子痫前期患者胎盘组织中LIF和EGF的表达和意义

卫艳芬 王健

·论著·

子痫前期患者胎盘组织中LIF和EGF的表达和意义

卫艳芬 王健

目的测定白血病抑制因子(LIF)和表皮生长因子(EGF)在子痫前期患者胎盘组织中的表达变化，探讨两者在子痫前期发病过程中的作用。方法对38例正常的孕妇(对照组)和46例子痫前期的患者(其中轻度子痫前期的患者26例，重度子痫前期的患者20例)的胎盘组织中LIF和EGF的表达水平采用免疫化学组织技术-链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法)进行组织学定位以及半定量分析。结果3组孕妇的胎盘组织中LIF和EGF都呈现阳性表达,在滋养细胞胞质中主要呈现阳性染色,而在细胞胞核中却无明显着色。而且按照正常对照组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组的顺序其两者在胎盘组织的染色强度及范围依次减弱；其两者在胎盘组织中的表达水平也依次降低。在轻度子痫前期组和重度子痫前期组中LIF的表达分别与正常对照组中LIF的表达比较都有明显的降低(P<0.01)，并且随着病情逐渐加重，LIF的表达也逐渐呈下降趋势。但是比较轻度子痫前期组和重度子痫前期组，差异无统计学意义(P>0.05)。在子痫前期组中EGF的表达和在正常对照组中EGF的表达，进行比较其明显降低(P<0.01)，并且随着病情逐渐加重，EGF的表达也逐渐呈下降趋势。且按照正常对照组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组的顺序其表达水平呈依次降低(P<0.01)；而比较轻度子痫前期组和重度子痫前期组，差异无统计学意义(P>0.05)。经过采用pearson相关分析，在子痫前期组中LIF和EGF的表达量相关系数为+0.76，呈正相关(P<0.05)。结论LIF和EGF二者对维持正常妊娠起到了一定的保护作用。LIF与EGF在子痫前期患者胎盘组织中的表达下降，使滋养细胞的浸润能力受到了影响，两者共同参与了子痫前期的发病的过程。

白血病抑制因子；表皮生长因子；子痫前期；胎盘组织；妊娠期高血压疾病

子痫前期/子痫发生于妊娠中晚期、分娩期及产后早期，它归属于妊娠期高血压疾病，是在妊娠期发生的疾病中具有特征性的疾病之一，孕妇和围生儿的发病率和病死率升高的主要原因就是由其导致的。高血压、蛋白尿及其他全身系统性的紊乱为它的主要表现，而以全身抽搐为特征的子痫是疾病的终期阶段。它的病因和发病机制迄今为止还没有正确的结轮，目前认为,可能与它的发病有关的因素有胎盘浅着床、免疫因素、遗传因素、血管内皮损伤、营养失调等等。本文通过对白血病抑制因子(leukem ia inhibitory factor,LIF)和表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)在正常妊娠组、轻度子痫前期组和重度子痫前期组患者的胎盘组织中的表达进行组织学定位及半定量分析,探讨LIF和EGF与子痫前期发病的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择 2009年5月至2010年10月在我院产科84例剖宫产分娩的孕妇作为研究的对象,其诊断及分类标准参考全国统一主编的教材《妇产科学》(第七版)[1]。其中选择38例正常妊娠孕妇(是由于胎位不正或骨盆狭窄或羊水过少或三者都有等指征进行剖宫产分娩的)作为正常对照组,平均年龄(27.9±1.6)岁；平均孕周(38.8±1.5)周，46例子痫前期组孕妇,平均年龄(29.1±2.5)岁；平均孕周(37.6±1.5)周,其中有26例轻度子痫前期，20例重度子痫前期。3组病例经调查都没有原发性高血压、糖尿病、肝炎和结核及癌症等急性慢性病史,且都是单胎活婴。

1.2 标本与采集 孕妇在进行剖宫产时,各组都在胎盘娩出之后立刻在胎盘母体的正中面在保持无菌的状态下切取大小约为1 cm×1 cm×1 cm的胎盘组织，必须避开钙化灶和机化灶以及坏死灶，且更要避开出血区。先冲洗后固定——所有标本用0.9%氯化钠溶液冲洗干净之后，用中性甲醛固定24～48 h， 然后进行常规脱水处理，最后用石蜡包埋起来，制作成石蜡包块。

