苯丁酸钠对体外人肺腺癌细胞A549的影响

朱 莹，张灿珍

(1.郑州大学附属郑州中心医院肿瘤科，河南 郑州450007;2.云南省肿瘤医院干疗科，云南昆明650118)

苯丁酸钠(sodium phenylbutyrate，PB)是一种广谱的诱导分化新药，在体外对多种实体肿瘤细胞均有抑制其肿瘤细胞生长的作用［1－3］。为探讨PB对肺腺癌的作用，作者初步观察了苯丁酸钠对体外人肺腺癌细胞A549生长的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 人肺腺癌细胞A549的细胞株由云南省肿瘤研究所保存;RPMI-1640培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司，MTT、PB分别购自美国Amresco公司、美国Alexis公司;流式细胞仪购自美国Beckman Coulter公司。人肺腺癌细胞A549用体积分数10%胎牛血清的RPMI-1640培养基，于37℃、体积分数5%CO2的培养箱中培养。

1.2 MTT法检测细胞生长情况 将调整浓度后的人肺腺癌细胞A549的细胞悬液接种到96孔板上，待细胞完全贴壁，分组，每组4孔，重复3次。加培养基至空白孔中设为空白对照组;在空白孔中只培养细胞设为对照组;实验组:培养细胞，并分别加入 4 000 μg·mL－1、2 000 μg·mL－1、1 000 μg·mL－1、500 μg·mL－1、250 μg·mL－1的 PB。分别作用 48、72、96 h 后每孔加入 20 μL 5 mg·mL－1的 MTT，终止培养后上酶标仪测定吸光度值(A值)，计算出抑制率，其中抑制率=(1－实验组A值/对照组A值)×100%。

1.3 流式细胞术检测细胞周期和凋亡的改变 搜集不同实验组的人肺腺癌细胞 A549，用0.01 mol·L－1的PBS洗涤，离心，制成细胞悬液，加入5 μL鸡血红细胞;破膜、避光染色等处理后用流式细胞仪分析计算各周期细胞的百分率及细胞凋亡率。

1.4 统计学处理 采用SPSS 11.5进行数据分析，计量数据采用±s表示，比较用单因素方差分析，两两比较用SNK-q检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 MTT法检测PB对肺癌细胞A549的增殖的抑制作用 见表1。

表1 PB作用后人肺腺癌细胞A549增殖抑制率比较 %

2.2 流式细胞术分析PB对人肺癌细胞A549的细胞周期和凋亡率的影响 见表2、3。

表2 PB作用48 h后人肺腺癌细胞A549的细胞周期和凋亡率的变化 %

表3 PB作用72 h后人肺腺癌细胞A549的细胞周期和凋亡率的变化 %

3 讨论

本研究发现，PB在体外浓度低至250 μg·mL－1已对人肺腺癌细胞 A549产生明显抑制作用，500 μg·mL－1PB在体外作用于人肺腺癌细胞A549 72 h以后，G0/G1期细胞明显增加，而相应S期细胞减少，这提示PB对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用可能原因是:肿瘤细胞周期的分布遭到改变，细胞向S期转化受阻，从而致使多数肿瘤细胞停滞于G0/G1期，细胞内DNA合成和有丝分裂减少，促进肿瘤细胞的分化。PB通过活化肿瘤细胞内Bax和Bak等促凋亡蛋白，抑制p21、ras蛋白的异戊烯化及胆固醇的合成，诱导肿瘤细胞凋亡［4－7］。本研究发现，PB在体外能诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡，凋亡率达9.3%，提示PB在体外抑制肺癌细胞的机制之一是诱导细胞凋亡。

以上研究结果表明，PB在体外对人肺腺癌细胞A549有明显的增殖抑制作用，且能诱导其凋亡，这提示PB可用于肺癌的临床治疗，值得进一步研究。

［1］朱莹，张灿珍，朱岩，等.苯丁酸钠体外对YTMLC-90细胞生长的影响［J］.郑州大学学报:医学版，2010，45(3):493 －495.

［2］刘向光，黎禅玲，简晓红.苯丁酸钠对SHG-44胶质细胞瘤株的抗肿瘤作用机制研究［J］.肿瘤药学，2011，1(6):493 －496.

［3］Yu W，Wang J，Jin J，et al.Heat shock protein 90 inhibition results in altered downstream signaling of mutant KIT and exerts synergistic effects on Kasumi-1 cells when combining with histone deacetylase inhibitor［J］.Leuk Res，2011，35(9):1212 －1218.

［4］刘奇，陈德兴，赵吉生.苯丁酸钠对胃癌细胞株SGC-7901的增殖抑制作用［J］.中国老年学杂志，2012，32(22)4960 －4961.

［5］王迎春，杨旭，金青梅.苯丁酸钠对人肝癌HepG2.2.15细胞凋亡及乙型肝炎病毒指标的影响［J］.临床肿瘤学杂志，2013，18(11)，970 －973.

［6］罗晓华，许雅娟，崔金全，等.苯丁酸钠对宫颈癌Hela细胞增殖及p21WAF1/CIP1和CDK7表达的影响［J］.中国妇幼保健，2011，26(4):604 －607.

［7］Kim H，Kim SN，Park YS，et al.HDAC inhibitors downregulate MRP2 expression in multidrug resistant cancer cells:implication for chemosensitization［J］.Int J Oncol，2011，38(3):807 － 812.