复方龙葵颗粒对四氯化碳诱发肝损伤模型大鼠血清TNF-α、IL-6与IL-10的影响

罗亦灵，石 磊，王颖钰，沈明勤*

(1.南京中医药大学 药学院，南京 210023；2.江苏省中医药研究院，南京 210028)

肝脏损伤是由各种有害因子和物质引起肝脏生理和病理异常的病变过程，其发生机制颇为复杂，涉及炎症反应、免疫功能紊乱、自由基损害等多个病理生理过程。复方龙葵颗粒的处方源自南京中医药大学博士生导师、省级名老中医金实教授的经验效方“龙柴汤”，临床上用于治疗慢性乙型肝炎[1]，本文拟从复方龙葵颗粒对CCl4诱发的大鼠肝损伤模型血清TNF-α、IL-6、IL-10的影响探讨其主要的作用机制。

1 实验材料

清洁级SD大鼠，雌雄各半，体质量170～240 g，购于上海斯莱克实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK(沪)2012-0002。龙葵颗粒(浸膏):2.95 g生药/g，由江苏省中医药研究院制剂室提供，批号：20120510。联苯双酯片：25 mg/片，江苏鹏鹞药业有限公司生产，批号：1111142。肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-6、IL-10)试剂盒：R&D Systems，批号：302054，300358，300244。其他试剂：均为市售分析纯产品。7060型自动生化分析仪：日本日立(HITACHI)生产；METTLER PB303-N电子天平:上海产；TDL-S-A台式高速离心机：上海安亭科学仪器厂。

2 实验方法[2-4]

2.1 建立CCl4大鼠慢性肝损伤动物模型 清洁级SD大鼠60只,雌雄各半。随机取10只(雌雄各半)作为正常对照组。其余50只于第1周开始给予25%的CCl4花生油溶液3 mL/kg，2次/周，1次皮下注射和1次灌胃交替造模，连续10周。

2.2 分组及给药 实验大鼠共分6组。除正常对照组外，所有造模大鼠按照体质量随机分为5组，每组10只(模型对照组，阳性药对照组，龙葵颗粒大、中、小剂量组)。于造模第3周起,龙葵颗粒大、中、小剂量组大鼠予以龙葵颗粒浸膏灌胃，剂量分别为10、5、2.5 g生药/kg。阳性药对照组大鼠以联苯双酯50 mg/kg灌胃。模型对照组和正常对照组大鼠灌胃给予等量生理盐水，各鼠按10 mL/kg每日灌胃1次，连续10周，所有造模大鼠同时继续造模。

2.3 取材 末次给药后，大鼠禁食不禁水16 h后用10%水合氯醛按0.3 mL/kg体质量腹腔注射麻醉，采血分离血清，-80 ℃保存。

2.4 血清生化指标的检测 ALT，AST用全自动生化分析仪检测；血清中TNF-α、IL-6、IL-10的变化：采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)。

3 实验结果

3.1 对慢性肝损伤大鼠生化指标的影响 各给药组的ALT明显低于模型对照组(P<0.05～0.01)，龙葵颗粒大、中剂量组大鼠的ALT、AST基本接近正常空白对照组的水平。见表1。

组 别ALT/(U/L)AST/(U/L)空白对照组 33±18##103±30##模型对照组 86±41 216±90 阳性对照组(0.05 g/kg)53±17# 127±28# 龙葵大剂量组(10 g/kg)39±17## 99±16##龙葵中剂量组(5 g/kg)41±18##115±44##龙葵小剂量组(2.5 g/kg)49±29# 141±77

注：与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。

3.2 对慢性肝损伤大鼠TNF-α、IL-6、IL-10的影响 服用一定剂量的龙葵颗粒可以显著抑制慢性肝损伤大鼠TNF-α、IL-6的异常降低，使它们基本接近正常水平，这些可能是龙葵颗粒治疗慢性肝损伤的重要作用机制。见表2。

表2 龙葵颗粒对TNF-α、IL-6、IL-10的影响 pg/mL

注：与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。

4 讨论

TNF-α作为一种多功能的细胞因子,其作用具有双重性,在正常情况下,局部适量浓度具有抗肿瘤、抗感染增强免疫力等作用，但大量TNF-α持续释放会导致恶化病变,使其在疾病的发展过程中处于特殊地位[5]。IL-6具有肝脏保护作用,可能与其抗炎性质、对TNF-α的调节作用和增强肝细胞再生有关，TNF-α可诱导IL-6的合成，而IL-6抑制TNF-α的产生[6]。

本次试验中，模型组血清ALT、AST水平与正常组比较明显升高(P<0.01)，模型复制成功[7]，但是血清TNF-α、IL-6水平降低(P<0.01),与相关文献报道存在差异[8-9]，可能是因为TNF-α水平与肝细胞损伤的程度关联度不强，而与肝细胞的修复及机体免疫系统的功能恢复密切相关,机体在不同的疾病阶段(免疫耐受期、病毒消除期、病毒静止期), TNF-α水平也不同; 也可能与TNF-α的双重性有关, TNF-α可以由多种细胞分泌产生，且多种细胞因子、多种因素途径可以刺激TNF-α的分泌。这些实验结果有待进一步的研究和探讨。

本次试验提示，复方龙葵颗粒治疗慢性肝损伤的重要机制可能与其能够抑制大鼠血清中TNF-α、IL-6水平的异常降低，增强机体免疫能力有关[10]。

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