1.3 组化免疫与半定量分析 采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法)。用PBS(磷酸缓冲液)对抗阴性对照,严格按试剂盒说明书进行操作。光镜下细胞内在排除非特异性着色情况下出现棕黄色颗粒表明LIF和EGF表达阳性。然后进行半定量分析，按照Fromowitz等[2]免疫组化综合计分法尽心分析。

1.4 判定方法 阳性细胞以出现明显的棕黄色颗粒为特征, 阴性细胞以没有着色或与背景颜色一致为特征;随机抽取10个高倍视野,计算滋养细胞的总数和阳性细胞的总数，结果得出阳性细胞百分率以及计分。0分代表没有阳性细胞，1分代表阳性细胞百分率为1%～25%,2分代表阳性细胞百分率占26%～49%,3分代表阳性细胞百分率为≥50%;根据阳性细胞在细胞膜或者细胞浆中的着色强度计数得分, 0分为阴性，1分为浅黄色，2分为棕黄色， 3分为棕褐色;最后把两者分数相加，结果0～1分代表(-)；2分代表(+)；3～4分代表(++)；5～6分代表(+++)。把(-)、(+)表现看作低表达，把(++)、(+++)表现看作高表达。

2 结果

2.1 3组临床特征 年龄、分娩孕周和孕次以及产次上这3组孕妇差异没有统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组临床特征

组别年龄(岁)分娩孕周(周)孕次(次)产次(次)正常对照组(n=38)28.0±1.638.86±1.542.4±1.21.3±0.5轻度子痫前期组(n=26)29.1±2.537.63±1.492.3±0.21.4±0.3重度子痫前期组(n=20)28.4±1.937.44±1.282.8±0.81.2±0.4

2.2 LIF和EGF在3组实验对象胎盘组织中的表达 比较子痫前期组与正常对照组，LIF的表达明显降低(P<0.01)，且随着病情越来越重，LIF表达也逐渐下降。而比较轻度子痫前期组和重度子痫前期组(P>0.05)。均且按照正常对照组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组的顺序，EGF在各胎盘组织中的表达水平也依次降低(P<0.01)。比较子痫前期组与正常对照组,EGF表达水平也明显降低(P<0.01)。见表2。

表2 3组胎盘组织中LIF和EGF的表达结果比较表 例(%)

注：与正常妊娠组比较，*P<0.01；与轻度子痫前期比较，#P<0.01

2.3 LIF的表达与EGF的表达二者在胎盘组织中表达的关系 通过pearson相关分析,子痫前期组LIF的表达量和EGF的表达量呈正相关(r=0.76，P<0.05)。

3 讨论

子痫前期/子痫的病因及发病机制迄今为止还没有明确的说法，目前比较公认的观点为,基因的特有遗传背景使子痫前期/子痫的发生易感性增加了，螺旋小动脉发生重铸过程的障碍迫使胎盘缺血和缺氧、以及导致激活和损伤内皮细胞。损伤的血管内皮细胞使得机体凝血与纤溶平衡关系失去调控，血管活性物质得以释放,发生血管痉挛性的收缩以及血压的升高,最终导致妊娠期高血压疾病的发生。子痫前期发生的中心环节就是内皮细胞的损伤。

