四氯化碳致小鼠肝纤维化形成中脾肾形态学动态改变

黄 高，刘 霞，王 昆，徐 照，付 强

(贵阳中医学院，贵阳 550002)

《难经·四十二难》第二段除了记述五脏的生理活动外，首次对五脏的重量、形态及容量作了解剖测量。“肝重四斤四两，左三叶，右四叶，凡七叶”“脾重二斤三两，扁广三寸，长五寸，有散膏半斤。”[1]指明了脾脏的宽度是“三寸”，长度是“五寸”，则知脾脏宽与长的比例是3∶5，这与今日解剖所见也基本符合；“肾有两枚，重一斤一两。”《难经》人体解剖学，是东方医学对世界医学作出的杰出贡献。《素问·太阴阳明论》“脾与胃以膜相连”的描述，藏象学说在此解剖学的基础上同功能相结合最终形成[2]。故中医的“肝、脾、肾”应有形态学基础，中医的“肝、脾、肾”在形态上应包含解剖学的“肝、脾、肾”，两者既相区别，又相联系。本项研究主要通过观察四氯化碳致小鼠肝纤维化形成过程中脾、肾形态结构的动态变化，从形态结构上说明四氯化碳致小鼠肝纤维化过程中对脾、肾所产生的影响。

1 材料与方法

昆明种小鼠，雌雄各半，80只，体质量20～25 g，由贵阳医学院实验动物中心提供，随机分为5组。四氯化碳为上海山浦化工有限公司产品，批号20040227；显微镜摄像CCD照相系统(日本DP73+standard 1.6)；图像分析仪(日本尼康)。

小鼠常规饲养1周后，模型1、2、3、4组：每周皮下注射40% CCl4花生油2次0.3 mL/100 g体质量[3]，正常对照组给予相应花生油注射，常规饲养。分别于造模后3、6、9、12周剖杀，取出肝脏、脾脏、肾脏观察其体积、重量、颜色及表面形态，并取肝组织、脾组织、肾组织于10%中性甲醛中充分固定后，脱水、包埋、切片，用HE染色。

光镜下观察肝组织、脾组织、肾组织的改变。计算脾指数：脾指数=脾重(mg)/体质量(g)。在40倍镜下，观察8个视野，计算白髓占总面积百分比。

2 结果

2.1 大体观察 正常对照组的肝脏、脾脏、肾脏体积、重量、颜色、质地正常，模型组小鼠第3周肝脏、脾脏、肾脏体积及重量无明显变化，肝脏表面颜色较正常组深、易碎,质地仍然柔软；脾脏、肾脏颜色、质地变化不明显。第6周可见部分肝脏重量有少许减轻,表面有较少浅色花纹，不易碎，质地软;脾脏和肾脏重量有少许增加,表面颜色较第3周模型组深。第9周所取肝组织都有重量减轻，表面也都有不同程度的浅色花纹，质地变硬；脾脏重量增加，脾脏增大，颜色较前加深；肾脏重量轻微增加，颜色质地改变不明显。第12周肝组织重量减轻及体积缩小，且表面都有浅色花纹出现，肝脏颜色总体变浅，质地较第9周硬;脾脏重量有明显增加，体积增大，颜色深紫；肾脏重量较前增加，颜色加深。

2.2 光镜下观察 正常对照组小鼠肝小叶结构完整；肾小球及肾小管形态结构无异常。模型组小鼠在第3周可见肝细胞胞浆疏松化，炎细胞浸润，肝血窦及中央静脉瘀血;脾组织白髓面积和脾血窦正常，脾细胞改变不明显；肾组织结构变化不明显，能发现少量上皮细胞微绒毛脱失。第6周见肝组织有红色纤维条索形成，肝细胞出现气球样变、脂肪变性及坏死,炎细胞浸润较多，而瘀血现象不如前；脾组织白髓面积增加，脾细胞坏死现象增多，白髓和红髓中可发现明显多核巨细胞，脾血窦有瘀血现象；肾小球结构变化不明显，但发现大量肾小管管腔变窄，管壁上皮细胞浊肿,小部分细胞出现变性坏死。第9周均可见不同程度纤维条索出现，肝细胞气球样变、脂肪变性及坏死较前加重，较多炎细胞浸润；脾索结构排列改变，脾细胞坏死和多核巨细胞增多较前加重，脾血窦瘀血较前加重；肾小球结构不完整，发现大量肾小管管壁破坏，管腔变窄，部分细胞出现变性坏死。细胞核出现浓缩现象。第12周见肝细胞索排列紊乱，纤维组织增生明显，部分肝小叶被纤维组织重新分割形成假小叶，大量炎细胞渗出。脾索结构排列不规则，脾细胞坏死和多核巨细胞增多明显，脾血窦瘀血明显；肾小囊空隙变窄，大量肾小管管腔变窄，管壁不完整，部分细胞出现变性坏死。细胞核浓缩现象，部分细胞与基底膜脱离。

