丁香叶的提取工艺研究

2014-11-02张继业杨范莉西安交通大学药学院西安7006西安交通大学第一附属医院西安7006

西北药学杂志 2014年4期

张继业，杨范莉，童华（.西安交通大学药学院，西安 7006；2.西安交通大学第一附属医院，西安 7006）

丁香叶folium syringae来源于木犀科Oleaceae丁香属Syringa植物紫丁香Syringa oblata Lindl.、朝鲜丁香Syringa diatata Nakai、洋丁香Syringa Vulgaris L.的干燥叶［1］，具有抗菌消炎、抗病毒［2－3］、降压、镇咳祛痰、保肝护胆等作用［2，4－5］，且毒副作用较小，其有效成分为原儿茶醛及原儿茶酸［2］。提取工艺研究是中药有效成分研究的重要组成部分，本文以原儿茶醛及原儿茶酸为指标成分初步地研究提取方法，并测定了有效成分的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC－10A 液相色谱系统，包括 LC－10ATvp色谱泵，SPD－10Avp检测器及CLASS－vp工作站（日本岛津）；TGL－16LC型离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1.2 试药紫丁香叶（西安市药材市场，经鉴定为药典规定药材）；原儿茶酸（批号110809－200604）和原儿茶醛对照品（批号11810－200506）购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 原儿茶醛和原儿茶酸的含量测定方法采用高效液相色谱法测定。色谱条件：色谱柱：Planetsil C18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇－水－冰醋酸（12∶78∶0.5）；流速：1.0mL·min－1；检测波长：280nm；柱温：30℃。

2.2 提取方法

2.2.1 溶剂倍数的影响取干燥的紫丁香叶粉碎，过120目筛，备用。取3份紫丁香叶细粉1g，精密称定，置于圆底烧瓶中，分别加入50，100和200mL水，回流提取5h，滤过；用盐酸调节滤液pH至2，用乙酸乙酯萃取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液；挥干溶剂，残渣加甲醇适量溶解，转移至10mL量瓶中，定容，滤过，取续滤液进样10μL分析。结果见表1。

2.2.2 提取时间的影响取3份紫丁香叶细粉1g，精密称定，置于圆底烧瓶中，加入100mL水，分别回流提取3，5和7h，滤过；用盐酸调节滤液pH至2，用乙酸乙酯萃取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液；挥干溶剂，残渣加甲醇适量溶解，转移至10mL量瓶中，定容，滤过，取续滤液进样10μL分析。结果见表1。

2.2.3 回流次数的影响取3份紫丁香叶细粉1g，精密称定，置于圆底烧瓶中，加入100mL水，均回流提取5h，分别回流1次，2次（3h，2h），3次（2，2，1h）后，提取液滤过；盐酸调节滤液pH至2，用乙酸乙酯萃取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液；挥干溶剂，残渣加甲醇适量溶解，转移至10mL量瓶中，定容，滤过，取续滤液进样10μL分析。结果见表1。

表1 不同提取因素对指标成分含量的影响Tab.1 The influence of extraction factors on the component content

综上所述，对紫丁香叶中原儿茶酸和原儿茶醛同时进行提取，选择水为溶剂，当样品量为1g、溶剂量为100mL、回流时间为5h、回流3次时（2h，2h，1h），提取率相对较高。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性在所选色谱条件下，样品中原儿茶酸和原儿茶醛峰形和分离度良好，如图1所示，该方法具有良好的专属性。

2.3.2 标准曲线分别精密吸取5，7.5，10，12.5和15μL的原儿茶酸和原儿茶醛对照品混合溶液，进样，测定峰面积积分值，以进样量（μg）为横坐标、峰面积为纵坐标进行回归，得到的线性回归方程分别为：Y＝28 294 X＋12 322，r＝0.999 7（线性范围0.073～0.219μg）；Y ＝22 294 X ＋3 694.4，r＝0.999 6（线性范围0.024 5～0.073 5μg）。

图1 HPLC图A.混合对照品；B.样品；1.原儿茶酸；2.原儿茶醛Fig.1 HPLC chromatogramsA.mixed reference；B.sample；1.protocatechuic acid；2.protocatechualdehyde

2.3.3 精密度原儿茶酸和原儿茶醛对照品溶液精密度：根据样品所测的原儿茶酸的质量浓度，精密量取原儿茶酸和原儿茶醛混合对照品储备液5mL，稀释到10mL作为原儿茶酸和原儿茶醛的混合对照品溶液，在相同条件下，连续进样6次，测得其精密度RSD为0.7%和0.8%。

样品精密度：精密称取柴丁香叶细粉1.0g，用100倍量的水回流提取3次（第1次2h，第2次2h，第3次1h）后，滤过，滤液浓缩至100mL，用盐酸调节pH至2.0，用乙酸乙酯萃取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液，挥干，残渣加甲醇溶解并定容至10 mL的量瓶中，滤过。精密吸取续滤液10μL，重复进样6次，测定其峰面积。原儿茶酸和原儿茶醛的RSD分别为1.0%和2.4%。

2.3.4 重复性取同一批紫丁香叶药材约1.0g，精密称定，共5份，按供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱条件测定，原儿茶酸和原儿茶醛含量的RSD分别为1.8%和1.4%。

2.3.5 稳定性精密称取紫丁香叶药材1.0g，按供试品溶液制备方法制备，并在配制好的0，2，4，8，12，24和48h测定，结果表明样品溶液在48h内稳定。

2.3.6 加样回收率取已知含量的样品，研细，精密称取6份（每份约0.5g），分别置于索氏提取器中，再精密量取适量原儿茶醛及原儿茶酸对照品溶液（预先配制的与样品中原儿茶醛及原儿茶酸含量相当的对照品溶液），分别加入样品中，按供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱条件测试，计算回收率。原儿茶醛回收率为98.6%，RSD为1.50%；原儿茶酸回收率为98.2%，RSD为0.889%（n＝6）。

2.4 不同批次药材含量测定取干燥的紫丁香叶粉末约1g，精密称定，按供试品处理方法处理，进样10μL分析，测得峰面积积分值，计算原儿茶酸和原儿茶醛含量，结果见表2。