高压氧治疗溃疡性结肠炎患者的疗效及对Th17/Treg细胞免疫调节的影响

罗庆伟, 李志红, 田小林, 余召师, 赵敏健, 何建林

(1. 湖北省鄂州市中心医院 胃肠外科, 湖北 鄂州, 436000;2. 广西壮族自治区桂林医学院附属医院, 广西 桂林, 541001)

溃疡性结肠炎(UC)是一种慢性非特异性结肠炎症性疾病[1]以腹痛、腹泻、黏液脓血便为主要临床表现，其病因及发病机制目前尚未完全清楚，可能与遗传、免疫、微生物及环境等多种因素的相互作用有关[2]。已有研究[3]发现, Th17/Treg失衡与自身免疫性疾病包括UC关系非常密切, Th17通过分泌IL-17等多种效应因子介导炎症反应，而调节性T细胞(Treg)则能够起到拮抗作用[4], Th17/Treg平衡对维持正常免疫应答，防止自身免疫性疾病具有重要的意义。高压氧(HBO)作为一种特殊的疗法，有其独到的优势和针对性，大量研究[5-6]证实高压氧对溃疡性结肠炎具有较好的治疗效果。本文探讨高压氧治疗UC患者的疗效及其对Thl7细胞与Treg细胞的影响，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2011年10月—2013年10月UC患者74例, UC的诊断符合中华医学会消化分会炎症性肠病协作组2007年制订的《对中国炎症性肠病诊断治疗规范的共识意见》中的活动期溃疡性结肠炎诊断标准[7]。随机分为高压氧组40例，男22 例，女18例，年龄22～58岁，平均(38.2±11.5)岁；对照组38例，男23例，女15例，年龄24～59岁，平均(39.3±10.2)岁。2组年龄、性别及体质量等一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 治疗方法

对照组口服柳氮磺胺吡啶1.0 g, 4次/d。高压氧组在口服柳氮磺胺吡啶的基础上(用量、用法与对照组一致)加用高压氧治疗。在高压氧加压舱内，设定压力0.06 kPa, 加压、稳压、减压各30 min, 1次/d, 7 d为1个疗程。2组疗程均为4周。

1.3 观察指标

2组患者分别于治疗前及治疗4周后采集空腹静脉血各2 mL, 加入EDTA抗凝，实验管分别加入FITC抗人CD25mAb、FITC抗人IL-17mAb IgG1各10 μL，对照管加入同型对照抗体(PE-CD4), 流式管内混合均匀，于室温下避光孵育30 min。加入红细胞裂解液充分震荡室温避光放置10 min, 待溶液完全透明。1 200 r/min离心5 min, PBS重悬后洗涤2次，采用流式细胞仪(美国BD公司)对Treg细胞、Thl7细胞进行检测。以CD4直方图设门区分Th细胞(CD4+)，同型对照调零，最终以散点图IL-17、CD25染色阳性表示CD4+IL-17A+的Th17细胞和CD4+CD25+的Treg细胞，用Cellsquest软件获取并分析数据。

1.4 临床疗效评定标准[7]

治愈：腹痛、血便、全身中毒症状消失，结肠镜检查黏膜病变恢复正常；显效：腹痛、血便、全身中毒症状消失或轻微，结肠镜检查黏膜病变恢复正常或轻度；好转：腹痛、血便、全身中毒症状减轻，结肠镜检查黏膜病变好转；无效：治疗前后无明显变化。

1.5 统计学分析

采用SPSS 15.0统计软件进行数据分析，所得数据以均数±标准差表示，两组间进行方差齐性检验，如满足方差齐性，采用两样本t检验；如不满足，则采用秩转换检验方法。同组治疗前后数据比较采用配对t检验，P<0.05 为差异具有统计学意义。

2 结 果

2组均无完全治愈的病例，但高压氧组总有效率明显优于对照组(P<0.05)。见表1。2组患者在治疗前外周血Thl7细胞所占比例、Treg细胞所占比例、Th17/Treg细胞的比值差异均无统计学意义(t=1.747, 0.149, 0.091,P>0.05)。经柳氮磺胺吡啶治疗(对照组)或高压氧联合柳氮磺胺吡啶治疗(高压氧组)后, 2组患者外周血Thl7细胞所占比例均明显下降(t=14.679, 17.486,P<0.01), Treg细胞所占比例均明显升高(t=9.85, 13.042,P<0.01), 而Th17/Treg 细胞的比值下降(t=12.5, 9.09,P<0.01)。高压氧组Thl7细胞所占比例下降程度、Treg细胞所占比例升高程度以及Th17/Treg细胞的比值下降程度较对照组更为明显(t=9.076, 8.638, 2.227,P<0.05)。见表2。

