丹参酮ⅡA磺酸钠对2型糖尿病大鼠心肌的保护作用*

李彩蓉，甘受益，黄红霞

(1．湖北科技学院临床医学院，湖北 咸宁 437100；2．咸宁市中心医院心内科)

糖尿病(DM)是以长期高血糖为主要特征的代谢综合征，可导致眼、神经、肾脏、心血管等多脏器的慢性损害[1]。目前认为糖尿病心肌病变的主要发病机制与细胞内Ca2+稳态失衡、氧化应激、细胞外基质的作用、细胞因子、脂肪酸的异常代谢有密切关系[2]。丹参酮ⅡA磺酸钠(TSN)是从传统中药丹参的根系中提取的生物活性成分，在临床上应用广泛[3]。本实验通过建立糖尿病大鼠模型，探讨丹参酮ⅡA磺酸钠干预后对糖尿病大鼠心肌氧化应激的影响。

1 材料与方法

1.1 动物模型与分组 清洁级近交系雄性Wister大鼠(180～220g)(由湖北省医学科学院实验动物中心提供)，饲养于标准环境，每笼5只。将50只大鼠予以基础饲料(脂肪10%，碳水化合物60%，蛋白质22%，其他8%)喂养适应环境1周。随机分为正常对照组(10只)，仍以基础饲料喂养。余40只参照文献[2]建立2型糖尿病模型。造模成功后取血糖较高的30只随机分为3组：DM模型组(10只)，DM+TSN小剂量(10 mg/kg)干预组(10只)，DM+TSN大剂量(20 mg/kg)干预组(10只)，继续给予高脂饮食，所有动物继续喂养8周。

1.2 药物和试剂 TSN由上海第一生化药业有限公司，链脲佐菌素购自美国Sigma公司。丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAC)、一氧化氮(NO)、巯基(SH)测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.3 标本采集与指标检测 所有动物给药8周后，处死前夜大鼠禁食过夜，自由饮水。剪断颈动脉取全血6～8ml，离心分离血清，待测各项指标。并处死动物，迅速取出心脏，部分组织进行手工匀浆，制成10%的组织匀浆。

1.4 血清及心肌组织氧化应激指标测定 采用菲罗啉比色法测定血清及心肌组织中TAC；硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定血清及心肌组织中MDA含量；二硫硝基苯甲酸法测定SH含量；硝酸还原法检测血清及心肌组织中NO含量。以上检测按试剂盒说明书操作。

1.5 CK、LDH和cTnI含量测定 生化法测定CK，LDH含量。酶联免疫法检测cTnI含量。

2 结 果

2.1 实验动物的基本情况 DM模型组大鼠出现多尿、多饮、多食状态，毛色逐渐失去光泽甚至灰暗，精神萎靡，行动迟缓。TSN干预组上述情况较DM模型组明显减轻。

2.2 TSN对糖尿病大鼠血清CK、LDH、cTnI含量的影响 DM模型组与正常对照组比较，血清中CK、LDH和cTnI含量增加(P<0.01)。小剂量TSN干预后，可降低糖尿病大鼠血清中CK、LDH和cTnI含量，但与DM模型组比较无统计学差异，和正常对照组比较，仍较高均有统计学差异，(P<0.05)。大剂量TSN干预后血清中CK、LDH和cTnI含量与DM模型组比较，有统计学差异(P<0.05)，其中血清中LDH和cTnI与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05)。结果见表1。

表1 TSN对糖尿病大鼠血清CK、LDH和cTnI含量的影响

2.3 TSN对糖尿病大鼠血清MDA、TAC、SH和NO含量的影响 与正常对照组比较，DM模型组血清MDA明显升高，血清TAC、SH、NO比正常对照组均明显降低，两组比较有统计学差异(P<0.01)。两组TSN干预后血清中TAC、SH和NO明显升高，与DM模型组比较有统计学差异(P<0.05，P<0.01)。大剂量TSN干预后还能明显降低MDA含量，与DM组比较，有统计学差异(P<0.05)。两组TSN干预后血清中MDA、TAC、SH、NO与正常对照组比较，均有统计学差异(P<0.05，P<0.01)。结果见表2。

