高效液相色谱法测定精制红花油中亚油酸含量

2014-11-08韩红梅刘艳丽刘军锋

中国药业 2014年3期

韩红梅，高钧，郝福，刘艳丽，刘军锋

(神威药业集团有限公司·河北省中药注射剂工程技术研究中心，河北石家庄 051430)

五福心脑清软胶囊含有精制红花油、冰片、维生素E和维生素B6，具有活血散瘀、通经止痛、开窍醒神的功效，可治疗瘀血阻滞所致的中风、中经络、半身不遂、口眼歪斜、胸痹心痛。精制红花油为其主要药效成分，是从红花油皂化物中提取的以亚油酸为主的不饱和脂肪酸混合物。目前，油脂中的脂肪酸、游离脂肪酸的分析、测定多采用甲酯衍生化－气相色谱法[1－2]，但该法前处理烦琐、费时，误差较大，且测定的是油脂中脂肪酸甲酯和游离脂肪酸的总和，不能单独测定游离脂肪酸。也有采用超高效液相色谱－蒸发光散射方法直接测定游离脂肪酸含量的报道[3]，而采用高效液相色谱－紫外法测定游离脂肪酸含量，尚未见报道。笔者为控制产品质量，建立了测定精制红花油中亚油酸含量的高效液相色谱(HPLC)法，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪，紫外检测器。亚油酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111622－200301，规格为每支0．2 mL);精制红花油(神威药业集团有限公司，批号为20120301，20120302，20120303，20120304，20120305，20120306，20120307，20120308，20120309，20120310);乙腈，甲醇(色谱纯，美国Fisher公司);水为重蒸水。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent SB －C18柱 (250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:乙腈－水(75∶25);柱温:35℃;检测波长:203 nm;流速:1 mL/min。在此条件下，亚油酸对照品和精制红花油样品色谱图见图1。

2．2 溶液制备

称取精制红花油约140 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解定容，再精密吸取1 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密称取亚油酸对照品125．7 mg，置25 mL容量瓶中，甲醇溶解定容，精密吸取1 mL，置 25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2．3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取亚油酸对照品溶液 0．5，1．0，3．0，5．0，7．0，10．0 μL，依法进样分析，测定峰面积积分值，以亚油酸进样量(X)为横坐标、峰面积积分值(Y)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=1 732．9 X+12．38(r=0．999 9，n=6)。结果表明，亚油酸进样量在0．09～1．8 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取亚油酸对照品溶液5 μL，依法进样分析，连续6次。结果峰面积的 RSD为0．6%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品(批号为20120301)6份，依法制备供试品溶液，各吸取5 μL进样分析，采用标准曲线法计算亚油酸含量。结果含量的 RSD为1．0%(n=6)，表明该方法重复性良好。

加样回收试验:取9份精制红花油样品(批号为20120301，含量为90．6%)适量，精密称定，分别加入低、中、高3个质量浓度的亚油酸对照品溶液5 mL，按供试品溶液制备下方法制备溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 亚油酸加样回收试验结果(n=9)

稳定性试验:取同一供试品溶液(批号为20120309)，分别于制备后 0，1，2，4，8，12，24 h 时测定。结果峰面积的 RSD=1．05%(n=7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2．4 样品含量测定

分别称取各批精制红花油样品，精密称定，依法制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液及供试品溶液，依法测定，计算亚油酸含量。结果见表2。

3 讨论

精制红花油为五福心脑清软胶囊的主要药效成分，红花油中含有多种游离脂肪酸。游离脂肪酸熔点较高，不适合直接采用气相色谱法测定，传统方法采用甲酯衍生化，再用气相色谱法测定。该方法前处理烦琐、费时，误差较大。高效液相色谱法可不进行前处理而直接测定游离脂肪酸的含量。本试验中试用203 nm波长紫外末端吸收检测法，方法学考察表明，各项指标均符合要求，可作为精制红花油中亚油酸含量测定方法。