APRIL和XIAP在结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜中的表达及意义

袁德汉+康举龄+苏艳桃+温志雄+唐华中

[摘要] 目的 探讨增殖诱导配体（APRIL）和X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）在结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织中的表达及其临床意义。 方法 应用免疫组织化学EnVision法检测结肠癌组织标本60例、结肠腺瘤30例及正常结肠黏膜组织30例中APRIL和XIAP的表达。 结果 结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织中APRIL和XIAP的阳性表达率均呈逐渐降低趋势，3组间APRIL和XIAP的阳性表达率比较，差异有统计学意义（P<0.01）。结肠癌组织中APRIL的阳性表达与组织分级、淋巴结转移以及浸润程度密切相关（P<0.01）；XIAP的阳性表达与Dukes分期、淋巴结转移以及浸润程度密切相关（P<0.01）。 结论 APRIL和XIAP的表达增高不仅可能在正常黏膜-腺瘤-癌的病理形成过程中起一定作用，更与结肠癌浸润、转移等恶性生物学行为有密切关系。

[关键词] 结肠癌；结肠腺瘤；免疫组织化学；增殖诱导配体；X连锁凋亡抑制蛋白

[中图分类号] R735.3+5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）09（a）-0012-03

Expression and clinical significance of APRIL and XIAP in colon carcinoma，colon adenoma and normal colon mucosa

YUAN De-han1 KANG Ju-ling2 SU Yan-tao3 WEN Zhi-xiong1 TANG Hua-zhong1

1.Department of General Surgery，Shijie Hospital of Dongguan City in Guangdong Province，Dongguan 523290，China；2.Department of Pathology，the First Affiliated Hospital of Jinan University，Guangzhou 510000，China；3.Department of Nursing，Shijie Hospital of Dongguan City in Guangdong Province，Dongguan 523290，China

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of a proliferation-inducing ligand （APRIL） and X-linked inhibitor of apoptosis protein （XIAP） in colon carcinoma，colon adenoma and normal colon mucosa. Methods The expression of APRIL and XIAP was detected by immunohistochemical EnVisionTM plus non-hiotin technique in 60 cases of colon carcinoma and 30 cases of colon adenoma，30 cases of normal colon mucosa. Results The positive expression rates of APRIL and XIAP in colon carcinoma，colon adenoma and normal colorectal mucosa decreased gradually.There was significant difference among the three groups （P<0.01）.The expression of XIAP were closely related to Dukes clinical stage，lymph node metascasis and the degree of infiltration （P<0.01）.The expression of APRIL were closely related to differentiation degree，lymph node metascasis and the degree of infiltration （P<0.01）. Conclusion The high expression of APRIL and XIAP may play important roles in the carcinogenesis of colon carcinoma and it is involved in the metastasis and infiltration.

[Key words] Colon carcinoma；Colon adenoma；Immunohistochemistry；A proliferation-inducing ligand；X-linked inhibitor of apoptosis protein

目前研究已经发现大多数结肠癌的发生都经过了正常黏膜-腺瘤-癌的过程，但其发生机制至今尚不清楚。近年来一些研究发现，肿瘤的自主增殖和凋亡失调是结肠癌的“腺瘤-癌演续学说”中的重要机制[1]。增殖诱导配体（a proliferation-inducing ligand，APRIL）属于肿瘤坏死因子超家族新成员，它在消化系肿瘤中的高表达已经引起学者们的广泛关注。X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）是凋亡抑制蛋白（inhibitors of apoptosis，IAPs）家族中最重要的caspase抑制物[2]。在体外实验中发现，APRIL表达具有抗凋亡能力，推测可能与APRIL上调X相联系的XIAP，使caspase-3活性降低有关[3]。本研究采用免疫组织化学法检测结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织中APRIL和XIAP的表达，旨在进一步阐明正常黏膜-腺瘤-癌的病理机制及两者在此过程中所起的作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集2009年8月16日～2010年2月15日东莞市石碣医院和暨南大学附属第一医院手术切除结肠癌标本60例、结肠腺瘤30例及正常结肠黏膜组织30例，均行10%甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm连续切片，均经病理学证实。

1.2 方法

采用免疫组织化学EnVision法检测结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织中APRIL和XIAP的表达，兔抗人多克隆抗体APRIL和XIAP、EnVision试剂盒、DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。操作程序严格按照试剂盒说明书进行。染色结果判断：APRIL和XIAP表达于癌细胞胞质，呈黄色或棕黄色颗粒状。判断标准：①阳性细胞着色程度：胞质和（或）胞膜基本不着色记0分，染色棕黄记1分，染色棕色记2分，染色棕褐色记3分；②计算阳性细胞的百分数：无阳性表达计0分；≤25%记1分；26%～50%记2分；51%～75%记3分；≥76%记4分。将着色程度和阳性细胞百分率的评分相加，0分为（-），1～2分为（+），3～4分为（++），5～6分为（+++），（-）和（+）为阴性表达，（++）和（+++）为阳性表达。

