糕点中丙酸钙检测方法研究

刘莹　刘丽兰　陈双

[摘 要] 建立一种梯度洗脱反相高效液相色谱 （H P LC ）-二极管阵列检测器测定糕点中丙酸钙的方法。色谱柱为C18（4.6mm x150mm ， 5μm ），流动相为1.5g/L 的磷酸氢二铵酸性条件，在不同检测波长下进行检测，能够进行定性和定量的研究。结果表明，丙酸钙的出峰时间约为3.5min，样品检出限为0.03g/kg，线性回归方程相关系数r2=0.99990，方法回收率90% -101%。所建立的方法简单快速准确，实用性强。

[关键词] 高效液相色谱法；糕点；食品添加剂；丙酸钙

中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：2095-5200（2014）05-076-03

[Abstract] A method was established to determine calcium propionate in cake by a gradient RP highperformance liquid chromatography （ HPLC） with diode arraydetector. The compound was separated by a C18（4.6mm×150m m ， 5μm）column with mobile phase of 1.5g/L acid ammonium phosphate， at different detection wavelength. Its qualitative and quantitative tests in this method have been done The experimental results show that calcium propionate was appeared in 3.5 min ，and the detection limit was 0.03g/kg， and the correlation coefficient r2 of equation of linear regression was 0.99990，and recoveries were between 90% and 101%.The established method is rapid accurate with good practical application and simple pretreatment.

[Key words] HPLC；Cake；Food Additive；Calcium Propionate

丙酸钙[Caloium Propionate，（C2H5COO）2Ca]是我国近几年发展起来的新型酸型食品防腐剂。在酸性条件下，产生游离丙酸，具有抗菌作用，对各类霉菌、革兰氏阴性杆菌或好氧芽孢杆菌有较强抑制作用，还可以抑制黄曲霉素产生，而对酵母菌无害。丙酸（C2H5COOH）是人体代谢过程中的一种产物和反应物，丙酸钙分解后的Ca可被吸收[1]，所以丙酸钙是一种安全性可靠的食品防霉剂。我国GB2760-2010《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》[2]中规定， 丙酸钙可用于豆类制品、生湿面制品、面包、糕点、醋、酱油、饮料等食品中，本文主要研究糕点中丙酸钙的检测。

食品中丙酸钙的检测方法主要有高效液相色谱法[3]气相色谱法[4-8]离子色谱法[9-10] 。气相色谱法定性定量能力较差，为寻找简单、快速、准确、实用的方法，本研究建立一种高效液相色谱法测定糕点中丙酸钙方法。

1 实验部分

1.1 仪器试剂和材料

HPLC-1260 高效液相色谱仪（美国安捷伦公司） 配有二极管阵列检测器；KQ800DB 型数控超生波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；EASYPUREⅡ型超纯水器（北京普析通用仪器有限责任司）；BSA2245-CW电子分析天平（北京赛多利斯公司）；H-2050R 型低速冷冻离心机（北京离心机公司）；IKA T25型组织捣碎机（上海标本模型厂）；pH 纸（天津市塘沽区化学试剂厂）；0.45μm 微孔滤膜（天津市东康科技有限公司） ；磷酸、磷酸氢二铵、丙酸钙、纳他霉素、甲醇、乙酸铵、冰醋酸均为色谱纯，实验用水为超纯水。

（1） 丙酸钙标准储备液：准确称取丙酸钙1.26g 用水溶解后定容100mL 容量瓶中， 配制成丙酸含量为10mg/mL的标准储备液。 （2） 1.5g/L磷酸氢二铵：称取磷酸氢二铵1.5g，加水溶解后定容至1000mL容量瓶中。（3） l mol/L 磷酸溶液：加人3.4mL 浓磷酸，混匀加水定容至50mL容量瓶中。选择以下几种市售糕点进行分析：月饼，绿豆糕，夹心蛋糕。