LIF是一种分泌型糖蛋白,其具有种生物学功能。随着在人类生殖方面研究的深入,LIF被学者认为是母体和胎儿界面产生的具有极其重要调节作用的细胞因子之一，在妊娠生理过程中它也起着举足轻重的作用,并且发现妊娠的全过程都有LIF的作用贯穿其中[3]。有足够的证据表明，LIF是一个存在于子宫内膜中潜在的调节因子,在人类的生殖活动中可能扮演着关键的角色[4]，滋养细胞的浸润能力被LIF通过多种途径影响着,但这对妊娠的维持非常有利:比如基质金属蛋白酶及尿激酶型纤溶酶原激活剂的活性能被它所增强,一种称之为血管舒张刺激磷蛋白(VASP)的表达能被它诱导所增强,局部黏附形成并增加线性机动蛋白的聚集也可能是其通过诱导VASP的表达而导致的, 从而滋养细胞的运动和迁移得以调节[5]，滋养细胞的侵入随着被促进；影响滋养细胞的发育和分化也受上调黏附因子整合素的表达的影响(整合素α1能介入导致胚胎的层粘连蛋白及纤连蛋白与蜕膜细胞互相发生作用)，从而促使滋养细胞的浸润、迁移和生长速度加快。而它如果分泌或调控不正常，滋养细胞的浸润能力就会受其影响，就会导致病理妊娠发生的可能。在妊娠早期，妊娠高血压疾病的病理和生理基础发生,通过一连串的连锁效应，发病在妊娠中、晚期，被学者认为此过程是不完全自然流产的一种形式,其中妊娠期高血压疾病发病的关键正是由于早期滋养细胞浸润能力的下降所导致的[6]。在怀孕早期母体和胎盘免疫耐受性发生改变阻碍了子宫螺旋小动脉的生理重铸过程, 减少了胎盘的灌注血流量,导致滋养细胞缺血缺氧,从而滋养细胞的浸润能力受到了影响，并且使其受损相当严重，导致胎盘浅着床的形成。形成妊娠高血压疾病的中心环节是滋养细胞浸润能力的不足导致阻碍了子宫螺旋动脉的重塑,滋养细胞的浸润深度及其数量与妊娠高血压疾病发病有密切关系[7]。LIF可能参加了这个过程,此研究结果表明: 比较轻度子痫前期组与重度子痫前期组,LIF在胎盘组织中的表达表达稍微有点降低,但没有统计学差异(P>0.05),这可以推测从正常妊娠到子痫前期发病中间有个过程即可能经过轻度子痫前期组的过渡状态,说明患者尚处于发病的初级阶段,机体还有能力代偿调节,即还处于 “量变”阶段。LIF在子痫前期组胎盘组织中的表达量与正常对照组比较明显降低(P<0.01)，并且随着病情的一步步的加重,LIF的表达量也一步步的下降;表明LIF在子痫前期患者胎盘组织中的表达进一步减弱,可能导致进一步降低滋养细胞的浸润能力, 阻碍了子宫螺旋小动脉的生理重铸过程, 随之进一步减少了胎盘的血流灌注,滋养细胞的缺血缺氧也进一步加重了,从而引发了“量”到 “质”的变化,最后终于导致胎盘浅着床的形成, 共同参与了子痫前期的发病机制[8]。

EGF是一要的细胞生长调节因子，在妊娠期间, EGF存在于孕妇及胎儿许多组织和血浆、尿、以及羊水中，其释放受神经因素和激素等多种因素的影响。且它必须与其受体(EGFR)结合才能发挥正常的生物学效应,两者具有高度特异性以及亲和力,种重受体二聚体的形成,细胞生长与分化被其激活和调节，其刺激细胞增生和分化为其最主要的作用表现为。EFG作为胎盘分泌的生长因子, 影响着滋养细胞的迁移和侵蚀，此过程是通过增强滋养细胞表面的整合素α1、α2的表达实现的,滋养细胞低表达水平的EFGR使EFG不能有效正常的发挥其生物学作用,滋养细胞增殖、分化和侵入受到了严重影响[9]。在正常细胞分裂增殖和恶性转化中EGF和EGFR起着非常重要的作用[10]。部分细胞的分化及已分化细胞的功能因其缺乏时可受到严重影响。在妊娠期间EGF及其受体含量均增加,在胎儿、胎盘的生长发育过程中起着重要的作用,其主要作用有:调控着床、影响胎盘功能、促进滋养细胞合成分泌及分化等以及参与病理妊娠(如早期流产、胎盘发育不良、妊娠期高血压疾病等)。本研究结果表明：EGF在子痫前期患者中的表达水平显著低于正常孕妇,表明EGF与子痫前期发生和发展有关。由于EGF的低水平表达使滋养细胞表面整合素的表达受到了影响,从而滋养细胞的迁移和侵蚀也受到了影响,使滋养细胞分化不良, 阻碍了螺旋动脉的重铸过程,子宫胎盘的血流循环发生障碍,从而导致了子痫前期的发生。滋养细胞由于EGF的低水平表达导致了过度凋亡,从而导致妊娠期高血压疾病时的胎盘浅着床的形成[11]。EGF的表达随着病情的加重其水平进一步降低。综上所述,EGF在胎盘组织中的表达水平按照正常对照组、子痫前期轻度组及子痫前期重度组的过程依次降低，说明EGF在子痫前期的发生及发展过程中起着非常重要作用,检测EGF在胎盘组织中的表达水平可作为判定病情变化的重要指标。

