结肠癌中Syndecan-1和HPA-1基因的表达及与其侵袭转移及预后的关系

闫玉虎 常 青 赵元华

结肠癌中Syndecan-1和HPA-1基因的表达及与其侵袭转移及预后的关系

闫玉虎 常 青 赵元华

目的 探讨Syndecan-1基因和HPA-1基因检测在结肠癌侵袭转移、预后评估中的临床价值。方法 选择73例结肠癌手术切除的标本，包括结肠癌组织、癌旁组织和正常组织；采用荧光定量逆转录聚合酶链反应检测三组Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA表达水平。结果 结肠癌组织中Syndecan-1 mRNA表达水平显著低于癌旁组织和正常组织(P<0.05)，HPA-1 mRNA表达水平显著高于癌旁组织和正常组织(P<0.05)；其中癌旁组织Syndecan-1 mRNA表达水平低于正常组织，HPA-1 mRNA表达水平高于正常组织，组间差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤体积、分化程度、浸润程度、淋巴结转移、血行转移、肿瘤TMN分期与Syndecan-1mRNA表达正相关，与HPA-1mRNA表达呈负相关(P<0.05)。Pearson相关性分析显示，结肠癌组织中HPA-1mRNA表达与Syndecan-1mRNA呈负相关关系(γ=-0.724,P=0.000)。结论 Syndecan-1基因和HPA-1基因检测对判断结肠癌侵袭转移、评价预后有着重要的作用，值得临床借鉴。

结肠癌；侵袭转移；硫酸乙酰肝素蛋白多糖；预后

(ThePracticalJournalofCancer,2014,29:1535～1537)

本研究采用实时荧光定量RT-PCR检测硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HPSG)家族中主要基因Syndecan-1和HPA-1基因表达水平，探讨其在结肠癌侵袭转移、预后评价中的作用，现总结如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2009年5月至2013年5月行手术切除且术后病理检查证实为结肠癌的73例标本，所有患者术前均未接受化疗或放疗。73例标本包括结肠癌组织、距癌病灶边缘2 cm的癌旁组织以及边缘的正常组织；所有标本取出后立即置于-80 ℃冰箱中保存待检。

1.2 仪器与试剂

RNAsimple 总RNA提取试剂盒购至天根生化科技(北京)有限公司，RT-PCR试剂盒由东洋纺(上海)生物科技有限公司提供；定量PCR(Rotor-gene 3000 Real-Time PCR System)。

1.3 方法

1.3.1 总RNA提取 按照RNA提取试剂盒的说明书提取RNA，进行纯度检测，并经琼脂凝胶电泳确认其完整性。

1.3.2 反转录与PCR扩增 将提取的总RNA按照RT-PCR试剂盒说明书进行反转录和扩增。相关引物由上海生物工程公司合成。Syndecan-1引物：上游5'-GCGTGAGAGCGATGTGTGTA-3'；下游5'-GACCAGTAATTGCTCGAGCA-3'；扩增长度128bp。HPA-1引物：上游5'-GCATCGGTGCTTATATCGAT-3'；下游5'-ATCGTCGATGTTAGCGATTA-3'；扩增长度105bp。内参引物：上游5'-TGATGCGTGTGTAGCATGAGAA-3'；下游5'-GCGATCGTCACTCGTGATCAG-3'；扩增长度146 bp。

1.3.3 反应体系 总体系30 μl，其中cDNA 5 μl，ddH2O 14 μl，buffer缓冲液3 μl，dNTP 1 μl，Taq聚合酶0.5 μl，MgCl24.5 μl，上游、下游引物各1 μl；扩增条件：95 ℃ 1 min，90 ℃ 1 min，60 ℃退火1 min，70 ℃延伸1 min。45个循环后，再72 ℃延伸10 min。扩增产物采用琼脂凝胶电泳，溴化乙锭染色后，将PCR产物割胶回收，并于紫外灯下观察结果。

1.4 判定标准

以2-△△Ct表示样本目的基因mRNA相对表达量，其中△Ct=样本平均Ct值-内参物平均Ct值，△△Ct=△Ct-(对照品平均Ct值-样本内参平均Ct值)。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 各组Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA表达水平比较

