K-CoxB-JN复方提取物对小鼠急性阿霉素心肌损伤的保护作用

林 清 马会霞 高秀娟 李 洁 姚荣妹 谢 飞 徐 静 王 巍 包巨太

(河北联合大学中医学院，河北 唐山 063000)

病毒性心肌炎(VMC)是一种心肌纤维及心肌细胞受到病毒侵害后出现的一系列变性、坏死疾病，发病率逐年上升。近年来运用中药治疗VMC，取得了可喜的成果。抗柯萨奇病毒B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)是在中医理论指导下研制而成的中药复方制剂，对于VMC的治疗具有较好的疗效〔1，2〕。本实验探讨K-CoxB-JN复方提取物对心肌保护作用的机制。

1 材料与方法

1.1动物 SPF级雄性昆明小鼠，体质量(20±2) g，北京华埠康生物科技股份有限公司，动物合格证号SCXK(京)2009-0004，实验过程中对动物处置符合国家科技部2006年9月颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》中动物伦理学标准。

1.2药品与试剂 K-CoxB-JN复方药材(西洋参、黄芪、五味子、丹皮、麦冬、莱菔子、王不留行)购自石家庄市柏林药材加工厂(批号20100225)；阿霉素(ADM)，购自浙江海正药业股份有限公司，批号：20040416；血清肌酸激酶(CK)，磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)测定试剂盒，购自南京建成生物工程研究所，批号：20100111；心肌肌钙蛋白I(cTnI)测定试剂盒，购自德国Bgaer公司；超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所；K-CoxB-JN复方提取物总黄酮、总多糖由课题组自制。

K-CoxB-JN复方总黄酮提取方法:采用乙醇回流提取的方法，首先称取药材，置圆底烧瓶中，分别一次加入8倍量和6倍量浓度为80%的乙醇，然后加热回流提取3 次，每次2 h，将最终3次提取的药液合并，过滤，通过旋转蒸发仪回收乙醇，同时浓缩药液。最后浓缩液分别用石油醚及乙酸乙酯等体积萃取3次，取上清液，合并浓缩提取液，剩余药液70 ℃水浴蒸发成膏状，之后在70 ℃鼓风干燥机中干燥即得总黄酮。K-CoxB-JN复方多糖提取方法: 采用乙醇回流提取的方法，首先称取药材，置圆底烧瓶中，加入8倍量95%乙醇，加热回流提取1.5 h后，将药材分别加入8、6、6 倍量水煎煮3 次，每次1.5 h，再合并提取液，过滤、浓缩，将滤液调至含醇量60%，过滤药液，将沉淀干燥至恒重即得粗多糖。

1.3实验仪器 电子天平，购自上海精密仪器仪表有限公司；电子调温电热套购自天津市泰斯特仪器有限公司，型号：98-1-B；旋转蒸发仪购自上海亚荣生化仪器厂，型号：RE-5205；全自动生化分析仪，购自北京朗普信科技有限公司；低温离心机，购自上海安亭科学仪器厂，型号TDL-5-A； 电热鼓风干燥箱，购自上海博讯实业有限公司医疗设备厂，型号：GZX-9070 MBE；Bio-Rad3550型自动酶联免疫测定仪，购自美国Bio-Rad公司；BX30 型 Olympus光学显微镜，购自日本Nikon公司。

1.4方法

1.4.1分组及给药 健康昆明雄性小鼠90只，随机分为正常对照组、模型组、K-CoxB-JN总黄酮低剂量组(HL)、中剂量组(HM)、高剂量组(HH)、K-CoxB-JN总黄铜及多糖组(H+D)，每组15只。正常对照组用生理盐水(NS)灌胃，0.2 ml/10 g，1次/d，连续7 d，第7天灌胃2 h后，腹腔注射0.9%盐水20 mg/kg；模型组，0.9%盐水灌胃同正常对照组，第7天灌胃2 h后，腹腔注射ADM 20 mg/kg；HL组、HM组、HH组给药剂量分别为0.2、0.4、0.8 g/kg，0.2 ml/10 g灌胃给药，1次/d，连续7 d，第7天灌胃2 h后，腹腔注射ADM 20mg/kg，建立急性心肌损伤模型。H+D组，给药剂量0.4 g/kg，给药方式及构建模型同HL组。

1.4.2心脾指数测定 小鼠心脏、脾脏称重，脾指数=脾脏质量(mg)/体重(g)；心脏指数=心脏质量(mg)/体重(g)。

1.4.3血清心肌酶及cTnI测定 小鼠急性心肌损伤模型建立24 h后，摘取小鼠眼球取血，用酶标仪测定CK 和CK-MB吸光度值，按试剂盒说明书操作。按试剂盒说明分别测定心肌组织MDA含量及SOD活性。

2 结 果

2.1心脾指数测定结果 K-CoxB-JN黄酮中、高剂量及黄酮+多糖组心脏指数与模型组比较有统计学意义(P<0.01)，K-CoxB-JN黄酮中剂量组及黄酮+多糖组的小鼠脾脏指数与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组小鼠心脏指数和脾脏指数比较