LIF与EGF是人体内两个有重要影响力的生长因子,二者分泌及发挥生理作用互相影响，二者参与子痫前期的发病都是通过影响滋养细胞的浸润能力实现的,本研究发现:在子痫前期患者胎盘组织中LIF的表达和EGF的表达呈正相关 , 相关系数为+0.76，提示随着胎盘组织中LIF表达的降低EGF的含量也随着降低。研究表明在妊娠过程中，LIF通过增强黏附因子整合素的表达，整合素α1、α2能介导胚胎的层粘连蛋白和纤连蛋白与蜕膜细胞相互作用，促进滋养细胞浸润、迁移和生长。滋养细胞表面整合素α1、α2的表达增强，促进了EGF的分泌。子痫前期的胎盘组织中由于LIF的表达降低,使得整合素表达减弱，导致了EGF的表达下降，滋养细胞的迁移和侵蚀受到了严重影响。LIF和EGF在子痫前期患者胎盘组织中表达的降低，可能通过影响滋养细胞的浸润能力进而影响了胎盘的发育,从而导致胎盘浅着床的形成，内皮细胞受到严重损伤，共同参与了子痫前期发病过程。

通过以上所综述,表明妊娠期高血压疾病发病的重要特征有三个方面：功能紊乱的滋养细胞, 重铸受阻的螺旋动脉,子宫-胎盘的血流障碍[12]。这一病理过程其中就有白血病抑制因子及表皮生长因子的参与,这两种因子在妊娠期高血压疾病的发病中起着及其重要的作用, 研究二者的相关性,对于从分子水平方面分析在子痫前期发病中胎盘的内分泌功能的作用很有帮助。,今后研究子痫前期发病的一个主要方向就是对二者的进一步研究。提供了预防、诊断和治疗子痫前期的新的临床思路及治疗手段 ,但还有待于进一步深入的研究其具体的作用机制和原理。

1 乐杰主编.妇产科学.第7版.北京：人民卫生出版社，2008.92-101.

2 候志艳,张之真.白血病抑制因子与生殖.国外医学,2006,33:362-355.

3 Kondera Anasz Z,Sikora J,Mielczarek Palace A.Leukemiain hibitory factoran important regulator of endometrial function.Am J Reprod Immuno,2004,52:97-105.

4 Kondera-Anasz Z, Sikora J,Mielczarek-Palacz A.Leukemia inhibitory factonan important regulator of endometrial function. Am J Reprod Immuno1,2004,52:97-105.

5 Kayisli UA,Selam B,Demir R,et al.Expression of vasodilatorstim ulated phosphop roteinin human placenta:possible implications introphob last invasion.Molecular Human Reproduction,2002,8:88-94.

6 Zhou P, Fisher SJ,Janatpour M，et al.Human cytotrophob last sadopta vascu lar phenotype as they differen tiate:astrategy for successful endovas cular invasion.J Clin Invest,1997,99:2057-2058.

7 Naicker T,Khedun SM,Moodley J,et al.Quantitative analysisof trophoblast invasion inpreeclampsia. Acta Obstet Gynecol Scand, 2003, 82:722-729.

8 郭晓霞,杨年,陈红，等.胎盘组织白血病抑制因子和hCG 的表达与妊娠期高血压疾病的关系. 中国妇幼保健，2010，25：1085.

9 Das C,Kumar VS,Gupta S，et al.Network of cytokine,integrines and hormones in human trophoblast cells.J Repord Immuno,2002,53:257-268.

10 王文奇,徐瀚峰.表皮生长因子及其受体与肝癌的关系.国外医学肿瘤学分册,2005,32:212-214.

11 李芳.表皮生长因子及其受体与妊高征的关系.实用医技杂志,2008,15:815-816.

12 卢潭敏,尚丽新.抑制素及表皮生长因子与妊娠期高血压疾病 .中国妇幼健康研究，2006,17：108-111.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.09.009

050051 石家庄市，河北医科大学第三医院第一手术室(卫艳芬)，妇产科(王健)

王健，050051 河北医科大学第三医院妇产科；

E-mail：wangjianxx1971@sina.com

R 714.245

A

1002-7386(2014)09-1305-03

2013-10-29)