1.3 统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件进行数据处理，计数资料采用卡方检验，相关性分析采用直线相关法，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 APRIL和XIAP在结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织中表达的比较

结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织中APRIL和XIAP的阳性表达率均呈逐渐降低趋势，3组间APRIL和XIAP的阳性表达率比较，差异有统计学意义（P<0.01）（表1）。

表1 APRIL和XIAP在结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织中

表达的比较（n）

2.2 结肠癌中APRIL和XIAP的表达与临床病理指标的关系

结肠癌组织中APRIL的阳性表达与组织分级、淋巴结转移以及浸润程度密切相关（P<0.01），与年龄、性别、肿瘤大小、Dukes分期无关（P>0.05）。结肠癌组织中XIAP的阳性表达与Dukes分期、淋巴结转移以及浸润程度密切相关（P<0.01），与年龄、性别、肿瘤大小、组织分级无关（P>0.05）（表2）。

表2 结肠癌中APRIL和XIAP的表达与临床病理指标的关系

2.3 结肠癌中APRIL和XIAP表达的相关性

结肠癌组织中XIAP、APRIL的表达呈正相关性（r=0.519，P<0.05）（表3）。

表3 结肠癌组织中XIAP、APRIL表达的相关性（n）

3 讨论

细胞增殖与凋亡是肿瘤发生、发展过程中的一对矛盾，两者间的动态平衡状况与肿瘤的发生、发展及浸润转移等生物学行为密切相关。结直肠黏膜上皮细胞增殖和凋亡在正常生理状况下处于相对平衡而不断的更新状态，以保证其结构和功能的完整性。一旦这种平衡被打破，组织结构即受到破坏或肿瘤形成[4-5]。

APRIL亦称为TALL-2、TRDL-1和TNFSF-l3a，是1998年由Hahne等首先发现并克隆成功的肿瘤坏死因子，其在多种肿瘤细胞和组织，特别是消化道肿瘤中高表达，提示APRIL过表达在多种肿瘤细胞的增殖、存活及肿瘤形成过程中有重要作用[6-7]。过往研究发现，中、重度异型增生胃肠组织以及原位癌、浸润癌组织中的APRIL表达显著高于正常胃肠黏膜，且APRIL在癌组织中的表达显著高于中、重度异型增生胃肠组织，提示APRIL可能在胃癌、结肠癌发生、发展过程中起重要作用，有可能成为其早期诊断和抗癌治疗的靶分子。虽然多种消化系肿瘤中APRIL表达都增高，但具体作用机制目前还不十分清楚。

随着结直肠癌分子水平研究的深入，发现细胞凋亡受多种基因、蛋白表达水平的调控，而且这些调控之间形成了复杂密切的网络联系，有的甚至起到“开关”样的作用。XIAP能够对抗各种凋亡诱导因素，抵抗细胞凋亡，被认为是凋亡抑制蛋白家族的成员中作用最强的一种。它在胰腺癌、乳腺癌、大肠癌、鼻咽癌等细胞系中均呈高表达，且对肿瘤发生、发展及预后有多方面的影响[8-10]。因此，针对XIAP可能成为防治恶性肿瘤发生、发展潜在的分子靶点。但是XIAP在结肠癌中的表达状况及其与肿瘤发生、发展和预后的关系仍存在争议，有待进一步研究。

本研究结果发现，结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织中APRIL和XIAP的阳性表达率均呈逐渐降低趋势，3组间APRIL和XIAP的阳性表达率差异有统计学意义（P<0.01），说明APRIL和XIAP的高表达在结肠癌的发生过程中起重要作用，结肠腺瘤阶段就已经存在两者表达增高的现象，而在结肠癌组织中表达更显著，提示两者可能在结肠癌病变演进过程中呈累积和渐进的趋势，可能通过打破细胞增殖与凋亡的平衡状况，促进细胞发生恶性增殖。

本研究结果还发现，结肠癌组织中APRIL的阳性表达与组织分级、淋巴结转移以及浸润程度密切相关（P<0.01），即组织分级高、有淋巴结转移、浸润浆膜/浆膜外者的APRIL的阳性表达明显高于组织分级低、无淋巴结转移、浸润深度未穿透浆膜者。结肠癌组织中XIAP的阳性表达与Dukes分期、淋巴结转移以及浸润程度密切相关（P<0.01），即有淋巴结转移、浸润浆膜/浆膜外、Dukes C+D期者的XIAP的阳性表达明显高于无淋巴结转移、浸润深度未穿透浆膜、Dukes A+B期者。表明APRIL和XIAP的表达增高不仅可能是结肠癌的形成过程中的重要机制，更与结肠癌浸润、转移等恶性生物学行为存在一定关系，随着结肠癌恶性演进，两者有相应的表达变化。提示两者可能成为结肠癌靶向治疗的新分子靶点，并具有一定预测结肠癌发生、发展、浸润、转移和预后的临床参考价值，对延缓肿瘤复发、改善患者的生存率有重要意义[11-13]。

在体外实验中发现，APRIL表达具有抗凋亡能力，推测可能与APRIL上调X相联系的XIAP，使caspase-3活性降低有关。本研究也分析了结肠癌组织中APRIL和XIAP表达的关系，结果发现结肠癌组织中XIAP、APRIL的表达呈正相关（r=0.519，P<0.05），提示两者在结肠癌发生、发展过程中具有相互协同的作用，但两者相互之间的作用机制仍有待进一步深入研究。

[参考文献]

[1] 唐道爱，陆建波.细胞增殖和凋亡与结直肠癌的发生发展[J].医学综述，2011，l7（9）：1321-1323.

