微柱凝胶检测技术检测茵栀黄口服液中血型物质的含量

马印图，李莉华，李玉秋，张 静 ，宋俊贞

茵栀黄口服液为中成药，治疗黄疸和新生儿高胆红素血症效果明显［1-2］，用于治疗母婴血型不合引起的新生儿溶血病(hemolytic disease of the new born，HDN)、减低夫妇血型抗体效价也取得了很好的效果，主要成分为茵陈、栀子、黄芩苷、金银花等，具有清热、解毒、利湿退黄的功效。文献报道，茵陈、黄芩含有A(B)血型物质，可在胎儿体内与红细胞竞争抗体，对免疫性IgG抗体及免疫性抗体生成细胞均有抑制作用，以达到降低血型抗体效价、减少溶血对胎儿的影响来维持正常妊娠的目的［3-4］，但对血型物质含量的检测方法却未见报道。微柱凝胶检测技术(microcolumn gel technology assay，MGTA)是一种新的改良抗球蛋白试验技术，在国内已逐步作为常规技术应用于输血领域，并取得了很好的效果［5］。笔者所在科室应用MGTA检测茵栀黄口服液中血型物质的含量，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器、试剂与试药 37℃孵育器(ID-Incubator 37SⅠ)、恒速专用离心机(ID-Centifuge 12SⅡ)、微柱凝胶抗人球蛋白卡均为达亚美公司生产，微量加样器(芬兰雷勃公司生产)，人抗-A、抗-B血清、1%ABO试剂红细胞均为解放军白求恩国际和平医院输血科自制，茵栀黄口服液为北京双鹤高科天然药物有限责任公司生产(批号:272503)。

1.2 检测方法 严格按照有关血型抗体效价测定操作规程进行操作［6］:取微柱凝胶抗人球蛋白卡2张，分别标记“中和前抗体效价”和“中和后抗体效价”，分别取倍比稀释好的“1．1”项下抗血清25μl滴加到相应的标记孔内，将相应的试剂红细胞用0.9%氯化钠注射液洗涤后用低离子强度溶液(Liss液)配成1%的细胞悬液，取50μl悬液加入标记孔中，离心(1000 r/min)15 min，判读结果，记为中和前抗体效价;再取抗血清与茵栀黄口服液等量混合，37℃反应1 h，判读结果，记为中和后抗体效价。比较中和反应前后抗-A、抗-B抗体效价的变化情况，抗体效价降低则间接表示茵栀黄口服液中含有血型物质，效价无变化则表示其中不含血型物质。

2 结果

茵栀黄口服液与抗-A、抗-B血清中和反应前后抗-A抗体效价无变化，均为128，而抗-B抗体效价由中和反应前的256降为128，证实茵栀黄口服液中含有B血型物质，不含A血型物质。

3 讨论

血型物质是人类红细胞特异性物质，由多糖体和多肽类组成，具有免疫反应性而不具有免疫原性。采用中和抑制方法，在适当温度下血型物质能与抗-A(B)抗体发生中和反应而抑制抗体凝集。ABO血型物质不仅存在于红细胞内，而且在组织细胞、体液、植物、蔬菜、细菌中也广泛分布，某些中药中也含有水溶性的血型物质。细胞内的血型物质为脂溶性，可以通过相关试验测得。根据血型物质能特异性地同相应抗体结合的特点，通过检测有无抗体结合及其效价的变化，可以间接判断其中血型物质的含量。传统检测血型物质的方法是采用抗球蛋白试管法，即血型物质首先与抗血清结合，阻止抗血清与相应红细胞的结合和凝集，根据抑制凝集的程度来判定血型物质的含量。该操作步骤相对繁琐、耗时，需要对红细胞进行反复洗涤后加入抗球蛋白试剂观察凝集现象，结果判断受人为因素影响较多，重复性较差;同时受洗涤过程的影响，抗体易被洗脱而出现假阴性。MGTA是利用抗原与相应抗体的免疫特异反应和微柱凝胶的分子筛作用，通过离心将发生凝集反应的红细胞阻滞于凝胶之上，未凝集的红细胞通过凝胶间隙到达凝胶底部，从而区分有无凝集。此法实验结果清晰，无需用显微镜观察，操作简单，省去了多次洗涤的繁琐步骤，并且具有血清用量少、反应灵敏度高、结果可反复观察的优点，尤其是抗体效价检测结果中各梯度的凝集强度清晰，与传统的抗球蛋白试管法比较更能准确检测孕妇血液中的免疫性IgG 抗体和效价［7］。

母婴血型不合引起的HDN由于缺乏有效的预防和治疗药物，导致死胎、新生儿胆红素脑病发生率较高［8-9］。HDN基本病因是免疫性溶血反应，通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，K细胞Fc受体与致敏红细胞IgG抗体结合导致红细胞破裂而溶血［10］。HDN的发生与患儿血型抗原的强弱、母体内IgG抗-A(B)效价的高低、胎盘的屏障作用以及胎儿体液内血型物质的含量等因素有关，因可溶性血型物质能中和抗-A(B)抗体，从而保护胎儿红细胞不产生溶血反应，起到阻止或缓解ABOHDN发生的作用。本研究采用MGTA检测茵栀黄口服液中血型物质的含量，该法敏感性高，特异性强，结果准确，影响因素少，具有明显的优越性;检测到茵栀黄口服液中含有B血型物质，为早期干预治疗母婴血型不合引起的HDN提供了理论依据。

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