表1 2组疗效比较[n(%)]

与对照组比较，*P<0.05。

表2 2组治疗前后外周血Th17细胞与Treg细胞所占百分比的变化

与治疗前比较，*P<0.05; 与对照组治疗后比较，#P<0.05。

3 讨 论

UC是一种慢性非特异性炎症性肠病，近年来在中国的发病率逐年上升。柳氮磺胺吡啶是目前临床一线用药，有一定的疗效，但不良反应较多。HBO具有治疗方便、简单、无副作用、患者易于接受、治疗效果好等优点。本研究采用HBO与柳氮磺胺吡啶联合应用，结果显示该法的总有效率明显高于单独使用柳氮磺胺吡啶，与国内学者报道一致[5-6]。其原因可能为[6]: ① HBO改善结肠局部氧供，增加血液及组织内氧分压，增加血氧含量及氧的弥散距离，改善结肠黏膜局部缺氧状态，从而促进细胞增生，胶原纤维形成，有利于溃疡愈合及坏死组织的修复; ② HBO使组织血管收缩，毛细血管通透性降低，渗出减少，肠壁组织水肿减轻或消失，有利于炎症吸收; HBO还可以促进侧支循环建立，改善结肠黏膜血供，促进溃疡形成; ③ HBO抑制结肠局部抗体和细胞毒免疫反应，HBO使肾上腺皮质激素分泌增加，抑制机体的细胞免疫反应和抗结肠上皮的抗体产生，阻断UC的发病机制; ④ HBO抑制结肠内微需氧菌及厌氧菌的生长繁殖，增加白细胞的杀菌能力和机体对微生物的防御能力，与抗生素协同增强抗感染作用; ⑤ HBO调节自主神经系统的功能，从而达到舒缓情绪，缓解自主神经系统的功能紊乱症状，阻断了UC的肠病理性恶性循环。

近年来，人们研究发现免疫调节异常在UC 的发病中起重要作用，但HBO是否能通过抗炎-促炎免疫平衡对UC治疗发挥免疫调节作用却未见报道。有研究[8]认为，CD4+T 细胞中的两个亚群Th17细胞与Treg细胞，二者间转化平衡是维持肠道免疫稳态的重要因素，这可能成为人类导致炎症性肠病的原因之一。Th17 细胞是一类不同于Th1 细胞和Th2 细胞的新型CD4+T 细胞亚群，其在多种自身免疫组织损伤中有重要作用，它主要通过分泌IL-17A、IL-17F、IL-22 等多种效应因子介导炎症反应，参与自身免疫性疾病[9]。Treg是一类具有免疫抑制作用的T细胞亚群，它参与免疫应答/免疫耐受的精细调控，能够抑制自身免疫并且保护组织损伤，对减少自身免疫和移植排斥反应具有重要的作用[10]。它主要通过分泌IL-4、IL-10 和TGF-β等细胞因子，与多种免疫性疾病的发病机制密切相关[11]。有文献[12]报道在发生UC时，Treg细胞数量可发生明显减少而导致免疫功能下降，打破对于肠道细菌的免疫耐受而导致UC发生。因此，调控Th17/Treg的平衡，有可能是治疗UC的一个新的途径。

本研究通过HBO对UC患者Thl7与Treg细胞数量的影响进行了初步的探讨，研究证实柳氮磺胺吡啶虽可降低患者体内Th17细胞水平，但联用HBO后抑制Th17细胞升高的作用更加明显(P<0.05); 不仅如此，联用HBO后患者体内免疫抑制性T细胞(Treg细胞)在外周血中所占比例显著升高(P<0.05), 表现出其促使抗炎性细胞因子分泌的生物学活性。这一结果提示Th17/Treg失衡可能参与UC的发生发展，而HBO联合柳氮磺胺吡啶正是通过有效的调节Th17/Treg的失衡关系，改善免疫抑制功能，抑制炎症因子的释放，达到抗炎-促炎平衡从而发挥治疗作用，这可能是其治疗UC的免疫调节重要机制之一。

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