经方薯蓣丸对变应性鼻炎大鼠模型的干预作用

向 阳，王 寅，李 宁

(云南中医学院基础医学院，昆明 650500)

变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)又称过敏性鼻炎[1]。导师王寅教授经过多年的临床实践，认为变应性鼻炎起病的内因主要责之于肺、脾、肾三脏虚损，其外因则与感受外邪密切相关，与《金匮要略·血痹虚劳病脉证治第七》中“虚劳诸不足，风气百疾”所述病机颇有相似之处，遂以薯蓣丸为主方加减治疗变应性鼻炎[2]。本研究通过观察变应性鼻炎大鼠的症状、血清IgE、IL-4含量及鼻黏膜组织形态学的变化情况，探讨薯蓣丸对变应性鼻炎大鼠模型的干预作用。

1 材料

SPF级SD大鼠60只，雄性，体质量(150±20) g，由昆明医科大学实验动物中心提供。在空调动物房常规饲养，避免过敏原存在。通窍鼻炎片(云南楚雄云中制药有限责任公司生产,批号：130101)；辛芩颗粒(四川志远广和药业有限公司生产，批号：130114)；氢氧化铝(天津市风船化学试剂科技有限公司制药厂，批号：80321)；IL-4、IgE试剂盒〔艾莱萨生物科技(上海)有限公司，批号：3646、3640〕；卵清蛋白(Sigma公司，A5253)。 经方薯蓣丸：山药、党参、白术、茯苓、干地黄、当归、川芎、白芍、阿胶、柴胡、桂枝、防风、灯笼草、杏仁、桔梗、蔓荆子、神曲、大枣、甘草、连翘，以上药物加水没过药物一指，浸泡0.5 h后武火煮沸，文火煎煮20 min，共2次。滤液浓缩至原生药含量3.2 g/mL，4 ℃冰箱低温放置备用，每次制备2 d用药量，浓缩后2 d内用完，临时用蒸馏水稀释。

Infinite M200酶标仪(Tecan公司生产);KA-1000型低速离心机(上海安亭科学仪器厂制造)；GHP-9050型隔水式恒温培养箱(上海一恒科学仪器有限公司生产)；RM2235手动轮转切片机、HI1210摊片机、HI1220烘片机(德国Leica公司生产)；Nikon Eclipse 50i显微镜(日本)等。

2 方法

2.1 模型建立 SD大鼠70只，适应性饲养7 d后随机分为:正常对照组、模型组、通窍鼻炎片组、辛芩颗粒组、经方薯蓣丸高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组10只。根据文献方法建立实验大鼠模型[3-4]，除正常对照组外，每只大鼠腹腔注射新鲜配制的卵清蛋白混悬液(OVA 0.3 mg+氢氧化铝30 mg+生理盐水1 mL)隔日1次，共7次，为基础致敏；再用2%卵清蛋白悬浊液攻击双侧鼻腔，每侧50 μL，1次/d，共7次。每次致敏后观察30 min内大鼠喷嚏、抓鼻、流涕行为学症状，记录大鼠症状得分。喷嚏:1～3个计1分，4～10个计2分，11个以上计3分；少量鼻涕计1分，涕过中线计2分，涕流满面计3分；轻抓鼻数次计1分,两者之间计2 分，四处摩擦计3分[5]。积分大于5分为造模成功。

2.2 给药方法 模型建立成功后，据《药理实验方法学》[6]“不同动物等效剂量折算系数表”将成人每日所需用药量换算成大鼠每日所需药量。高、中、低剂量组分别给予薯蓣丸浓缩水煎剂(32、16、8 g/kg)灌胃干预，辛芩颗粒组给药5 g/kg，通窍鼻炎片组给药1.8 g/kg，模型组和正常对照组每只给予口饲生理盐水0.1 mL/kg。连续干预14 d。自给药日起除正常对照组外各组继予2%OVA悬浊液滴鼻，1次/2 d，滴鼻后30 min内记录行为学得分。

