三清降糖缓释片对糖尿病兔胰岛素抵抗的影响※

吕立勋 李唐棣 赵琳琳 赵利刚 吴范武

(河北联合大学药学院药物制剂学科，河北 唐山 063000)

实验研究

三清降糖缓释片对糖尿病兔胰岛素抵抗的影响※

吕立勋 李唐棣 赵琳琳 赵利刚 吴范武1

(河北联合大学药学院药物制剂学科，河北 唐山 063000)

目的观察三清降糖缓释片对糖尿病兔胰岛素抵抗的影响。方法将40只健康成年雄性家兔随机分为5组，即空白对照组、模型对照组、格列美脲片组、三清降糖汤剂组和三清降糖缓释片组，每组8只。空白对照组予普通饲料喂养，其余4组均予普通饲料+高脂高糖饲料喂养，制备糖尿病模型。空白对照组、模型对照组予纯净水灌胃，三清降糖汤组予三清降糖汤混悬液灌胃，三清降糖缓释片组予三清降糖缓释片整片服用，格列美脲片组予格列美脲片整片服用。于给药4周末，观察各组空腹血糖(FPG)、血脂[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、血清胰岛素(FINS)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)变化。结果模型对照组FPG、FINS、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及TNF-α均较空白对照组升高(P<0.01)，说明造模成功；与模型对照组比较，格列美脲片组、三清降糖汤组及三清降糖缓释片组FPG、FINS、HOMA-IR及TNF-α均下降 (P<0.05)。模型对照组TG、TC及LDL-C均高于空白对照组(P<0.01)，HDL-C 低于空白对照组(P<0.01)。与模型对照组比较，格列美脲片组、三清降糖汤组及三清降糖缓释片组TG、TC及LDL-C 均降低 (P<0.05)，HDL-C 升高(P<0.05)。结论三清降糖缓释片对糖尿病兔具有降血糖、降血脂作用。

疾病模型，动物；糖尿病；胰岛素抗药性；中药疗法；黄芩

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是由于胰岛素分泌缺陷和(或)胰岛素作用缺陷而引起慢性血浆葡萄糖水平增高为特征的代谢性疾病。近年来，全球DM发病率增长迅速，已成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病[1]。我们根据DM的中医辨治规律，结合现代中药药理学研究的最新进展，自拟三清降糖方经临床试用疗效较好[1]，但是临床应用汤剂服药次数多，剂量大，使用不便，患者依从性差。本研究通过动物实验观察自拟三清降糖缓释片对血糖、血脂及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响，为其临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 健康成年雄性家兔40只，体质量(2.0±0.2) kg，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号SLXK(京)2009-0004，普通饲料，自由饮水，温度(25±2)℃，相对湿度50%～70%。

1.1.2 药物与试剂 ①三清降糖缓释片(河北联合大学药学院药物制剂实验室自制)，方中黄连、黄芩、知母、生地黄、桑白皮、地骨皮、干姜7味药材，购于北京同仁堂唐山连锁药店有限公司，经河北联合大学鉴定，符合《中华人民共和国药典》2010年版：一部项下规定[2]；按5∶5∶5∶5∶5∶3∶3的质量比例混合共9.3kg，加8倍量水煎煮2h，共2次，合并药液浓缩得药膏，密封后置冰箱内冷藏备用，临用时加纯净水配成不同浓度的混悬液；②普通饲料由河北联合大学动物实验中心提供；③高脂高糖饲料配制：基础饲料58%，猪油8%，蔗糖23%，蛋黄10%，胆固醇1%；④链脲佐菌素(STZ，美国sigma公司，批号B56981)；⑤格列美脲片(北京北陆药业股份有限公司，国药准字H20041838)；⑥生化检测试剂盒均购自中生北控生物科技股份有限公司。

1.1.3 仪器 酶标仪(Bio-RAD Model 680)；-20℃冰箱(海尔)；Microlab300半自动生化分析仪(Vital Scientific N.V)；高速低温冷冻离心机( 20000r/min，4℃，eppendorf，Centrifuge 5804R)。

1.2 方法

1.2.1 动物分组 将40只健康成年雄性家兔，适应性喂养1周，随机分为5组，即空白对照组、模型对照组、格列美脲片组、三清降糖汤剂组和三清降糖缓释片组，每组8只。

1.2.2 模型制备 空白对照组予普通饲料150g/d喂养，其余4组均予75g/d普通饲料+75g/d 高脂高糖饲料喂养。4周后，除空白对照组，其余4组家兔禁食12h后经耳缘静脉一次性注射0.1mol/L的柠檬酸钠缓冲液 (pH4.5)在冰块上新鲜配制成的1% STZ溶液50mg/kg。3d后抽取禁食12h的家兔耳缘静脉血，测定空腹血糖(FPG)，以其值≥11.1mmol/L并出现多饮、多食、多尿表现作为成模标准[3]。