结肠癌组织中Syndecan-1 mRNA表达水平显著低于癌旁组织和正常组织(P<0.05)，HPA-1 mRNA表达水平显著高于癌旁组织和正常组织(P<0.05)；其中癌旁组织Syndecan-1 mRNA表达水平低于正常组织，HPA-1 mRNA表达水平高于正常组织，组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 各组Syndecan-1 mRNA和HPA-1 mRNA表达水平比较

注：a为与正常组织相比，P<0.05；b为与癌旁组织相比，P<0.05。

2.2 结肠癌组织中Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA表达与其临床参数的关系

结肠癌中Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA表达与肿瘤大小、分化程度、浸润程度、淋巴结转移、血行转移、TMN分期有着密切关系；其中肿瘤体积、分化程度、浸润程度、淋巴结转移、血行转移、肿瘤TMN分期与Syndecan-1mRNA表达呈负相关性，与HPA-1mRNA表达呈正相关性(P<0.05)，见表2。

2.3 相关性分析

Pearson相关性分析显示，结肠癌组织中HPA-1mRNA表达与Syndecan-1mRNA表达呈负相关关系(γ=-0.724,P=0.000)。

3 讨论

Syndecan-1是1种表达于上皮细胞的黏附分子，主要参与调控细胞的生长、分化以及迁移等。沈庆[1]在研究中发现，Syndecan-1能够促进细胞之间的黏附阻止细胞的侵袭和脱落，进而限制肿瘤细胞的恶性表型。当细胞发生癌变时，细胞膜上的Syndecan-1表达水平会显著降低，导致肿瘤细胞接触性抑制功能丧失，引起肿瘤细胞大量增殖分化；同时肿瘤细胞潜在转移性和侵袭性能力也随之增强。亓玉琴[2]在研究中证实，Syndecan-1在多种肿瘤的表达中均显著降低，其中降低最为明显主要包括胃癌、大肠癌等消化道肿瘤。国外学者[3]在研究中提出，Syndecan-1与胃癌细胞淋巴转移、TMN分期、浸润深度均有着密切关系。管小猛[4]研究显示，正常胃组织中Syndecan-1 mRNA阳性表达率高达99.6%，癌旁组织为31.5%，而原发性胃癌表达量仅为3.6%，这提示Syndecan-1与肿瘤转移有着密切关系，随着肿瘤浸润深度增加，Syndecan-1表达水平显著降低；换言之，Syndecan-1表达水平的减少预示着肿瘤侵袭转移的加深。在本研究中，结肠癌组织Syndecan-1 mRNA表达水平显著低于癌旁组织和正常组织，这说明在结肠癌组织中，Syndecan-1表达水平也有上述的趋势，这与王贺[5]报道结论一致。进一步研究显示肿瘤体积、分化程度、浸润程度、淋巴结转移、血行转移、肿瘤TMN分期与Syndecan-1mRNA表达负相关，这证实了Syndecan-1可以作为结肠癌侵袭转移、预后评价的指标之一，对预测患者病情、评价治疗效果具有指导作用。

表2 Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA表达与结肠癌临床参数的关系

HPA-1是1种核苷内切酶，它能够裂解细胞外基质中的硫酸乙酰肝素侧链，进而将细胞外基质分解，促进肿瘤细胞的浸润及转移。王贺[6]发现HPA-1在正常组织中表达较少，在胎盘、淋巴组织等穿透性强的组织中表达较高，而在肿瘤组织中表达水平最高。张玮[7]对卵巢癌进行HPA-1基因转染，结果显示转染后的HPA-1基因能够显著提高卵巢癌的侵袭能力。马秀梅[8]采用实时荧光定量PCR检测胃癌组织中HPA-1mRNA表达，结果显示胃癌表达阳性率为87.6%，癌旁胃黏膜为21.8%，正常胃黏膜为4.7%，该作者认为HPA-1mRNA表达于胃癌的侵袭转移、预后的病理学指标呈正相关。本研究显示HPA-1mRNA表达与Syndecan-1mRNA呈负相关，进一步分析显示HPA-1 mRNA表达水平显著高于癌旁组织和正常组织，肿瘤体积、分化程度、浸润程度、淋巴结转移、血行转移、肿瘤TMN分期与HPA-1 mRNA表达正相关，证实HPA-1基因也可以作为结肠癌评估指标之一。