2.3 指标检测 将大鼠用10%水合氯醛0.03 mL/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血4 mL，于室温下静置2 h，离心(3 000 r/min)15 min后，取上清液- 20 ℃保存待测。采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测每组大鼠血清IgE及IL-4含量，按照试剂盒说明书进行,于酶标仪450 nm波长处读取OD值，绘制曲线计算血清IgE及IL-4浓度值。大鼠取血后立即将其断头处死，并将上颌骨从颅骨中游离出来，沿鼻中线剪开鼻腔，暴露鼻中隔，剥离双侧鼻中隔黏膜并按组及时固定于10%中性甲醛溶液内，4 ℃固定2 h以上。鼻中隔黏膜石蜡包埋，常规切片行HE染色，光镜下观察鼻黏膜组织形态改变。

3 结果

3.1 干预前后行为学积分变化 从建模初次致敏7 d后进行局部抗原攻击，大鼠搔鼻、喷嚏的次数、流涕的程度成逐渐增加趋势，滴鼻14 d后各组大鼠行为学积分较正常对照组有显著差异(P<0.01)，提示建模成功；给予药物干预14 d后，薯蓣丸高、中、低剂量组、通窍鼻炎片组及辛芩颗粒组行为学评分均有下降，各组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)，如表1所示。

表1 干预前后行为学评分

注：与正常组比较，#P<0.01；与模型组比较,△P<0.01。

3.2 血清总IgE、IL-4含量测定结果 见表2。

表2 血清IgE、IL-4含量值比较

注：与正常组比较,#P<0.01；与模型组比较,△P<0.01；与辛芩颗粒组比较,▲P<0.05。

3.3 鼻黏膜组织形态学观察 显微镜下正常对照组(图1-a)大鼠鼻黏膜上皮组织及黏膜下组织和腺体结构正常，未见充血、增生性改变及炎症细胞浸润;模型组(图1-b、c)部分上皮组织脱落，黏膜下组织大量炎细胞浸润，水肿、充血，腺体增生；辛芩颗粒组(图1-g)、通窍鼻炎片组(图1-h)炎症细胞浸润减轻，仍有部分导管增粗及少量腺体增生；薯蓣丸干预后高(图1-d)、低剂量组(图1-f)组织恢复较好，仍有少量炎症细胞浸润；中剂量组(图1-e)上皮及黏膜下组织结构完整，排列均匀，未见明显腺体增生及炎症细胞浸润，提示对组织形态修复效果明显。

4 讨论

鼻塞、鼻痒、喷嚏、流涕是变应性鼻炎典型临床特征[7]，也是I型变态反应在鼻腔的集中表现。因此，上述症状的消除和减少是改善Ⅰ型变态反应的客观体现。近年来研究表明，在变应性鼻炎炎症反应过程中，血清IgE水平受多种因素的调节，其中辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2细胞)所分泌细胞因子的调节作用尤为重要[8]。Th1细胞因子主要参与细胞免疫应答,而Th2细胞因子主要参与体液免疫应答。Th1和Th2细胞之间不同的免疫调节作用相互协调、相互抑制，通过保持动态的平衡状态维持机体的正常生理功能[9]。IL-4是Th2细胞分泌的标志性细胞因子，它在IgE合成过程中具有重要的调控作用。它不仅能促进B细胞的分泌和增殖,还能促进IgE的类别转换，主要是通过诱导胚系的e基因的转录使B细胞经IgM或IgG朝IgE方向转型[10]。IL-4为IgE的正性调节因子，是变应性鼻炎患者血清中IgE合成过多的主要原因,所以降低IL-4的含量，减少IgE合成是治疗变应性鼻炎的有效途径之一。

图1 7组大鼠鼻黏膜病理切片H.E染色结果(×400)

薯蓣丸能显著降低实验性变应性鼻炎大鼠血清IL-4含量，减少IgE合成，并减轻大鼠鼻黏膜炎症细胞浸润，修复病变组织，起到抑制变态反应的作用。综合各项检测结果表明，中剂量组疗效显著优于其他各组，高剂量药液过于浓稠导致灌胃困难，消化吸收不足可能是影响其疗效低于中剂量组的原因之一。

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