1.2.3 给药方法 空白对照组、模型对照组予纯净水20mL灌胃；三清降糖汤组予三清降糖缓释片混悬液2.5g/kg(以生药量计)灌胃，每日3次；三清降糖缓释片组予三清降糖缓释片15mg/kg(以黄芩苷计)，每日1次；格列美脲片组予格列美脲片0.1mg/kg，每日1次。连续给药4周。三清降糖缓释片、格列美脲片必须整片服用，使用半圆桶型兔子固定器固定，暴露头部，在兔的两颊部从下颚处紧紧挤压，从两口角按向口腔内；把开口器插入口腔，固定开口器事先将片剂固定在待插胃管一端，另一端插入合适的硬管；把带有药物的一端顺着食管插入胃管，硬管往药物端推进，直到出现落空感，片剂灌入胃内，拔出胃管。

1.3 观察指标及方法 于给药4周末，禁食12h后，耳缘静脉采血低温分离血清(3000r/min，10min)，血清-20℃保存。FPG、血脂[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、血清胰岛素(FINS)及TNF-α均按照试剂盒说明书测定。胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)=(FPG×FINS)/22.5。

2 结 果

2.1 各组家兔FPG、FINS及TNF-α变化 见表1。

n剂量(g/kg)FPG(mmol/L)FINS(mU/L)HOMA-IRTNF-α(g/L)空白对照组8-5．75±0．866．86±1．371．74±0．0760．52±6．89模型对照组8-12．31±2．52∗11．23±2．09∗6．16±0．23∗81．24±7．23∗格列美脲片组80．1×10-37．79±1．35△8．13±1．02△2．81±0．08△72．13±7．25△三清降糖汤组82．57．96±0．94△8．26±1．18△2．92±0．09△73．26±7．16△三清降糖缓释片组815×10-37．62±1．17△8．24±1．75△2．79±0．09△71．24±7．51△

与空白对照组比较，*P<0.01；与模型对照组比较，△P<0.05

由表1可见，模型对照组FPG、FINS、HOMA-IR及TNF-α均较空白对照组升高(P<0.01)，说明造模成功；与模型对照组比较，格列美脲片组、三清降糖汤组及三清降糖缓释片组FPG、FINS、HOMA-IR及TNF-α均下降 (P<0.05)，但各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 各组家兔血脂变化 见表2。

由表2可见，模型对照组TG、TC及LDL-C均高于空白对照组(P<0.01)，HDL-C 低于空白对照组(P<0.01)，说明造模成功。与模型对照组比较，格列美脲片组、三清降糖汤组及三清降糖缓释片组TG、TC及LDL-C 均降低 (P<0.05)，HDL-C 升高(P<0.05)，但各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

n剂量(g/kg)TGTCHDL-CLDL-C空白对照组8-0．96±0．281．56±0．300．78±0．170．45±0．11模型对照组8-2．17±0．53∗2．35±0．47∗0．46±0．12∗1．32±0．16∗格列美脲片组80．1×10-31．09±0．15△1．83±0．36△0．55±0．15△0．73±0．13△三清降糖汤组82．51．13±0．24△1．86±0．38△0．57±0．15△0．76±0．14△三清降糖缓释片组815×10-31．08±0．18△1．82±0．39△0．53±0．14△0．71±0．15△

与空白对照组比较，*P<0.01；与模型对照组比较，△P<0.05

3 讨 论

DM属中医学消渴范畴，因消渴阴虚燥热日久，阴阳两虚，肺脾肾诸脏俱损，我们临床观察发现，初发2型糖尿病患者表现为明显的热象，特点为上焦肺胃实热兼有下焦阴虚内热，虚实夹杂，以实热为主，据此按照中医的辨证组方原则自拟三清降糖方。以黄芩、黄连清肺胃实热，为君药；生地黄、知母、桑白皮、地骨皮滋阴降火清肺，为臣药；干姜辛热以防诸药寒凉太过，为佐药。全方实热与虚热并清，肺、脾、肾同治，故称为三清，用于治疗糖尿病，特别是青壮年患者，取得了较好的临床疗效。

