博落回总碱胃内漂浮片中白屈菜红碱的含量测定

2014-08-11崔殿波王兴刚朱艳华王凤儒

中医药信息 2014年4期

崔殿波，王兴刚，朱艳华，王凤儒

(黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨 150040)

植物博落回属于罂粟科博落回属多年生草本植物，又名号筒杆、山梧桐、三钱三、山号筒等。在我国分布于长江中下游各省市地区，生长于海拔2000m以下的低山、路边及沟边。博落回主要成分为生物碱类物质，其中白屈菜红碱为一种异喹啉衍生物碱。白屈菜红碱(chelerythrine，CHE)还存在于飞龙掌血、白屈菜、血水草等植物中。CHE具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、杀虫等多种药理活性，特别是抗肿瘤活性，倍受人们的关注，CHE的分子结构的特殊性决定了其抗癌活性。利用白屈菜红碱治疗肿瘤疾病的研究也较多，本研究是将博落回总碱制成胃内漂浮片发挥其在胃内长时间滞留，达到治疗胃癌的作用。

1 仪器与试药

岛津公司LC－2010AHT型高效液相色谱仪;德国Sartorius公司Sartorius BT25S电子天平;北京国药龙立科技有限公司DP－30型单冲打片机;白屈菜红碱对照品(深圳美荷生物有限公司);博落回总碱(宝鸡鸿源生物有限公司);博落回总碱胃内漂浮片(本实验室自制);乙腈为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为迪马公司Diamonsil C18(5μm，250mm×4.6mm);流动相为乙腈－水－磷酸(25∶75∶0.1);流速为1.0mL/min;检测波长270nm;进样量10μL;柱温为35℃。

2.2 溶液制备

白屈菜红碱对照品溶液制备:精密称取白屈菜红碱对照品10.03mg，置10mL量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，即得1.00mg/mL对照品溶液。

供试品溶液制备:取博落回总碱胃内漂浮片10片，研细，混匀，取粉末约50mg，精密称定，置50mL量瓶中，加乙腈40mL超声提取30min，加乙腈定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，以0.45μm 的微孔滤膜滤过，滤液即为供试品溶液。

阴性供试品溶液的制备:按处方比例取不含博落回总碱的制剂辅料50.06mg，置于10mL容量瓶中，制成阴性供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性实验

精密量取供试品溶液和阴性供试品溶液，按照2.1条件项下进行测定，进样10μL作HPLC分析。色谱图见图1。由图可见，辅料对白屈菜红碱的测定无干扰。

2.3.2 线性关系考察

分别精密吸取2.2项下的白屈菜红碱对照品溶液100、300、500、700、900μL 加乙腈定容至 10mL 量瓶中，制成浓度为 10.00、30.00、50.00、70.00、90.00μg/mL的白屈菜红碱对照品溶液，分别精密吸取注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程:A=81794C－21495(R=0.9999)。图2表明，白屈菜红碱在浓度为10.00～90.00μg/mL之间具有良好的线性关系。

图1 空白胃内漂浮片和博落回总碱胃内漂浮片的HPLC色谱图

2.3.3 精密度实验

精密量取对照品溶液按照2.1条件项下进样10μL，连续进样6次，测得对照品溶液白屈菜红碱的平均峰面积为2465753，RSD=2.71%，表明精密度良好。

2.3.4 稳定性实验

取2.2 项下制备的供试品溶液分别于0、2、4、6、8、12h，进行HPLC分析，记录峰面积。结果峰面积无明显变化，计算RSD为2.79%，表明样品溶液在12h内稳定。

2.3.5 重复性实验

平行称取适量样品6份，精密称定，按照2.2项下操作得供试品溶液，测定峰面积。结果白屈菜红碱的平均含量为3.21%，RSD为2.97%，表明重现性良好。

2.3.6 加样回收率实验

取片重差异检测合格的博落回总碱胃内漂浮片10片，研细，混匀，精密称取9份，每份约25mg，按照2.2项下操作得供试品溶液，分别精密加入标准品0.64、0.80、0.96mg 进样测定，进样量为 10μL，测得白屈菜红碱的平均回收率为99.10%，RSD=1.91%。表明该方法加样回收率合格。结果见表1。

回收率(%)=(测得白屈菜红碱总量－样品中白屈菜红碱的含量)/加入白屈菜红碱对照品量×100%