肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合顺铂抑制胶质母细胞瘤神经球生长的作用

闫振坤 王立波 宋玉梅 刘晓阳 齐 玲

(吉林大学中日联谊医院，吉林 长春 130033)

肿瘤生物学研究发现，脑肿瘤中存在的肿瘤干细胞(TSCs)是肿瘤发生及耐药的根源〔1～3〕。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)作为临床肿瘤新药已进入Ⅱ期研究阶段，顺铂(CIS)是常规化疗药物之一。本文拟研究TRAIL和CIS这两种药物对人脑胶质母细胞瘤SC326神经球细胞生长的作用。

1 材料与方法

1.1细胞和主要试剂 SC326神经球(吉林医药学院干细胞实验室提供)。CIS、MTS试剂盒(美国Sigma公司)；神经培养基、B27添加物(美国Gibco公司)，人碱性成纤维生长因子(bFGF)和人表皮生长因子(EGF)(英国Pepro Tech公司)。

1.2神经球培养〔4，5〕将神经球细胞接种于干细胞培养液(SCM，包括神经培养基、B27添加物、20 μg/L EGF和bFGF)中进行培养，每3～5 d离心换液一次，按1∶2比例传代。

1.3TRAIL和顺铂对神经球细胞生长的作用 神经球细胞机械分离成单细胞悬液，以每孔100 μl SCM含5 000个细胞接种于96孔板中，置入37℃、5% CO2培养箱中培养。实验设为空白对照组、TRAIL组(300 mg/L)、CIS组(10 mg/L)和联合用药组(TRAIL 300 mg/L+CIS 10 mg/L)，每组5个复孔，作用3 h后，每孔加入MTS 20 μl继续孵育2 h，加入10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液终止反应。酶标仪490 nm处测定各孔光吸收值。计算细胞死亡率。倒置显微镜下观察SC326神经球形成情况。

2 结 果

2.1药物作用后神经球细胞的死亡率 TRAIL和CIS组SC326神经球细胞死亡率分别是(24.43±2.06)%和(22.02±2.58)%；两者联合作用后明显增加到(52.32±4.35)%。

2.2药物作用后神经球形成观察 见图1。TRAIL和顺铂均可以抑制神经球的形成，两者联合抑制作用更明显。

空白对照组 联合用药组

3 讨 论

脑肿瘤发生在颅内，以恶性居多，其中以胶质母细胞瘤恶性度最高，现今无有效的治疗方式。包括手术、放疗、化疗和替莫唑胺在内的多种疗法对患者生存期的延长意义不大〔6〕。这是因为肿瘤中存在脑TSCs(BTSCs)，它是肿瘤发生、复发以及放化疗抵抗等的原因。在干细胞培养液中，BTSCs是以神经球的方式进行生长，传代后仍保持这种特性〔7～9〕。本文结果说明，TRAIL和CIS对神经球细胞均有一定的杀伤作用，并且可以抑制神经球的形成，两者联合后可以发挥药物协同作用。但TRAIL和CIS杀死神经球细胞及抑制神经球形成的原因及机制还有待后续实验。

4 参考文献

1Qi L,Bellail AC,Rossi MR,etal. Heterogeneity of primary glioblastoma cells in the expression of caspase-8 and the response to TRAIL-induced apoptosis〔J〕.Apoptosis,2011;16:1150-64.

2Wang R,Chadalavada K,Wilshire J,etal. Glioblastoma stem-like cells give rise to tumour endothelium〔J〕.Nature,2010;468(7325): 829-33.

3Silvestre DC,Pineda Marti JR,Hoffschir F,etal. Alternative lengthening of telomeres in human glioma stem cells〔J〕.Stem Cells,2011；29(3):440-51.

4齐 玲,金 宏,丁丽娟,等.脑肿瘤干细胞的培养及生物学特性研究〔J〕.中国实验诊断学,2011；15(2):227-8.

5齐 玲，李蕴潜，金 宏,等. 胶质母细胞瘤干细胞的分离、培养及其生物学特性〔J〕.吉林大学学报(医学版),2012;38(6): 1058-62.

6Eramo A,Ricci-Vitiani L,Zeuner A,etal. Chemotherapy resistance of glioblastoma stem cells〔J〕.Cell Death Differ,2006;13(7): 1238-41.

7Dirks PB. Brain tumor stem cells: the cancer stem cell hypothesis writ large〔J〕. Mol Oncol,2010;4(5): 420-30.

8Reynolds BA,Weiss S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system〔J〕.Science,1992;255(5052): 1707-10.

9Yuan X,Curtin J,Xiong Y,etal. Isolation of cancer stem cells from adult glioblastoma multiforme〔J〕.Oncogene,2004;23(58): 9392-400.