取卵术中卵泡冲洗对IVF-ET的安全性分析

暨南大学医学院附属第五医院广东省清远市人民医院妇产科， 广东 清远 511518

取卵术中卵泡冲洗对IVF-ET的安全性分析

王秋香冼英杰陈彩蓉

暨南大学医学院附属第五医院广东省清远市人民医院妇产科， 广东 清远 511518

目的探讨取卵术中卵泡冲洗的安全性、卵泡冲洗的适宜次数。方法选择因输卵管因素不孕而接受IVF-ET助孕治疗的不孕症患者60例，将60例患者所获得的全部卵母细胞根据其在取卵过程中经过卵泡冲洗的次数分为4组，A组为无需卵泡冲洗即获得的卵母细胞，B组为经过1次卵泡冲洗获得的卵母细胞，C组为经过2次卵泡冲洗获得的卵母细胞，D组为经过3次以上(包括3次)卵泡冲洗获得的卵母细胞，观察四组卵母细胞的情况。结果A组、B组、C组的成熟卵率、受精率、卵裂率、优胚率及可用胚胎数差异无统计学意义。D组的成熟卵率、受精率、卵裂率、优胚率及可用胚胎数较前3组低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论适宜的卵泡冲洗不影响卵子受精、卵裂及胚胎发育情况，是安全的。但反复的卵泡冲洗(≥3次以上)所获得胚胎质量差，建议将卵泡冲洗次数控制在3次以下。

卵泡冲洗；IVF-ET；安全性

在辅助生殖技术中，取卵术是体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的主要技术之一，取卵是否成功，能否获得卵子是关键。有研究认为取卵术中使用双腔取卵针进行卵泡冲洗可以直接提高获卵率，不影响卵子受精、卵裂及胚胎发育情况，并且显著改善妊娠结局[1-3]。本研究选择因输卵管因素不孕而接受IVF-ET助孕治疗的不孕症患者60例，将60例患者所获得的全部卵母细胞根据其在取卵过程中经过卵泡冲洗的次数分为4组，观察4组卵母细胞的情况。从而探讨取卵术中卵泡冲洗的安全性、卵泡冲洗的适宜次数.

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年12月至2013年12月因不孕症在清远市人民医院生殖中心接受常规IVF-ET助孕治疗的不孕症患者60例为研究对象。纳入标准： ①年龄≤35 岁；②基础FSH<10IU/L；③因输卵管因素导致不孕而接受IVF-ET；④子宫正常；⑤既往无子宫手术史；排除标准：①年龄>35岁；②高PRL血症或合并甲状腺功能异常、卵巢肿瘤等全身系统疾病；③先天性子宫畸形；④既往有子宫手术史。均采用黄体中期短效长方案行控制性超促排卵，将60例患者所获得的全部卵母细胞根据其在取卵过程中经过卵泡冲洗的次数而分为4组。A组为无需卵泡冲洗即获得的卵母细胞，B组为经过1次卵泡冲洗获得的卵母细胞，C组为经过2次卵泡冲洗获得的卵母细胞， D组为经过3次以上(包括3次)卵泡冲洗获得的卵母细胞.

1.2 方法

1.2.1 超促排卵治疗 所有患者均采取黄体中期短效长方案降调节治疗，于前次月经周期的黄体中期开始使用短效促性腺激素释放激素激动剂达菲林针剂0.03-0.1 mg /d至HCG日，注射GnRH-a后10-15天经证实达到垂体降调节标准后，使用重组FSH(果纳芬)或结合尿促性腺激素刺激卵泡发育。当1个优势卵泡直径≥19mm，或2-3个优势卵泡≥17mm，血E2达到平均每个优势卵泡(≥14mm卵泡)250-300pg/ml时，当晚肌肉注射HCG 5000-10000IU。注射HCG 后36-38h 左右在阴道B超引导下经阴道穿刺取卵,穿刺HCG日≥12mm的卵泡。

1.2.2 取卵及卵泡冲洗方法：所有病例均空腹，于取卵前静脉全麻镇痛，患者取膀胱截石位，常规消毒铺巾、放入阴道探头及穿刺架，找到一侧卵巢后，再寻找穿刺针与卵泡间最佳进针位置，手术者将穿刺针快速刺入卵泡，穿刺针用COOK16G双腔针，一腔吸取卵子，另一腔供冲洗，启动吸引器(COOK负压吸引器)，抽吸压力为120-130mmHg，使卵泡液吸入15ml试管内，当一个卵泡液抽净后，将抽吸出的卵泡液交与胚胎实验室技术员在显微镜下查找卵子，若一次抽吸即可获得卵子则无需冲洗，如果未获得卵子，则从双腔取卵针的冲洗腔注入卵泡冲洗液来冲洗，通过用卵泡冲洗液来反复冲洗，再反复抽吸卵泡，直到获得卵子。冲洗液为卵泡培养液，产品类别G-MOPS PIUS (125ml/瓶)+肝素25ul，瑞典Vitrolife公司生产。一般一次的冲针量约4ml。

