HPLC法测定妇炎康颗粒中黄芪甲苷含量

2014-08-30何屹王兴海

河北医药 2014年9期

关键词：妇炎甲苷正丁醇

何屹王兴海

·药物研究·

HPLC法测定妇炎康颗粒中黄芪甲苷含量

何屹王兴海

妇炎康颗粒；黄芪甲苷；含量测定

妇炎康颗粒由黄芪、当归、川芎、赤芍、丹皮五味中药组成，具有益气活血、逐瘀散结、行气止痛功能，临床主要用于慢性盆腔炎气虚血瘀证。经多年临床使用，疗效确切。本文采用HPLC(蒸发光散射检测器)法对主药黄芪有效成分黄芪甲苷进行含量测定方法[1-5]研究，以完善妇炎康颗粒质量标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SEDE×75检测器(迪马公司)，色谱柱Dikma ODS C18(5 μm，150×4.6mm)；XWK-3A空气泵(天津市华生仪器分析厂)；JA2003N电子天平(上海精密科学仪器厂)；KQ-50DE型数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0781-20008供含量测定用)；乙腈为色谱纯；水为三蒸水；妇炎康颗粒(陕中附院自制制剂，批号120301,120401,120501)。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备：精密称取已干燥至恒重的黄芪甲苷对照品5.8 mg，加甲醇(色谱纯)定容至10 ml，从中取2 ml溶液定容至5 ml，制成0.232 mg/ml的对照溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备：取样品粉末研细，取约10 g，精称，加甲醇50 ml，称定重量，超声(功率220 W，频率50 kHz)30 min，放至室温，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液25 ml，置水浴上蒸干，残渣加水20 ml，用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20 ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤两次，每次60 ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次60 ml，合并水洗后的正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇定容至5 ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，备用。

2.1.3 阴性样品干扰的考察：按妇炎康颗粒的处方制备不含黄芪的阴性制剂。取阴性样品约10.0 g，精密称定，按供试品制备方法制成阴性样品溶液，照样品测定方法测定，结果表明，阴性样品中的其他成分对黄芪甲苷测定无干扰。

2.2 色谱条件与系统适用性试验色谱柱Dikma ODS C18(5 μm，150×4.6 mm)；柱温：室温；流动相：乙腈∶水(32∶68)；流速：1.0 ml/min；蒸发光散射检测器，漂移管温度为99℃；黄芪甲苷和样品中其他色谱峰的分离度良好；理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于10 000。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察：取0.232 mg/ml的黄芪甲苷对照溶液，分别以2、4、8、12、16、20 μl量进样，记录色谱图，计算峰面积，并以峰面积(A)为纵坐标，以进样量(C)为横坐标，作一直线见附图，求得回归方程：A=7316.3C-1231.7，R2=0.9991。结果表明，在0.464～4.640 μg内，黄芪甲苷峰面积与进样量有良好的线性关系。

2.3.2 精密度考察：将浓度为0.232 mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液，连续重复进样6次，每次10 μl，测得峰面积的RSD为2.22%。见表1。

表1 精密度试验考察结果

2.3.3 重复性考察：取同一批样品6份，分别按供试品处理方法处理，按含量测定项下方法测定，计算其中芍药苷含量。见表2。

表2 重现性试验考察结果

2.3.4 稳定性考察：取一组样品溶液，分别在0、2、4、6、8 h进样，记录色谱图，测得峰面积值。见表3。

表3 稳定性试验考察结果

2.3.5 加样回收率考察：取已知黄芪甲苷含量(0.1180 mg/g)的同一批样品6份，约10.0 g，精密称定，分别加入一定量的对照品(溶液)，按照含量测定项下的方法进行测定，记录色谱图，计算峰面积值，求出加样回收率。见表4。

黄芪甲苷回收率(%)=(测得黄芪甲苷的总含量-样品中的黄芪甲苷含量)/黄芪甲苷对照品的加入量×100%。

表4 加样回收率试验考察结果

2.4 样品含量测定分别取3批样品，按供试品溶液制备方法处理，进样10 μl，记录色谱图，计算峰面积值，用外标法求样品中芍药苷的含量。见表5。

表5 样品含量测定试验考察结果

由上表可见，三批中试样品中黄芪甲苷的含量分别为0.1166 mg/g、0.1198 mg/g、0.1157 mg/g，平均含量为0.1174 mg/g。又因每袋8 g，考虑到样品中黄芪甲苷含量随饮片的品质与装量差异的影响，结合大生产实际情况，将样品中黄芪甲苷的含量在平均值的基础上下调20%，故暂定本品每袋含黄芪甲苷量不得少于0.75 mg。