无水化处理在病理组织HE染色中的应用价值

武良美 张 雁 高凤婷

(江苏省南京市浦口区中心医院病理科 211800)

病理切片制片为病理诊断的基础工作，制片质量高低直接影响到诊断的准确与否，也反映了医院的治疗水平［1］。切片和染色为制片的主要内容，其中，HE染色为组织标本处理中最常用的染色方法，其制作简单，可得到染色稳定、色彩鲜艳的制片，但也存在一定的问题如使用过程中褪色等。此类问题的出现与苏木精与伊红染色液的pH值不够稳定有关［2－3］。对染色前的切片进行无水化处理可有效改善此类问题。本文现将无水化处理HE染色的主要内容介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂

结肠组织标本(临床科室送检样品);无水乙醇及95%乙醇(国药集团试剂厂，分析纯);苏木精及伊红Y(化学纯，上海善普化工科技有限公司);其他试剂为实验室常规试剂，均为分析纯。苏木精、伊红染色液，酸性饱和硫酸钾溶液，酸性移除溶液的配制参考文献方法［4］。

1.2 组织处理及染色

1.2.1 组织处理将送检结肠组织使用10%甲醛溶液固定，脱水、石蜡包埋，冷冻切片。切片厚度为4 μm，共80张切片。并随机分为实验组和对照组各40张。使用二甲苯洗去石蜡、无水乙醇－95%乙醇梯度水化后将切片置于蒸馏水中备用。

1.2.2 苏木精染色 将实验组切片从蒸馏水中取出，浸泡于酸性硫酸钾饱和溶液中，使充分浸泡。滴入苏木精染色液3 min。对照组切片自蒸馏水中取出后不经酸性硫酸钾饱和溶液浸泡直接苏木精染色液3 min。

1.2.3 伊红染色 实验组:从苏木精染液中取出，蒸馏水冲洗5 s后直接置于3%碳酸氢钠水溶液中，分别上下振动3次，约5 s;蒸馏水冲洗20 s后置于酸性乙醇中，分别上下振动3次，约5 s;采用伊红染色液染色5 s，蒸馏水冲洗5 s。对照组:从苏木精染液中取出，采用伊红染色液染色5 s，蒸馏水冲洗5 s。两组染色完成后采用无水乙醇 －95%乙醇梯度脱水、二甲苯透明，中性树胶封片待检。

1.3 结果观察染色完成后由两名高年资病理医生结合肉眼及显微镜(40倍)观察染色结果，以染色鲜艳、色泽分明、对比清晰、无沉渣为切片染色效果较好。

2 结果

2.1 肉眼观察结果 实验组切片着色较深，颜色鲜艳，色泽分明;对照组着色较淡，颜色不鲜艳，色泽不对不清晰。

2.2 显微镜观察结果 观察组:染色效果较好，镜下可见细胞核为深蓝色着色，且着色细腻;可明显分辨核仁与核膜;细胞质与细胞核作色对比清晰，细胞质为鲜红色，细胞核为深蓝色;未见苏木精沉渣。对照组:切片染色效果较差，细胞核与细胞质染色区分不清晰，细胞核呈淡蓝色，细胞质为淡红色;镜下可见较多苏木精沉渣。

3 讨论

常规切片技术为病理技术中是一项既普通又极其重要的技术，所制得切片质量的好坏将直接关系到临床病理诊断的准确性［5］。高质量的病理切片可给诊断提供十分有利的帮助，相反，切片褪色、质量不高等原因不仅耽误诊断的及时性，还给患者带来较大痛苦。因此，重视提高切片的质量对于病理诊断具有十分重要的意义［6］。HE染色为最为常见的切片制片技术，其操作关键在于组织的固定、脱水、浸蜡与包埋等步骤的处理是否科学、合理，但实验室常见切片染色不均、切片褪色、苏木精沉渣干扰诊断等因素均可对诊断造成干扰。如何提高病理组织HE染色切片的质量已经成为病理诊断的研究热点［7］。

常规HE染色中，精处理后的切片置入苏木精染色液后，由于切片自身携带的水分及空气中水分的酸碱度高于苏木精染色液的酸碱度，导致苏木精染色液的pH值逐渐升高，致使染色液中的碱性氢氧根离子增多。持续增多的碱性氢氧根离子可与苏木精染色液中的Al3+结合生产氢氧化铝，导致染色液中游离的Al3+减少，导致苏木红的数量减少、细胞核染色染色较淡的发生。另外，持续增加的pH值可抑制苏木精与细胞核的结合力，也促使细胞核染色不清晰的发生;较高的酸碱度导致伊红的酸碱度高于细胞质的等电点，促使伊红染色液与细胞质分离，导致染色不清晰，最终导致对诊断造成干扰［8］。

针对实验中出现的上述问题，笔者分析对组织切片进行无水化处理后再染色可有效改善切片的质量。为此，在苏木精染色阶段，将组织切片充分浸泡于酸性硫酸钾饱和溶液中，其酸碱度与苏木精染色液相当，不感染染色，可使组织切片充分脱水后染色;伊红染色阶段，将组织切片使用蒸馏水冲洗5 s后直接置于3%碳酸氢钠水溶液和置于酸性乙醇中，酸性乙醇取代了外来的水分，为有效抑制水分的渗入提供了保证，均为进行无水化处理的关键步骤。本文实验表明，经无水化处理后，组织切片HE染色的质量明显提高，具有重要的应用价值。

［1］王小晓.水溶性伊红Y不同配置法对HE染色效果的影响［J］.临床与实验病理学杂志，2013，29(5):575－576.

［2］朱忆凌，龚伟，周新木，等.细胞学涂片HE染色后直接行免疫组化染色分析［J］.现代实用医学，2012，24(8):876－877.

［3］刘海芳.HE染色切片褪色后免疫组化染色方法研究［J］.中国现代医生，2011，49(17):81 －82.

［4］王力，曹加兴，李涛，等.无水化处理在病理组织HE染色中的应用研究［J］.西南国防医药，2013，23(10):1045－1047.

［5］王法娟.高碘对大鼠下腔静脉内皮细胞活化的影响［D］.山东大学，2012.

［6］王建民.浅析病理技术 HE染色在病理诊断中的应用措施［J］.医药前沿，2013，(6):306.

［7］唐从国，郭周庆.如何做好一张HE染色切片［J］.中国组织化学与细胞化学杂志，2012，21(4):428－429.

［8］刘勇，袁晟.采用组织芯片技术进行苏木精 －伊红(HE)染色技术标准化的研究［J］.实验与检验医学，2012，30(1):19 －20，95.