2.3 各组大鼠脾指数及脾脏白髓面积占总面积百分比的比较结果 见表1。

组 别白髓占总面积百分比/%脾指数(mg/g)正常对照组24.67±2.32 4.21±0.25 模型1组 23.51±3.49 4.52±0.17 模型2组 21.73±2.67#5.63±0.19#模型3组 19.58±2.24#6.41±0.23#模型4组 17.64±3.53#7.22±0.14#

注：与正常对照组比较，#P<0.05。

正常对照组脾脏中白髓占总面积百分比明显高于其他各组(P<0.05)。模型1、2、3和4组中白髓占总面积百分比依次降低(P<0.05),模型4组最低。说明随着四氯化碳腹腔注射周期的延长，白髓中淋巴组织减少。与之相反，正常对照组脾指数明显低于其他各组(P<0.05)。模型1、2、3和4组中脾指数依次升高(P<0.05),模型4组最高。说明随着四氯化碳腹腔注射周期的延长，脾脏重量增加。

3 讨论

从中医五行角度来说，肝与脾的关系：肝脏五行属木，脾脏五行属土；若肝病犯脾，木强乘土，如仲景曰“见肝之病，知肝传脾”。肝与肾的关系：肝脏五行属木，肾脏五行属水，两者的关系是水生木；若肝行亢盛，损伤肾行，以致子病及母。肝纤维化是现代病理学概念，中医根据其临床表现特征，常将其归入“积聚”“臌胀”“黄疸”“胁痛”等病范畴。对肝纤维化病因

A为正常小鼠脾脏结构；B为模型组小鼠造模第3周脾脏结构；C为模型组小鼠造模第6周脾脏结构；D为模型组小鼠造模第9周脾脏结构；E为模型组小鼠造模第12周脾脏结构(40×10倍)图1 小鼠脾脏结构

A为正常小鼠肾脏结构；B为模型组小鼠造模第3周肾脏结构；C为模型组小鼠造模第6周肾脏结构；D为模型组小鼠造模第9周肾脏结构；E为模型组小鼠造模第12周肾脏结构(40×10倍)图2 小鼠肾脏结构

病机的认识，现代中医在继承基础之上各有所侧重，但现代医家却有一点认识是共同的：本病初期多湿热蕴结，早中期多气滞血瘀，中后期多肝脾肾虚，晚期多阳虚水聚。中西医结合消化委员会为使辨证分型规范化，于1993年制定了肝硬化的临床诊断、中医辨证和疗效评定标准(试行)[4]，将中医辨证标准分为肝气郁结证(含肝胃不和，肝脾不调)、脾虚湿盛证、湿热内蕴证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚证及血瘀证6型，并各证可以相兼。

祖国医学认为，“肾”与机体抵抗力有密切的关系，同时临床所见的慢性乙型肝炎患者可形成“肾虚”证候。70年代初王灵台教授在国内首先提出应用补肾为主，清化为辅的方法治疗慢性乙型肝炎,取得了比较满意的效果[5]。目前通过实脾补肾治疗肝纤维化的研究很多[6-8]，显示实脾补肾柔肝方对肝纤维化具有良好的治疗作用。四氯化碳作为肝脏毒物曾有大量研究，对肝脏的毒性作用是通过其代谢产生的，在线粒体混合功能氧化酶的作用下，四氯化碳可产生游离基，从而启动脂质过氧化作用，破坏肝细胞器，最终导致肝细胞坏死[9]。四氯化碳中毒在不同属动物中可有不同结果,主要引起肝脏结构和功能的改变。用于医学方面有关四氯化碳致小鼠肝纤维化中脾、肾形态学改变的研究未曾发现。

本项研究主要通过观察四氯化碳致小鼠肝纤维化形成过程中脾、肾形态结构的动态变化，从形态结构上说明四氯化碳致小鼠肝纤维化过程中对脾、肾所产生的影响。

[1]刘渊,吴潜智.难经[M].成都:四川科技出版社,2008:53.

[2]王庆其,王键,迟华基,等.内经选读[M].北京:中国中医药出版社,2005:67.

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[4]张育轩,危北海.肝硬化的临床诊断、中医辨证和疗效评定标准(试行)[J].中国中西医结合杂志,1994,14(4):237.

[5]赵钢,陈建杰.王灵台教授论补肾法为主治疗慢性乙型肝炎的机制[J].中国中西医结合杂志,2005,25(1):78-79.

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[7]陈希.卢秉久教授实脾柔肝法治疗肝纤维化理论探析[J].实用中医内科杂志,2011,25(6):10-11.

[8]张晓斌.柔肝补肾健脾活血法治疗肝纤维化72例分析[J].实用中医内科杂志,2003,17(5):406-407.

[9]宁康健,吕锦芳,姜锦鹏,等.黄芩苷对小鼠四氯化碳肝损伤保护作用的研究[J].中国中医药科技,2011,18(2):120.