复方车前子滴丸制备工艺及其含量测定

张雪峰，欧 燕，薛桂蓬

(1．新疆生产建设兵团总医院，新疆 乌鲁木齐 830002;2．新疆药物研究所，新疆 乌鲁木齐 830004)

复方车前子滴丸由车前子、甘草、熟地3味药组方，具有清热化瘀、补肾通淋，主治慢性前列腺炎。方中君药车前子[1]为车前科植物车前草 Plantago asiatica L．或平车前草 Plantago depressa Willd．的干燥成熟种子，具有清热利尿、渗湿通淋、明目祛痰的功效。车前子中含大量黏液质(多糖类化合物)及车前子酸、胆碱、腺嘌呤、琥珀酸、蛋白质、微量元素、桃叶珊瑚苷等黄酮类成分。现代医学研究表明，黄酮类化合物具有明显的抗溃疡、解痉、抗炎、抗菌、抗氧化、抗衰老、增强机体免疫力、软化血管、降血糖、调血脂等生理活性。滴丸剂具有生产周期短、溶出快、生物利用度高等特点。本试验采用单因素及正交试验设计对其成型工艺进行研究[2]，并对滴丸中毛蕊花糖苷的含量进行测定。

1 仪器与试药

DWJ－2000S型自动滴丸机(烟台百药泰中药科技发展有限公司);ZB－1C型智能崩解仪(天津大学精密仪器厂);LibrorAEG－200型电子天平电子恒温水浴锅(北京永光明医疗器械厂);LC－20A型高效液相色谱仪(日本岛津);SPD－20A型紫外检测器;Shimadzu LC－Solution数据工作站;Water Purifier超纯水机(四川沃特尔水处理设备有限公司);KQ－100DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪有限公司)。复方车前子滴丸提取物(新疆生产建设兵团总医院，批号为20100609);毛蕊花糖苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111530－200303);聚乙二醇4000(PEG 4000)、聚乙二醇6000(PEG 6000)(北京海淀会友精细化工有限公司，批号分别为090416，090222);液体石蜡(北京海淀会友精细化工有限公司，批号为091124);二甲基硅油100(天津大茂化学试剂厂)。

2 方法与结果

2．1 滴丸制备

称取药粉与基质(PEG 4000或PEG 6000)适量，混匀，置烧杯中水浴加热，并不断搅拌使熔融，然后将药液加入滴灌，保温10min。待冷凝温度、药液温度等达到要求时，进行滴制。用滤纸吸去丸表面的冷却液，即得复方车前子滴丸。

2．2 制备工艺优选

基质种类及药物与基质配比的考察[3]:采用不同的基质与药粉配比(2．5∶1)，制备滴丸，以滴制情况、硬度、圆整度、溶散时限为评价指标，考察基质种类，结果见表1。可见，采用PEG 4000物料的流动性要比用PEG 6000的流动性要好，但由于中药药粉特殊性质结合试验结果最终选择PEG 6000为基质。在此基础上进一步对药物与基质的配比进行筛选。结果见表2，可见，当药液与基质配比为1∶25和1∶3．0时，均较易滴制，从减少服用量和节约成本的角度考虑，选用药物与基质配比为1∶2．5。

表1 不同基质与药物配比对滴丸成型的影响

表2 药物与基质不同配比对滴丸成型的影响

正交试验优选料液温度、滴速和滴距[4－5]:通过上述试验确定了药粉∶PEG 6000为1∶2．5，在此基础上，对影响滴丸成型的料液温度(因素A)、滴速(因素B)和滴距(因素C)3个因素安排正交试验，每个因素选取3个水平，以丸重变异系数[参照2010年版《中国药典(一部)》附录ⅠK滴丸剂项下质量差异检查法检查]和外观质量(大小均匀、色泽一致、圆整，丸与丸之间不粘连，常温下不软化，满分为10分)为评价指标。优选最佳制备条件。按照表3所列的因素水平进行正交试验安排，选择 L9(34)正交试验表，结果见表4。方差分析结果见表5和表6。由直观分析可见，影响丸重变异系数效果的因素顺序为A＞B＞C，以药液温度影响最大，由于丸重变异系数越小越好，故结果为A2B2C1。经方差分析可见，药液温度对丸重变异系数有显著性影响，滴速和滴距无显著性差异，故选择A2B3C1;影响丸外观质量的因素顺序为A＞C＞B，以药液温度影响最大，结果为A2B2C3。经方差分析可见，药液温度对外观质量有显著性影响，滴速和滴距无显著性差异，故选择A2B3C1。确定最优滴丸成型工艺为药粉与PEG 6000配比为1∶2．5，药液温度为90℃，滴速为每分钟55滴，滴距为6 cm。

