EB病毒感染与儿童原发性肾病综合征关系的研究

李素娥 唐骏 吴乐天

EB病毒属疱疹病毒群的一种双链DNA病毒,它可引起多种器官的损害，肾损害是其中一种常见的类型，过去有很多研究表明，EB病毒可以引起肾小球肾炎、肾损害等[1-2]。但笔者发现EB病毒感染与儿童原发性肾病综合征(PNS)关系的研究报告并不多见，故探讨了两者的关系，现报告如下。

对象与方法

一、研究对象

2010年1月至2014年1月在本院儿科住院的66例PNS患儿为研究对象，全部病例均符合第6版人民卫生出版社出版的《儿科学》中PNS的诊断标准，均为首次发病的未经治疗初诊者，并排除近亲三代内曾患有类似疾病的病例。66例中男49例、女17例，年龄11个月～13岁9个月、中位年龄6岁4个月,病程2周～2年7个月、中位病程1个月1周，按PNS类型再将66例PNS患儿分为单纯型及肾炎型进行分析，66例均无呼吸、消化或心血管系统感染性疾病。由于医学伦理及知情同意原因，本研究选取了同期住院的68例非肾脏病患儿作为对照组，其中男45例、女23例，年龄8个月～12岁5个月、中位年龄6岁2个月，急性上呼吸道感染29例、肺炎21例、腹泻病18例，68例既往均无肾脏疾病史及其他重要脏器疾病史。两组在年龄、性别方面比较差异无统计学意义。本研究经医院论理委员会批准，两组患儿家长均知情同意。

二、方 法

1.标本收集

血液标本的收集及检验：采用肾上腺皮质激素(激素)治疗前，用抗凝采血管收集PNS组和对照组外周静脉血5 ml，取1 ml稀释并加入淋巴细胞分离液，收集中间单个核细胞层，加入DNA提取液提取细胞DNA，其余血液行抗EB病毒壳抗原抗体VCA-IgM、VCA-IgG以及异形淋巴细胞检测。

肾组织标本的收集及检验：激素治疗前，对PNS患儿行肾活组织病理学检查(活检)，对照组因考虑医学伦理原因未行肾活检，用磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗肾组织3次，用10%福尔马林固定，石蜡包埋,从石蜡包埋组织块切取约5～7 μm的薄片,用二甲苯脱蜡, 无水乙醇漂洗,晾干沉淀，加入组织裂解液50 μl和蛋白酶K 2 μl，置55℃30 min，100℃煮沸10 min，14 000 r/min离心l0 min，取上清液作PCR反应模板[3]。

2.反转录PCR检测EBVDNA的表达

使用日本Takara公司设计并合成的引物，上游引物：5’-GTTCGCGTTGCTAGGCCACC-3’;下游引物：5’-AGGACCACTTATACCAGGG-3’，长度为109 bp。并根据反应试剂盒说明书对血液细胞提取液及肾组织提取的上清液建立PCR反应体系，反应条件为94℃、5 min，94℃、50 s,55℃、50 s，72℃、45 s，33个循环。用1%琼脂糖电泳鉴定目的条带。

三、统计学处理

采用SPSS 18软件处理数据,率的比较采用χ2检验，以P<0.05为比较差异有统计学意义。

结 果

一、PNS组与对照组各项指标检测结果比较

PNS组提示近期感染的血VCA-IgM及提示既往感染的VCA-IgG的阳性率均高于对照组(P均<0.05)，见表1。

表1 PNS组与对照组各项指标检测结果比较 例(%)

二、单纯型与肾炎型PNS各项指标检测结果比较

按PNS类型将PNS患儿分为单纯型及肾炎型进行分析，肾炎型PNS患儿中VCA-IgM及VCA-IgG阳性率较单纯型更高，而且其血液及肾脏表达EBV DNA的阳性率也较单纯型高(P均<0.05)，见表2。两种类型PNS及对照组血和(或)肾EBV DNA反转录PCR检测结果见图1。

图1 单纯型与肾炎型PNS以及对照组血和(或)肾EBV DNA反转录PCR检测结果

表2 单纯型与肾炎型PNS各项指标检测结果比较 例(%)

讨 论

EB病毒属于γ疱疹病毒家族，为线性双链DNA病毒，是一种非常常见的感染病毒，人群中感染率高达90%，学龄儿童感染后可无症状或出现发热、咽峡炎、肝脾及淋巴结肿大、外周血淋巴细胞增加并出现异型淋巴细胞等[4-5]。EB病毒可引起多种疾病，累及全身各个器官和系统病变[6]。EB病毒在感染机体时，机体通过自身免疫抑制EB病毒的增值，从而抑制其致病性，但其具有嗜B淋巴细胞性，可终生潜伏在机体的B淋巴细胞中，使其不能完全被机体清除，达到免疫逃逸的目的，当在某些致病因素作用下或在适当的条件下，其可大量增值并引发相关疾病。在一些免疫系统疾病如SLE、原发性干燥综合征等的研究中发现，EB病毒感染可引起免疫系统功能的紊乱。

本研究显示EB病毒与单纯性及肾炎性PNS均有关联(为了尽量避免对照组出现假阳性，本研究除了检测VCA-IgM、VCA-IgG，也检测了血EBV DNA及异形淋巴细胞)。单纯性PNS发病机制尚未明确，其肾组织中虽然未见有免疫球蛋白和补体沉积，但出现T细胞功能的紊乱，因此可能与细胞免疫功能有关。EB病毒在侵犯B淋巴细胞后,使B淋巴细胞发生抗原性改变,并进一步引起T淋巴细胞的防御性反应,形成细胞毒效应，导致受感染机体细胞的溶解和死亡[7]。因此我们认为，EB病毒可能通过扰乱细胞免疫功能引起单纯性PNS。通过免疫荧光检查可发现肾炎型PNS患者肾小球基底膜有IgG和C3沉积，提示该病与免疫复合物损害有关。Joh(1998年)与Andersson(2000年)等对间质性肾炎的病理切片进行研究发现，肾小球上可见有免疫复合物介导的损伤。因此，我们考虑EB病毒引起的免疫复合物可造成肾小球基底膜的损害，从而引起肾炎性PNS。

EB病毒是一种常见的感染性病毒，人群中感染率不低，本文通过相关的临床资料以及实验方法，发现EB病毒与儿童PNS可能存在一定关联，因此在临床上，对PNS的患儿还应注意行EBV的相关检查及抗病毒治疗。

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[3] 马路,周柱亮,杨琪，等.小儿肾病患者肾组织病毒基因表达及临床意义.中国中西医结合肾病杂志,2001,2:88-90.

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[7] 张慧，李双杰，袁远宏，等.儿童EB病毒感染不同临床疾病类型免疫功能研究.中国实用儿科杂志,2013,28:464-466.