1.2 高效液相色谱分析条件

色谱柱：Agilent ZORBAXSB-C18柱（4.6mm× 150mm，5μm，安捷伦公司）；柱温25℃；流速1.0mL/min；流动相A：甲醇，流动相B： 为1.5g/L磷酸氢二铵，用磷酸调整pH值4.5-5.5，检测器：二极管阵列检测器，选取214nm、305nm；进样量：10μL。按（表1）进行梯度洗脱。

1.3 标准溶液的制备

1.4 样品溶液的制备

准确称取5g试样至100mL烧杯中，加水20mL，加入1mol /L 磷酸溶液0.5mL 混匀，经超声浸提15min 后， 用1mol/L磷酸溶液调pH值至4.5-5.5左右，转移试样至50mL容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀。将试样全部转移至50 mL 具塞塑料离心管中，以不低于4000r/min 离心10min，取上清液，经0.45μm 微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定。

2 结果与讨论

2.1 提取方法的选择

丙酸钙是新型防腐剂，易溶于水， 微溶于甲醇、乙醇等有机溶剂， 而在酸性条件下，丙酸钙转化成丙酸，所以选取pH值4.5-5.5纯水提取丙酸钙。常用的样品提取方法有振荡提取和超声提取， 由于超声利用超声波的空化作用、机械效应和热效应等加速分子运动，使细胞内有效物质的释放、扩散和溶解，可以显著提高提取效率，所以选择超声提取法提取15min。以此方法提取丙酸钙回收率在90 %-101%。

2.2 流动相的选择

（1）以20%甲醇水做流动相：根据极性有机化合物丙酸易溶于水的特点，选择20%甲醇水做流动相，采用ZORBAXSB-C18柱（4.6mm×150mm， 5μm不锈钢柱）色谱柱，流速在1.0 mL/min条件下，进行丙酸标物实验，峰有拖尾。以绿豆糕，夹心蛋糕为代表样品加标试验，进行定量计算，结果杂峰多，相似的光谱图容易干扰，回收率<70%。（2）0.02mol/L乙酸铵溶液+10%甲醇，用冰醋酸调节pH值4.5-5.5采用ZORBAXSB-C18柱（4.6mm×150mm， 5μm不锈钢柱）色谱柱，流速在1.0 mL/min条件下，出峰时间6.5min。以绿豆糕，夹心蛋糕为代表样品加标试验，进行定量计算，结果不太满意，回收率<80%。（3）流动相采用1.5g/L磷酸氢二铵，用磷酸调节pH值4.5-5.5采用ZORBAXSB-C18柱（4.6mm×150mm，5μm不锈钢柱）色谱柱，流速在1.0 mL/min条件下，以绿豆糕，夹心蛋糕为代表样品加标做试验，进行定量计算，峰形对称结果满意，回收率>90%。采用梯度洗脱，可以保证丙酸出峰时间3.5min。

2.3 校正曲线和回归方程

配制丙酸钙标准系列溶液0、35.5、71.0、142.0、284.0、426.0、568.0、710.0μg/mL，在最佳色谱条件下进样测定（3次平行），得到相应峰面积，数值见表2。以浓度（μg/mL）为横坐标， 峰面积（UV·S）为纵坐标绘制校准曲线，得到回归方程为：y=212001.8x-559.0，相关系数：r2=0.99990。结果表明，丙酸钙在35.5-710.0μg/mL范围内具有良好的线性关系。

2.4 样品的测定及样品色谱图

3 结论

综上所述，样品前处理和流动相中加入磷酸溶液， 作用是使样品处于酸性条件下，使得样品中的丙酸钙转化为丙酸，提取效率提高，本实验对糕点中丙酸钙能够准确的定性和定量分析，标准曲线线性相关系数r2=0.99990，线性关系良好，方法回收率90%-101%，方法检出限0.03g/kg，方法定量限0.10 g/kg。该方法检测操作快速，在工作中有较强的实用性。

参 考 文 献

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