DM发病的中心环节是胰岛素分泌的不足和胰岛素抵抗，临床表现主要是糖脂代谢紊乱。导致胰岛素抵抗的病因很多，TNF-α增多是其中之一。TNF-α主要是由单核巨噬细胞分泌的炎症因子，炎症因子介导的免疫炎症反应可能参与了DM的发病过程，且炎症因子还导致胰岛β 细胞分泌胰岛素功能受损，从而产生胰岛素抵抗。同时其参与T、B 淋巴细胞的激活，促进炎症细胞发生聚集与黏附，诱发慢性炎症反应和内皮功能紊乱，在胰岛素抵抗中也起重要作用[4]。TNF-α活性增强还可以促进脂肪分解引起血浆游离脂肪酸(FFA)水平增高，抑制肌肉组织胰岛素受体的酪氨酸激酶的活性，抑制胰岛素受体底物-1(IRS-1)的磷酸化和葡萄糖转运蛋白4(Glut4)的表达，从而导致胰岛素抵抗和高胰岛素血症，TNF-α水平与胰岛素敏感性呈独立负相关[5]。TG含量增多也被认为是胰岛素抵抗的原因之一，B细胞内TG积聚过多可造成其功能减退[6]。本研究结果显示，给药4周后，三清降糖缓释片组血糖、TNF-α、血脂水平与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，与格列美脲片组、三清降糖汤组比较差异无统计学意义(P>0.05)，表明三清降糖缓释片可改善血清脂质水平、血浆胰岛素浓度、胰岛素敏感性，在降低血糖的同时，有提高胰岛素敏感性、降低胰岛素抵抗的作用，为下一步的临床应用提供实验依据和理论基础。因为兔β细胞对STZ不敏感，格列美脲片根据剂量要求重新压制等原因，可能使实验结果不能全面客观的反映，我们将待确定适宜参比制剂进行生物等效性实验，且对三清降糖缓释片体内药动学进一步研究，以便为临床选择药物提供参考。

[1] 高秀娟，吴范武，马会霞，等.三清降糖方改善2型糖尿病患者胰岛素抵抗的临床研究[J].西部中医药，2012，25(4)：58-59.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：282，197，115.

[3] 方厚华，仇志华．糖尿病动物模型的研究进展[J].实验动物科学与管理，2001，18(2)：39-42．

[4] 张华珍，杨矫，苏言辉，等.罗格列酮对2型糖尿病患者胰岛素敏感性和血清炎症因子的影响[J].华西医学，2009，24(7)：1730-1732.

[5] 张萌，冯建华，张诏.清解合剂对2型糖尿病炎症因子水平的影响[J].山东中医药大学学报，2009，33(6)：486-488.

[6] 黄江荣，杜亚明，鄢进，等.加味苓桂术甘汤对代谢综合征大鼠血清抵抗素、脂联素、胰岛素、胰岛素抵抗的影响[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(6)：227-230.

(本文编辑：习 沙)

Effectsofsustained-releaseSanqingjiangtangtabletoninsulinresistanceindiabeticrabbits

LVLixun,LITangdi,ZHAOLinlin,etal.

SchoolofPharmaceuticalSciences,HebeiUnitedUniversity,Hebei,Tangshan063000

ObjectiveTo observe the effect of sustained-release Sanqingjiangtang tablets on insulin resistance in diabetic rabbits.MethodsTo induce diabetes in healthy male rabbits by high fat sugar and high salt diet，and then inject streptozotocin (STZ).50healthy male rabbits were divided into5groups randomly, control group, model group, glimepiride group，Sanqingjiangtang decoction and sustained-release tablets group.Intragastric administration of the corresponding drugs respectively for 4weeks，and then measuring blood glucose, blood lipid, insulin, TNF-α and calculating HOMA-IR．ResultsFPG, FINS, HOMA-IR and TNF-α in model group were increased as compared with those in control group (P<0.01).FPG, FINS, HOMA-IR and TNF-α in glimepiride group，Sanqingjiangtang decoction and sustained-release tablets group were decreased as compared with those in model group (P<0.05).The levels of TG, TC and LDL-C in model group were higher than those in control group (P<0.01).HDL-C in model group was lower (P<0.01).The levels of TG, TC and LDL-C in glimepiride group，Sanqingjiangtang decoction and sustained-release tablets group were lower than those in model group (P<0.05).HDL-C was higher (P<0.05).ConclusionSanqingjiangtang sustained-release tablets can significantly decrease blood lipid and glucose in diabetic rabbits.

Disease models；Animal；Diabetes；Insulin resistance；Traditional Chinese medicine therapy；Scutellaria baicalensis

※ 项目来源：唐山市科学技术局2011年唐山市科学技术研究与发展指导计划(第一批)(编号：1113020112a)

吕立勋(1972—)，女，副教授，硕士。研究方向：中药药效物质基础及制剂。

R-332；R458.5；R587.301；R654.3；R915

A

1002-2619(2014)10-1543-03

2013-09-17)

1 河北联合大学中医学院中医基础教研室，河北 唐山 063000