血管内皮生长因子121-DFF40融合蛋白体内的抗肿瘤活性

张 晶 赖 飞 黄连江 梁小亮 孙红琰

(厦门市第二医院检验科，福建 厦门 361021)

靶向药物治疗肿瘤是在传统的细胞毒药物基础上的一次革命。因为靶向药物的设计理念是干扰肿瘤发生和发展过程中的异常信号通道，所以比以往传统的细胞毒药物有着更强的针对性、更高的效率和更小的不良反应〔1〕。血管内皮生长因子(VEGF)121可以靶向的作用于肿瘤新生血管，利用DFF40的DNA裂解作用，达到使肿瘤部位新生血管内皮细胞凋亡的作用。本文利用前期原核表达、纯化制备的有活性VEGF121-DFF40融合蛋白，对建立的肝癌荷瘤裸鼠模型进行体内抗肿瘤活性研究，从而初步验证其作为肝癌生物治疗药物的可行性。

1 材料与方法

1.1试剂 VEGF121-DFF40融合蛋白为前期实验制备，PBS为实验室自配。

1.2细胞株与动物 肝癌细胞取自武警总医院；Balb/c裸鼠购自军事医学科学院实验动物中心。

1.3实验方法 取5周龄Balb/c裸鼠，体重为18～20 g，雌性，利用水动力转染法尾部注射HepG2细胞，其中细胞浓度调整为1×107/L，5 d后，随机分为对照组和实验组各6只，分别皮内注射PBS 0.1 ml及融合蛋白 0.1 ml，每天1次。分别记录各组小鼠的初次时间、半数死亡时间，40 d后处死小鼠，剥取瘤块，测量直径，计算成瘤率、40 d存活率，并对肿瘤组织进行病理学分析。

2 结 果

2.1各组小鼠的生存期 对照组裸鼠初次死亡时间为(21±1) d，半数死亡时间为(30±2) d，平均存活时间为(29.66±4.46) d；实验组裸鼠初次死亡时间为(28±2) d，半数死亡时间为(40±1) d，平均存活天数(36.66±5.32) d，两组小鼠的生存时间差异显著(P<0.05)。

2.2不同时间肿瘤生长情况 对照组在给药第18、22、26及30天时，肿瘤直径与实验组差异显著(P<0.05)。见表1。

表1 各组肿瘤直径大小

2.3各组小鼠成瘤率及40 d存活率 对照组小鼠共有6只成瘤，成瘤率为100%，其40 d存活率为0，实验组小鼠共有3只成瘤，成瘤率为50%，40 d存活率为50%；实验组裸鼠成瘤率下降，存活率升高(P<0.05)。

2.4肿瘤组织的病理变化 见图1。光镜下组织学观察可见(HE染色)，对照组肿瘤组织内坏死区明显小于实验组。

图1 各组裸鼠肿瘤组织病理学观察(HE，×20)

3 讨 论

VEGF是体内血管内皮细胞生长的特异性血管通透性因子和有丝分裂原，它能促进肿瘤的新生血管形成，为肿瘤细胞提供足够的营养进行生长、侵袭和转移〔2〕。所以，VEGF及其受体已成为近年抗肿瘤血管形成最具潜力的靶点之一〔3〕。本实验结果初步证明了VEGF-DFF40融合蛋白对小鼠肝癌细胞生长具有抑制作用，但有关VEGF-DFF40重组融合蛋白抑制肿瘤细胞生长与凋亡的具体作用机制，及其体内最低有效剂量和半衰期等问题，还有待进一步研究。

4 参考文献

1Juffermans LJ，Kamp O，Dijkmans PA，etal.Low intensity ultrasound exposed micro-bubble sprovoke local hyperpolarization of the cell membrane via activation of BK(Ca)channels〔J〕.Ultrasound Med Biol，2008；3(3):502-8.

2Kiselyov A，Balakin KV，Tkachenko SE.VEGF/VEGFR signal-ling as a target for inhibiting angiogenesis〔J〕.Expert Opin Investig Drugs，2007；16(1):83-107.

3Gomika U，Caroline R，Rolf A，etal.A peptide antagonist of VEGF receptor 2 recognizes a'hotspot'in the extracellular do main distinct from the hormone-binding site〔J〕.Bioorg Med Chem Lett，2008；16(12):6338-43.