[2] 黄永平，何健，郭婷.鼻咽癌组织中XIAP和caspase-3的表达及意义[J].中国现代药物应用，2011，5（12）：47-48.

[3] Thanqarajh M，Mastemlan T，Hillert J，et al.A proliferation-inducing ligand（APRIL） is expressed by astrocytes and is increased in multiple sclerosis[J].Scand J Immunol，2007，65（1）：92-98.

[4] 刘继洪，潘月龙，姚航平.小白菊内酯诱导结肠癌细胞凋亡及对Caspase-3，Caspase-9表达的影响[J].中国药物与临床，2009，9（8）：701-703.

[5] Ramakrishnan G，Lo Muzio L，Elinos-Báez CM，et al.Silymarin inhibited proliferation and induced apoptosis in hepatic cancer cells[J].Cell Prolif，2009，42（2）：229-240.

[6] Chiu A，Xu W，He B，et al.Hodgkin lymphoma cells express TACI and BCMA receptors and generate survival and proliferation signals in response to BAFF and APRIL[J].Blood，2007，109（2）：729-739.

[7] Haiat S，Billard C，Quincy C，et al.Role of BAFF and APRIL in human B-cell chronic lymphocytic leukaemia[J].Immunology，2006，118（3）：281-292.

[8] 黄永平，何健，郭婷.鼻咽癌组织中XIAP和caspase-3的表达及意义[J].中国现代药物应用，2011，5（12）：47-48.

[9] Takeuchi H，Kim J，Fujimoto A，et al.X-linked inhibitor of apoptosis protein expression level in colorectal cancer is regulated by hepatocyte gowth factor/C-met pathway via Akt signaling[J].Clin Cancer Res，2005，11（21）：7621-7628.

[10] Ding X，Mohd AB，Huang Z，et al.MLH1 expression sensitises Ovarian cancer cells to cell death mediated by XIAP inhibition[J].Br J Cancer，2009，21，101（2）：269-277.

[11] 彭万仁，付卫争，孙国平，等.丹皮酚对人肝癌BEL-7402细胞凋亡和COX-2、Survivin、XIAP、c-IAP1表达的影响[J].中国药理学通报，2010，5（6）：41-45.

[12] 刘静，蒋常文.X连锁凋亡抑制蛋白XIAP肿瘤相关性研究现状[J].医学综述，2009，7（19）：80-82.

[13] 关婧，孙爱民，王莉慧，等.慢病毒介导RNAi抑制大肠癌细胞APRIL表达对化疗敏感性的影响[J].南方医科大学学报，2011，12（9）：138-142.

（收稿日期：2014-06-16 本文编辑：郭静娟）

在体外实验中发现，APRIL表达具有抗凋亡能力，推测可能与APRIL上调X相联系的XIAP，使caspase-3活性降低有关。本研究也分析了结肠癌组织中APRIL和XIAP表达的关系，结果发现结肠癌组织中XIAP、APRIL的表达呈正相关（r=0.519，P<0.05），提示两者在结肠癌发生、发展过程中具有相互协同的作用，但两者相互之间的作用机制仍有待进一步深入研究。

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[12] 刘静，蒋常文.X连锁凋亡抑制蛋白XIAP肿瘤相关性研究现状[J].医学综述，2009，7（19）：80-82.

[13] 关婧，孙爱民，王莉慧，等.慢病毒介导RNAi抑制大肠癌细胞APRIL表达对化疗敏感性的影响[J].南方医科大学学报，2011，12（9）：138-142.

（收稿日期：2014-06-16 本文编辑：郭静娟）

在体外实验中发现，APRIL表达具有抗凋亡能力，推测可能与APRIL上调X相联系的XIAP，使caspase-3活性降低有关。本研究也分析了结肠癌组织中APRIL和XIAP表达的关系，结果发现结肠癌组织中XIAP、APRIL的表达呈正相关（r=0.519，P<0.05），提示两者在结肠癌发生、发展过程中具有相互协同的作用，但两者相互之间的作用机制仍有待进一步深入研究。

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[12] 刘静，蒋常文.X连锁凋亡抑制蛋白XIAP肿瘤相关性研究现状[J].医学综述，2009，7（19）：80-82.

[13] 关婧，孙爱民，王莉慧，等.慢病毒介导RNAi抑制大肠癌细胞APRIL表达对化疗敏感性的影响[J].南方医科大学学报，2011，12（9）：138-142.

（收稿日期：2014-06-16 本文编辑：郭静娟）