试论贴壁细胞悬浮培养的特点及其体系的建立

作者简介：冯婉婉(1991.10-)，汉族。就读于西北民族大学生命科学与工程学院生物技术专业。

摘要：文章主要对贴壁细胞悬浮培养进行研究。本次研究中通过文献资料分析了贴壁细胞悬浮培养的特点，然后对培养中体系建立的要求进行明确。体系建立的过程中严格依照外植体培养标准及愈伤组织选取标准实施，体系建立非常科学。该体系的构建对细胞培养学的丰富具有一定的贡献性作用。

关键词：植物细胞；悬浮培养；特点；培养体系1.贴壁细胞悬浮培养的特点

细胞悬浮培养主要指在培养的过程中将细小的细胞聚集在培养液上实施培养，该操作主要在摇床上完成，可以在短时间内获得大量细胞，培养效果非常显著。该培养的过程中主要选取植物细胞完成培养过程，通过将植物愈伤组织处理后放置在液体培养基上进行培养操作，可以有效改善愈伤组织的分裂和增殖能力，细胞生长速度大大提升。

植物细胞悬浮培养时一般不需要支持物，生长速度较快，对培养条件要求并不苛刻。这种培养的过程中植物细胞可以悬浮在培养基中培养，上述状况下植物细胞悬浮培养面积有效提升，培养效果较好。与此同时，这种培养的过程中植物细胞敏感性一般较低，培养操作中无需加入动物细胞培养过程中的血清、微生物培养过程中的有机物质等，整体培养成本较低，经济效益较好。其具体培养特点见表1.

表1植物贴壁细胞悬浮培养中培养特点性质微生物植物细胞植物器官大小(μm)1-1010-200≥103细胞聚集经常发生通常成团毛状根、芽、体胚等倍增时间≤1h24-150h几天不等接种密度小整个体积的5%-20%大剪切力敏感程度低高、敏感高、敏感遗传稳定性强弱一般耗氧量一般低高营养要求简单较复杂较为复杂产物积累胞外，高常存于液泡中，浓度低多为胞内产物，较高通气量(L/(L.min))高≥1低≤0.6略高，1左右环境敏感性适应范围广可浸没培养长期浸没易玻璃化传统变异筛选技术广泛使用有时使用有时使用

2.贴壁细胞悬浮培养体系的建立

2.1培养流程

在实施植物细胞贴壁悬浮培养的过程中人员要严格依照培养原则要求，细化细胞培养流程，保证培养的有效性、合理性、科学性。该过程中培养人员需要控制从外植体的选取着手，控制好愈伤组织的诱导，合理筛选愈伤组织，从而提升原细胞的分裂分化的控制效果。贴壁细胞悬浮培养流程主要为：诱导、筛选愈伤组织→液体悬浮培养→形成悬浮体系。

2.2植物外植体的选取

植物外植体在选取的过程中要控制好以下三项原则：

第一，选取分化程度较低的植物部分，例如植物的幼芽、根系等；第二，选取幼嫩的部位，尽量保证组织类型较为丰富，例如植物的下胚轴、子叶等；第三，严禁选取无分化分裂部位组织细胞，部分组织细胞抑制发育物质较多也不可选取，例如老化叶片。

植物外植体的选取作为影响细胞悬浮培养的重要因素，其选取效益直接影响着后续培养质量，直接限制着植物细胞的培养效益。上述培养的过程中培养人员必须要严格依照外植体选取标准。

2.3愈伤组织的诱导筛选

愈伤组织是指外植体在培养过程中经过脱分化、再分化等过程形成的无特定细胞形态的细胞团。该细胞团具有非常好的增殖分化能力，具有较高的遗传稳定性，是植物组织形成的前提。在外植体培养获得愈伤组织后，培养人员需要对愈伤组织进行诱导和筛选，从而保证愈伤组织能够依照需求方向进行对应分裂、分化，从而提升细胞培养效益。具体诱导筛选中要控制好：

(1)培养基的选取：当前细胞培养基除了能够完成细胞培养外还可以实现细胞分离的诱导，是愈伤组织生长分化的重要促进因素。愈伤组织培养基在选取的过程中可以选取MS、SH、N6等多种类型，需要依照植物细胞特定确定对应培养操作，从而提升植物培养的有效性和合理性。例如在青钱柳无菌叶愈伤组织诱导和筛选的过程中培养人员可以通过SH培养基完成，在SH培养基中加入MS培养基成分，通过MS培养基中因素实现青钱柳无菌愈伤组织的诱导和继代培养，从而实现诱导和筛选的双管齐下，从本质上提升培养的效果和质量。

(2)激素的选取和配合：激素在选取的过程中要对其组成、配比、浓度等进行全面控制，要依照诱导和分化指标需求进行对应使用。植物细胞悬浮培养的过程中生长素常选取浓度为0.01-10mg/L左右的2,4-D、NAA、IAA等，细胞分裂素常选取浓度为0.1-10mg/L左右的KT、6-BA、ZT等。

(3)其他条件的选取：在贴壁细胞悬浮培养过程中人员要对其温度进行有效控制，保持恒温状态。愈伤组织培养中温度一般控制在25-28℃左右，可以依照植物细胞状况适当调整。部分植物细胞在培养的过程中需要适量光照才能够完成诱导，部分植物在培养的过程中需要进行暗处理才能够完成诱导，培养人员可以依照植物对光的需求对應处理，合理控制光强、光色等光照因素。

3.总结

贴壁细胞悬浮培养可以有效提升细胞的培养质量，通过培养过程中的各项处理提升细胞培养效益，从而形成安全、高性能细胞体系，对我国生物学发展和应用具有至关重要的作用。当前细胞学发展的过程中我国虽然已经加大了对贴壁细胞悬浮培养的研究，但研究深度不够，仍需进一步挖掘。

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