1.2.3 卵母细胞收集 将收集的卵泡液或卵泡冲洗液迅速倒入100mm×15mm 培养皿，肉眼初步识别卵冠丘复合体 (OCCC )， 在体视镜下证实后转移至捡卵皿中，用G-IVF plus 洗涤后转入受精皿收集。

1.2.4 体外受精 将收集的卵母细胞培养3-6h后取出 ，加入获能后的精子，加精后将精卵放回37℃、6%CO2浓度的培养箱继续培养。

1.2.5 受精卵裂观察、胚胎移植 加精后16- 18h观察受精情况，显微镜下见2原核为正常受精，受精后24h开始观察卵裂情况，在第3天根据卵裂球数目、大小 、形状、均匀程度、有无碎片等对胚胎进行分级，将D3卵裂球数为6-9的Ⅰ级或Ⅱ级，D1原核评分为Z1或Z2的胚胎评为优质胚胎，在第3天挑选评分最优的胚胎进行胚胎移植。

1.2.6 监测内容 观察4组卵母细胞的成熟卵率、受精率、卵裂率、可用胚胎数、优质胚胎率。

1.3 统计学方法 应用SPSS15.0统计软件包进行统计 ，两组均数的比较采用t检验，率的比较采用χ2检验 ,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

A组、B组、C组的成熟卵率、受精率、卵裂率、优胚率及可用胚胎数无显著性差异。D组成熟卵率、受精率、卵裂率、优胚率及可用胚胎数较前3组低，有显著性差异(<0.05)。见下表1。

表1 组卵母细胞受精及胚胎相关参数比较

注：与A、B、C组比较,*P<0.05。

3 讨论

在体外受精胚胎移植技术中，我们的共识是以最小的代价获取高质量的卵母细胞，进而得到高质量的胚胎以提高临床妊娠率。而获卵困难为体外受精-胚胎移植取卵手术中较为常见的问题，对于IVF取卵手术中获卵困难的女性不孕患者，通过反复卵泡冲洗可以提高获卵率。为什么有的成熟卵子要通过冲洗才可以获得？原因在于成熟卵泡发生了一系列形态、细胞结构和化学成分的变化。FSH的浓度升高使颗粒细胞发生脂肪变性，卵泡液侵入到卵丘细胞之间，导致卵丘细胞之间失去粘连而彼此分散开来，最终使卵母细胞连同放射冠从卵泡壁上游离出来，悬浮于卵泡液中，有利于卵母细胞在卵泡壁破裂时随卵泡液一起流出[4]。

本研究结果显示A、B、C组3组的成熟卵率、受精率、卵裂率、可用胚胎数、优质胚胎率差异无统计学意义，说明≤2次的卵泡冲洗不影响卵子受精、卵裂及胚胎发育情况，是安全的。

Hussein E[5]通过对阴道超声下卵泡穿刺抽吸与卵泡冲洗抽吸所回收的卵母细胞活力、受精后的分裂率等进行比较，认为在阴道超声引导下通过卵泡穿刺和4ml的培养液冲洗所得卵母细胞的回收率及其质量是适合于进行IVF的，没必要进行反复的卵泡冲洗。本研究结果也显示D组(经过≥3次的卵泡冲洗获得的卵母细胞 )的成熟卵率、受精率、卵裂率、优胚率及可用胚胎数较前3组低，差异有统计学意义(<0.05)。其原因可能为①获卵困难可能预示卵的质量，胚胎质量下降，从而导致较差的IVF实验室结局，进行卵泡冲洗获得了一部分成熟度低的卵子，虽然在一定程度上提高了获卵困难的获卵数，但不能改变其卵子质量差的本质。②反复的卵泡冲洗延长了卵母细胞与外界环境的接触，卵子对温度、pH及渗透压非常敏感，轻微的改变即引起不可逆的改变。

由此认为适宜的卵泡冲洗不影响卵子受精、卵裂及胚胎发育情况，是安全的。但反复的卵泡冲洗(≥3次以上)所获得未成熟卵增多，胚胎质量差，因此没必要进行反复的卵泡冲洗，建议将卵泡冲洗次数控制在3次以下。

[1]陈娟. 卵泡冲洗对来曲唑促排卵方案患者妊娠结局的影响[J].郧阳医学院学报, 2011,(2)：160-162.

[2]陈娟.来曲唑促排卵方案取卵术中卵泡冲洗安全性分析[J].中国优生与遗传杂志,2011,19(11)：113-114.

[3]舒黎.双腔取卵针患者IVF/ICSI-ET结局分析[J].江苏医学,2010,(24)：2895-2897.

[4]李媛.人类辅助生殖技术[M].北京：科学出版社， 2008, 11,93.

[5]Hussein E ，Br J Obetet Gynaecol.1992：814-844.

广东省清远市2013年科技计划项目，项目编号44011120133183k。

王秋香,女,本科,主治医师，研究方向：妇科生殖内分泌。

R713.7

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1007-8517(2014)11-0084-02

2014.04.10)