表3 因素水平表

表4 正交试验方案与结果 L9(34)

表5 丸重变异系数方差分析结果

表6 外观质量方差分析结果

2．3 最佳工艺验证试验

按照优选出的工艺条件，进行验证试验，所得滴丸圆整度好，溶散时限和丸重差异符合2010年版《中国药典(一部)》附录ⅠK滴丸剂项下规定，验证试验结果见表7。

表7 验证试验结果

2．4滴丸含量测定[6-7]

2．4．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0．2%醋酸溶液(25∶75)圆1位;检测波长:334nm;柱温:35℃;流速:1．0 μg/mL;进样量:10 μL。取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液按拟订色谱条件进样，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2．4．2 溶液制备

取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1 mL含348 μg的溶液，即得对照品贮备液。再精密量取4 mL贮备液，置10 mL容量瓶中，加60%甲醇至刻度，摇匀，制成每1 mL含139．2 μg的溶液，即得对照品溶液。取本品20丸，精密称定，研细，取0．3 g置25 mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，超声处理30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。取缺车前子的滴丸样品20丸，精密称定，研细，取0．3 g置25 mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，超声处理30 min，滤过，滤液作为阴性对照品溶液。

2．4．3 方法学考察

标准曲线制备[8]:精密吸取上述毛蕊花糖苷对照品液(348 μg/mL)0．5，1．0，1．5，2．0，4．0 mL 置 10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成含毛蕊花糖苷为 17．4，34．8，52．2，69．6，139．2 μg/mL 的对照品溶液。分别精密吸取 10 μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以质量浓度(C，μg/mL)为横坐标、峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得标准曲线方程 A=11 355C+10 120，r=0．999 5(n=5)。结果表明，毛蕊花糖苷质量浓度在17．4～139．2 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

稳定性试验:依法制备供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，10 h时进样，测定峰面积，计算毛蕊花糖苷的含量。结果的 RSD为1．89%(n=6)，表明供试品溶液在10 h内稳定。

精密度试验:取上述毛蕊花糖苷对照品溶液(348 μg/mL)1．0 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，重复进样6次。结果的 RSD为0．46%，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品6份，依法制备供试品溶液并测定峰面积，计算毛蕊花糖苷的含量。结果的 RSD为1．36%，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知毛蕊花糖苷含量的样品粉末10份，第1份为空白，其余分3组，各3份，精密加入一定量毛蕊花糖苷对照品，制成高、中、低3个质量浓度，依法制备供试品溶液，测定峰面积，计算回收率。结果毛蕊花糖苷的平均加样回收率为 98．78% ，RSD 为 1．25%(n=9)。

3 讨论

PEG4000，PEG6000是制备固体分散体的常用基质，由于其相对分子质量的不同而使其与药物混合溶融后状态不同，黏度不同，以致滴制过程中难易程度不同。本研究采用可量化指标的丸重变异系数，以及对包括滴制圆整度、硬度、拖尾在内的外观质量来评定工艺的优劣，使用PEG 6000可使滴丸硬度增加，并使黏性适中，容易滴制。冷却液也是影响滴丸制备的重要因素之一，不同冷却液黏度不同，使丸下降速度不同，黏度小的丸下降快就可能产生粘连，黏度太大，丸下降太慢则滴制周期长，效率低;并且冷却液的温度是影响滴丸丸型是否圆整的重要因素，温度太低丸未来得及收缩即凝固定型使丸呈扁型，温度太高丸未凝固完全会产生丸与丸粘连。

车前子在2010年版《中国药典(一部)》中含量测定项下，采用HPLC法(梯度洗脱)测定毛蕊花糖苷和京尼平苷的含量[9]，由于未买到京尼平苷对照品，因此本试验只对车前子中毛蕊花糖苷的含量进行测定。预试验中，曾先后比较了甲醇－0．5%醋酸溶液(40 ∶60)、甲醇 －0．3% 醋酸溶液(35 ∶65)、甲醇 －0．2%醋酸溶液(35∶65，25∶75)、甲醇－0．1%醋酸溶液(15∶85)等。结果在甲醇 －0．2%醋酸溶液(25∶75)条件下测定毛蕊花糖苷，取得了较好效果。

本试验筛选出的复方车前子滴丸工艺简便、可行，评价指标可靠、合理，符合2010年版《中国药典(一部)》对滴丸制剂的要求。

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