2.2血清CK、CK-MB、cTnI测定结果 K-CoxB-JN黄酮低、中、高及黄酮+多糖组均能降低CK和cTnI的值，与模型组比较有统计学意义(P<0.01)，K-CoxB-JN黄酮低剂量组及黄酮+多糖组降低CK-MB的值，与模型组比较有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表2 各组小鼠血清CK、CK-MB、cTnI水平比较

2.3心肌组织MDA含量及SOD活性测定结果 K-CoxB-JN黄酮中、高及黄酮+多糖组均能降低SOD的值，与模型组比较有统计学意义(P<0.05)，K-CoxB-JN黄酮中剂量组及黄酮+多糖组降低MDA的值，与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 各组小鼠心肌SOD、MDA水平比较

3 讨 论

VMC是心血管科常见疾病之一，发病趋势逐年增长，与扩张型心肌病有一定联系〔3〕。因此，早期诊断和治疗VMC具有十分重要的意义。K-CoxB-JN由西洋参、麦冬、丹皮、五味子、黄芪等中药组成，西洋参茎叶皂苷对心脏具有保护作用，马宝兰等〔4〕研究发现西洋参茎叶总皂苷可降低CK的活性，西洋参二醇组皂苷(PDQS)注射液对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用，而且PDQS能加强SOD，其活性高于对照组。黄芪具有抗病毒、改善微循环、促进心肌供氧、降低心肌耗氧量、调节免疫等作用，对心血管具有一定的保护作用等〔5〕。周晓春等〔6〕发现生黄合剂能明显提高VMC小鼠血清中SOD活性、降低MDA含量，对CVB3感染鼠也有一定治疗作用。

临床上衡量心肌细胞的损害程度一般选用心肌酶检查，其对诊断心肌损伤有一定辅助作用。VMC患者中，心肌损害通常伴随心肌酶学的改变，当心肌细胞发生坏死、破裂时，心肌酶就会释放入血液当中，导致血清心肌酶水平升高。目前国内最常用来监测的心肌酶有AST、CK、LDH、CK-MB、HBDH等〔7〕。本实验主要检测CK和CK-MB。CK是人体能量代谢过程中重要的酶类，存在于动物的心脏、脑以及肌肉等组织。VMC时，CK比其他酶出现早并迅速升至高峰，是应用最广泛的心肌损伤指标。磷酸肌酸激酶(CK)3个同工酶中的CK-MB多存在于心肌，反映心肌损伤的情况，对心肌损害的早期诊断具有重要价值。cTnI仅在心肌细胞中表达，在人体骨骼肌细胞中不表达。在心肌中cTnI的含量是CK-MB的13倍，检测外周血cTnI含量可反映心肌细胞的损伤程度〔8〕。由于cTnI变化在VMC中具有较高的特异性和灵敏性，目前已确定cTnI对VMC心肌损伤的诊断价值。MDA能够直接反映体内自由基损害，是脂质过氧化反应的中间产物。当心肌细胞被病毒侵袭后，心肌细胞膜会引发一系列的氧化反应，使细胞膜破坏，导致心肌组织氧自由基和脂质过氧化损伤。而SOD是可以清除自由基的一种酶，过多的自由基可使SOD损耗增加。

降低MDA的含量和提高SOD的活性、清除氧自由基，可加速VMC的康复。本实验结果显示，K-CoxB-JN总黄酮低、中、高三个治疗组及总黄酮+多糖组均能降低CK、 CK-MB和cTnI的值，并对SOD及MDA具有改善作用，说明K-CoxB-JN总黄酮及皂苷可以降低心肌酶水平，对心肌具有保护作用。

4 参考文献

1邢纪萍，包巨太，李志田，等.抗柯萨奇B 中药胶囊治疗病毒性心肌炎的临床疗效评价〔J〕．中国临床药理学与治疗学，2003；8(6):701-3.

2吕立勋，吴范武，李 洁，等.抗毒补心胶囊治疗病毒性心肌炎的疗效观察〔J〕.山东医药，2010；50(5)：36-7.

3Smith SC，Ladenson JH，Magon JW，etal. Elevation of cardiactroponin Iassociated with myocarditis.Experimental and clinical corre lates〔J〕. Circulation,2004；95(1) 163-8.

4马宝兰，秦绪花，史载祥，等. 西洋参临床药理研究进展〔J〕.江西中医学院学报，2011；23(5)：88-92.

5于永慧，汪 翼. 黄芪治疗病毒性心肌炎的研究进展〔J〕. 实用儿科临床杂志，2005，20(8):807-8.

6周晓春，颜 勇，王宝忠，等.生黄合剂对病毒性心肌炎小鼠血清SOD活性和MDA含量的影响〔J〕.承德医学院学报，2008；2(1)：10-1.

7杨英珍.病毒性心脏病〔M〕.上海：上海科学技术出版社，2001:75.

8余新超，郑芙林，汪思应，等.急性病毒性心肌炎血清肌钙蛋白Ⅰ的表达及临床意义〔J〕.中国基层医药杂志，2002；9(12):1067-8.