综上，Syndecan-1基因和HPA-1基因参与了结肠癌的发生、发展过程，两者检测可以作为结肠癌侵袭转移、预后评估的指标。

[1] 沈 庆,兰四友,蒋幼凡,等.Syndecan-1蛋白及mRNA在肺鳞癌中的表达及意义〔J〕.山东医药,2011,51(4):98-100.

[2] 亓玉琴,司君利,李文利,等.Syndecan-1和HPA-1 mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌侵袭转移的关系〔J〕.中国癌症杂志,2010,20(2):110-115.

[3] Hassan H,Greve B,Pavao MS,et al.Syndecan-1 modulates p-integrin-dependent and interleukin-6-dependent functions in breast cancer cell adhesion,migration,and resistance to irradiation〔J〕.FEBS J,2013,280(10):2216-2227.

[4] 管小猛,洪 亮.胃癌组织中Syndecan-1的表达变化〔J〕.山东医药,2009,49(34):48.

[5] 王 贺,司君利,张修振,等.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测结肠癌中Syndecan-1 m RNA和HPA-1 m RNA的表达及临床意义〔J〕.癌症,2010,29(3):310-315.

[6] 王 贺,孙风波,张凤娟,等.肝癌中Tiam-1和HPA-1的表达及其与侵袭转移的关系〔J〕.中国肿瘤临床,2013,40(13):770-774.

[7] 张 玮,杨幸子,王 琪,等.血清基质金属蛋白酶9和乙酰肝素酶及组织蛋白酶诊断卵巢癌浸润转移程度〔J〕.中华检验医学杂志,2012,35(6):559-563.

[8] 马秀梅,王栓柱,于 宏,等.沉默乙酰肝素酶对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响〔J〕.肿瘤,2009,29(10):924-928.

(编辑：吴小红)

The Expression of Syndecan-1 Gene and HPA-1 Gene in Colon Cancer and their Correlation with Invasion and Metastasis and Prognosis

YANYuhu,CHANGQing,ZHAOYuanhua.

HubeiCancerHospital,Wuhan,430079

Objective To explore the clinical value of Syndecan-1 gene and HPA-1 gene in invasion and metastasis and prognosis of colon cancer.Methods 73 cases of colorectal cancer samples including colon cancer tissues,paracancerous tissues and normal tissues were selected.Syndecan-1mRNA and HPA-1mRNA expression of the 3 groups were detected by real-time fluorescence quantitative RT-PCR.Results The expression level of Syndecan-1 mRNA in colon cancer tissues was significantly lower than that of the paracancerous tissues and normal tissues (P<0.05),the expression level of HPA-1 mRNA in colon cancer tissues was significantly higher than that the paracancerous tissues and normal tissues (P<0.05);the expression level of Syndecan-1 mRNA in paracancerous tissues was lower than that of normal tissues,HPA-1 mRNA expression level in paracancerous tissues was higher than that of the normal tissues,the difference was statistically significant (P<0.05).Tumor size,degree of differentiation,infiltration,lymph node metastasis,hematogenous metastasis,and TMN staging were positively correlated with Syndecan-1mRNA expression,and were negatively correlated with HPA-1mRNA expression (P<0.05).Pearson correlation analysis showed a negative correlation between the expression of HPA-1mRNA and Syndecan-1mRNA in colorectal cancer (γ=-0.724,P=0.000).Conclusion Detection of Syndecan-1 gene and HPA-1 gene has important significance in evaluating invasion and metastasis,predicting prognosis of colon cancer,and it is worthy of the clinical promotion.

Colon cancer;Invasion and metastasis;Heparan sulfate proteoglycan;Prognosis

430079 湖北省肿瘤医院

赵元华

10.3969/j.issn.1001-5930.2014.12.008

R735.3+5

A

1001-5930(2014)12-1535-03

2014-08-20

2014-09-17)