文冠木中杨梅素的含量测定＊

杨巧荷，李树明，董 玉

(内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特 010059)

文冠木 Xanthoceras sorbifolia Bunge为无患子科文冠果属文冠果的干燥茎枝，分布于东北、华北、西北等地，主产于内蒙古，蒙药名称西拉·森登，能祛风湿、消肿止痛、敛干黄水，临床用于治疗风湿性关节炎、风湿内热、皮肤风湿等症[1]。文冠木中含有黄酮、香豆素及其苷类化合物[2]。杨梅素为其主要成分，杨梅素大剂量给药时具有祛风除湿、温经止痛、活血通络等功效。杨梅素外用可明显抑制大鼠佐剂性关节炎致炎局部的早期炎性反应，可明显抑制角叉菜胶所致大鼠足趾的炎性反应，减轻大鼠尿酸钠关节炎的致痛程度，并可抑制慢性肉芽肿的形成[3]。杨梅素在体内具有抗菌和抗炎活性，对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、A型溶血性链球菌的感染受试小鼠有不同程度保护作用;对二甲苯致小鼠耳肿胀及琼脂致大鼠肉芽肿形成均有一定抑制作用[4]。为此，笔者确定以主要有效成分杨梅素的含量来控制文冠木的内在质量。

1 仪器与试药

Hitachi L2000型高效液相色谱仪，Ezchrom EliteTMClient/Server for Hitachi软件系统;Sartorius－BS224S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统公司);KQ－250DE型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。杨梅素对照品(自制，采用峰面积归一化法测定，其含量为99．36%);文冠木药材饮片(内蒙古天力药业有限责任公司，产地为内蒙古，批号分别为20060915，20070803，20071012，经内蒙古医学院药学院乔俊缠教授鉴定为文冠木 Xanthoceras sorbifolia Bunge的干燥茎);甲醇(Sigma－Aldrich)为色谱纯;蒸馏水(屈臣氏)。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:Kromasil ODS C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:甲醇 － 水 － 冰醋酸(65 ∶35 ∶0．1);流速:1．0 mL/min;检测波长:300 nm;柱温:30℃。在此色谱条件下，芦丁和杨梅素分离度良好，并与其他成分能达到基线分离。

2．2 溶液制备

称取文冠木药材6 g，精密称定，置圆底烧瓶中，乙醇回流提取2次，每次趁热用棉花粗滤，合并2次的提取液，回收溶剂定容至10 mL，得供试品贮备溶液。精密量取文冠木提取液1．0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0．45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的杨梅素对照品4．6 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为0．184 mg/L的杨梅素贮备液;精密吸取杨梅素贮备液2．0 mL置10 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，即得每1 mL中含杨梅素0．0 368 mg的对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液 5，10，15，20，25 μL，按拟订色谱条件进样测定峰面积。以色谱峰面积(Y)为纵坐标、对照品进样量(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=183 303．804 3 X －505．100 0，r=0．999 9(n=5)。结果表明，杨梅素进样量在0．184～0．920 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取同一供试品溶液20 μL，注入高效液相色谱仪，连续测定5次，记录其峰面积。结果的 RSD为1．44%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取供试品溶液20 μL，分别在制备后0，1，2，3，5，6，7 h 时进样，测定峰面积。结果的 RSD 为 2．87%(n=7)，表明供试品溶液在7 h内稳定。

重复性试验:分别取同一批供试品，按拟订方法重复制备样品5次，进样测定。结果杨梅素含量平均值为0．083 2%，RSD为2．30%，表明方法重复性良好。

加样回收试验:取文冠木约3 g(杨梅素的含量为0．083 2%)共6份，精密称定，分别精密加入含杨梅素为0．282 g/L的对照品溶液1．0 mL，置10 mL容量瓶中，按拟订方法制备供试品溶液，在拟订色谱条件下测定，计算回收率。结果见表1。

表1 杨梅素加样回收试验结果(n=6)

2．4 样品含量测定

按照样品制备方法，分别用文冠木药材制备3批样品溶液，每个提取物分别精密称取5份样品，依法制备，按拟订色谱条件进样测定。结果批号分别为401005732，401005311，601000186的3批样品中，杨梅素平均含量分别为0．067 2%，0．085 7%，0．084 0%。

3 讨论

本课题组前期对文冠木化学成分[5]进行初步研究，并制订其中总黄酮含量的测定方法[6]。本试验建立其中活性指标性成分杨梅素的含量测定方法，以更好地控制文冠木的质量。

杨梅素为自制，采用反复硅胶加压柱色谱法、Sephadex LH－20色谱法及重结晶方法进行分离，可有效地与其他成分分开，得到杨梅素对照品。本研究首次采用高效液相色谱法测定文冠木提取物中杨梅素的含量，选择流动相为甲醇－水－冰醋酸(65∶35∶0．1)，结果杨梅素在10～30 min之间出峰，能与其他成分达到基线分离，并分别对精密度、稳定性、重现性和回收率进行了考察。该方法准确可靠，操作简单，回收率合格，可作为文冠木质量控制的方法。

[1]卫生部生物制品检定所，云南省药品检验所．中国民族药志(第一卷)[M]．北京:人民卫生出版社，1984:130．

[2]张文霞，包文芳．文冠木化学成分的研究[J]．药学学报，2000，35(2):124－127．

[3]李小万，司学玲，于占华，等．杨梅素抗类风湿性关节炎作用研究[J]．中国医药指南，2011，9(25):212 －214．

[4]张莉静，王明谦．杨梅素体内抗菌抗炎药效学研究[J]．时珍国医国药，2010，21(12):3 221 －3 222．

[5]董 玉，王宏伟，陈朝军，等．文冠木化学成分的研究[J]．北京中医药大学学报，2008，31(12):844－846．

[6]董 玉，王爱民，陈朝军，等．文冠木中总黄酮的含量测定方法研究[J]．内蒙古医学院学报，2008，30(5):364 －366．