牛血清的促VSMCs增殖作用，同样观察到P204 mRNA和蛋白表达上调，更进一步证实，IFN-α可通过上调P204表达抑制VSMCs增殖。

表2 IFN-α对VSMCs 增殖和P204表达的影响Table 2 Effect of IFN-α on proliferation of VSMCs and expression of P204(±s,n=3)

*P<0.05 compared with control.

IFN.IFN-α induction group; F+I.20% FBS+ IFN-α group; control.control group图1 干扰素-α对P204 mRNA及蛋白表达的影响Fig 1 Effect of IFN-α on expression of P204 mRNA and protein in VSMCs

综上所述， IFN-α可通过上调P204表达抑制鼠VSMCs增殖，为血管增殖性疾病的研究和防治展示了新的前景。

[1] 宋方,吴强,陆德琴,等.一套系统培养鼠主动脉血管壁细胞简单可靠的方法[J].中国动脉硬化杂志,2011,19:361- 366.

[2] 宋方,吴强,潭洪文,等.IFNα通过p204抑制大鼠主动脉外膜成纤维细胞增殖[J].基础医学与临床, 2012, 32:1431- 1436.

2013- 09- 26

2013- 11- 22

贵州省优秀科技教育人才省长专项资金(No. 黔省专合字[2009]30号)

*通信作者(correspondingauthor)： gzgywq@126.com

1001-6325(2014)08-1106-02

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