郭氏接骨灵对桡骨不完全性骨折家兔血清碱性磷酸酶及骨痂中钙、磷的调节

唐华羽

（佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003）

骨折是骨遭到外力破坏后其连续性和完整性中断，是最常见的骨科疾病之一。郭氏家族是较著名的中医世家，尤其在外伤有独特的建树。郭氏接骨灵是由郭氏祖传，对粉碎性骨折，骨折不愈合等有促进作用。由于该方秘传，故缺乏系统的药理学实验，毒理学实验，物性及临床研究资料，使该药目前尚停留于经验用药阶段。本研究旨在通过系统的临床前研究和临床试验，为该药的开发推广提供理论及实验依据，为争取申请新药奠定基础。

1 材料与方法

1.1 动物来源与分组

采用贵阳医学院实验动物中心提供一级新西兰家兔40只，体重1.2～2.05kg，雌雄各半，随机分为正常对照组、阴性对照组、阳性对照组（伤科接骨片组）、接骨灵胶囊低剂量组、接骨灵胶囊高剂量组，每组8只。

1.2 药物与试剂

1.2.1 药物

庆大霉素：上海信宜制药总厂。郭氏接骨胶囊：自制。伤科接骨片：上海信宜制药总厂。

1.2.2 试剂

碱性磷酸酶试剂盒：美国贝克曼库尔特公司。10%三氯乙酸溶液：安徽联谊药业股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 骨折家兔制备

取32只家兔用3%戊巴比妥1mL／kg静脉麻醉，无菌条件下手术分离家兔双前肢桡骨，以双层钢锯造成双侧桡骨中下段不完全性骨折，骨折处宽约3mm，深度为桡骨直径的1／2。缝合皮下组织及皮肤，肌注庆大霉素4万U 抗感染。X线片证实造模成功，造模后分为阴性对照组、阳性对照组、接骨胶囊低剂量组、接骨胶囊高剂量组每组8只。

1.3.2 治疗

术后一周后药物治疗。阴性对照组常规喂养；接骨灵胶囊低剂量、高剂量组分别按照0.45g／kg与0.90g／kg体重将药物拌入饲料给药；阳性对照组给伤科接骨片0.42g／kg体重拌入饲料喂养。于上午禁食4h后喂含药饲料，家兔通常于2h内吃完含药饲料，再给予普通饲料。术后每周称体重一次，并根据体重调整给药量。

1.3.3 指标检测

于造模后第10天、20天及30天乙醚麻醉家兔后颈静脉取血2mL，离心取血清置-70℃保存统一测定血清AKP。于第30天处死全部家兔，离断腕关节取完整左侧桡骨，剔除附着的软组织低温干燥至恒重，用10%三氯乙酸水解骨痂，每10mg干样加3mL三氯乙酸，水解三次并合并水解液。用EDTA 络合滴定法测定骨痂中Ca含量；用硫酸亚铁磷钼蓝比色法测定P含量。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0 统计软件，所有数据以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，统计结果显著性以P＜0.05表示。

2 结果

2.1 血清碱性磷酸酶结果分析

接骨胶囊低剂量组和高剂量组均能提高血清碱性磷酸酶水平，且高剂量组作用优于低剂量组。说明郭氏接骨灵能够促进血清中碱性磷酸酶的合成与释放。见表1。

表1 接骨胶囊对骨折家兔血清碱性磷酸酶影响（±s，mmol／L）

表1 接骨胶囊对骨折家兔血清碱性磷酸酶影响（±s，mmol／L）

注：＊与正常对照组相比P＜0.05；＊ 与阳性对照组、低剂量及高剂量组相比P＜0.01；☆△ 与阳性对照组相比P＞0.05；☆ 与高剂量组相比P＜0.05。

2.2 骨痂中Ca及P的结果分析

阳性对照组、接骨灵低剂量组和高剂量组骨痂中的钙磷含量与阴性对照组相比均增高（P＜0.01），说明伤科接骨片和接骨灵胶囊均有增加骨痂中钙磷含量的作用。接骨灵低剂量组与高剂量组相比（P＜0.05），说明高剂量组的作用强于低剂量组。见表2。

表2 接骨胶囊对骨折家兔骨痂中Ca及P的影响（±s，mmol／L）

表2 接骨胶囊对骨折家兔骨痂中Ca及P的影响（±s，mmol／L）

注：＊与正常对照组相比P＜0.05；＊ 与阳性对照组、低剂量及高剂量组相比P＜0.01；☆△ 与阳性对照组相比P＞0.05；☆ 与高剂量组相比P＜0.05。

3 讨论

骨折愈合及修复是一个极其复杂的生物学过程，受到许多因素的影响。在骨折的修复、愈合过程中骨基质中的矿物质成分起到了重要的用。研究证实，成骨细胞分泌的AKP可作为观察骨折愈合的指标，可代表骨重建和成骨细胞活动性增强的指标［1］。本实验中，阴性对照组家兔血清AKP 的水平在第10天时结果明显低于正常对照组，这是由于骨膜受损，成骨细胞分泌AKP能力下降而使其低于正常水平［2］。但是，由于机体有自我修复能力，虽未经任何药物治疗，其水平在第20天、30天时也有一定的升高，说明成骨细胞分泌功能活跃，AKP水平升高。在低剂量组和高剂量组治疗期间，第10天、20天及30天时两组AKP含量就明显升高，但是低剂量组升高没有高剂量组明显，说明高剂量组效果更好。这是由于接骨胶囊中的成分能活血化瘀、刺激成骨细胞分泌活动增强，使血清中AKP的浓度明显升高，促进骨折修复与愈合。同时观察第30天时骨痂中Ca、P的变化发现，在接骨胶囊低剂量及高剂量组Ca、P明显高于阴性对照组，说明药物治疗有效。Ca、P沉积形成的钙盐对骨痂的形成有益，不断进行钙化沉积，不断骨化，可以不断编织骨的形式形成新骨，Ca、P升高能促进骨折愈合［3］。本药目前尚停留于经验用药阶段，故缺乏系统的药理学实验，还需进一步研究提供理论及实验依据。

［1］Lian JB，Gunderg CM.Osterocalcin.Biochemical consideration and clinical applications［J］.Clin Orthop Rel Res，1987，226（2）：267-270

［2］Khandwala HM，Mumm S，Whyte MP.Low serum alkaline phosphatase activity and pathologic fracture：case report and brief review of hypophosphatasia diagnosed in adulthood［J］.Endocr Pract，2006，12（6）：676-681

［3］董华，胡乃武.骨痛仙胶囊对家兔骨折血清碱性磷酸酶、钙、磷影响的实验研究［J］.中医药学报，2003，31（2）：51-52