表2 TSN对糖尿病大鼠血清MDA、TAC、SH、NO的影响

2.4 TSN对糖尿病大鼠心脏组织MDA、TAC、SH和NO含量的影响 与正常对照组比较，DM模型组心肌组织中MDA明显升高， TAC、SH、NO含量明显降低，两组比较有统计学差异(P<0.01)。两组TSN干预后能升高心肌组织中TAC和SH含量，与DM模型组比较有统计学差异(P<0.05，P<0.01)。大剂量TSN干预后还能降低MDA含量，升高NO含量，与糖尿病模型组比较有统计学差异(P<0.05)，两组TSN干预后心脏组织中MDA、TAC、SH、NO与正常对照组比较，均有统计学差异(P<0.05，P<0.01)。结果见表3。

表3 TSN对糖尿病大鼠心脏组织MDA、TAC、SH、NO的影响

3 讨 论

糖尿病心肌病变是一类不同于高血压、冠心病等的糖尿病特有的一类心脏疾病。心脏是人体最活跃的脏器之一，为完成各种生理活动心脏内存在大量的细胞酶，乳酸脱氢酶是参与体内能量代谢过程中的一个重要的酶[4]。肌酸激酶的功能是在生理水平上维持细胞内的三磷酸腺苷浓度。心肌肌钙蛋白I(cTnI)可检出微小心肌损害，成为心肌细胞损伤敏感性和特异性最强的标志物之一[5]。在本实验中检查结果提示糖尿病大鼠模型组血清中CK、LDH和cTnI(三者为肌肉组织急慢性损伤的标志)含量升高，使用TSN后，血清中CK、LDH和cTnI含量下降，说明TSN对心肌具有保护作用。

氧化应激是导致心血管疾病的重要原因之一，机体遭受各种有害刺激时，体内活性自由基产生过多，氧化程度超过氧化物的清除，氧化系统和抗氧化系统失衡[6]。MDA是脂质过氧化物，其含量的变化可直接反应氧化程度。体内存在多种抗氧化物，可清除体内产生的各种活性氧，阻止活性氧诱导的氧化应激的产生，因此测定组织和血浆中的TAC具有重要的生物学意义[7]。细胞和组织内蛋白巯基的氧化状态可指示氧化应激。研究结果显示糖尿病大鼠体内大量活性氧产生，血清和心肌组织MDA水平明显升高，TAC、SH水平明显下降，经TSN干预后，血清和心肌组织MDA水平明显下降，TAC、SH水平明显改善，结果显示TSN对糖尿病大鼠体内氧化/抗氧化整体防御体系有良好的调节作用。

NO是维持冠状动脉舒张反应的重要物质。冠状动脉内一定量的一氧化氮的释放，能够维持较低的冠状动脉阻力，保证心脏充足的供血，特别是慢性心脑血管的人，能大大减少冠状动脉缺血的危害，防止冠心病的发作。本研究结果显示糖尿病组心肌组织NO指标明显低于正常对照组，而TSN能升高NO水平。

综上所述，TSN对糖尿病大鼠心肌具有保护作用，其机制可能与抑制心肌氧化应激有关。

[1]Battiprolu PK，Gillette TG，Wang ZV，et al.Diabetic cardiomyopathy:mechanisms and therapeutic targets[J].Drug Discov Today Dis Mech，2010,7(2):e135

[2]Bugger H，Abel ED.Molecular mechanisms of diabetic cardiomyopathy[J].Diabetologia，2014 ，57(4):660

[3]Gao S，Liu Z，Li H，et al.Cardiovascular actions and therapeutic potential of tanshinone ⅡA[J].Atherosclerosis，2012,220(1):3

[4]Ma H，Li SY，Brownlee M，et al.Advanced glycation endproduct (AGE) accumulation and AGE receptor (RAGE) up-regulation contribute to the onset of diabetic cardiomyopathy[J].J Cell Mol Med,2009，13(8B):1751

[5]刘忠和，余薇，刘超,等.姜黄素对糖尿病大鼠心肌的保护作用[J].中国病理生理杂志,2014,30(4)：725

[6]胡娟.大蒜素对糖尿病大鼠血清抗氧化作用的研究[J].湖北科技学院学报(医学版)，2014,28(1):12

[7]夏文华,饶玉霞.2型糖尿病患者内皮祖细胞数量和功能研究[J].咸宁学院学报(医学版),2012,26(1):12