毛细管气相色谱法测定霉酚酸酯原料药中有机溶剂残留量

张长军，刘军，沈庆钦，贾可，刘杰

(1.鲁南制药集团股份有限公司，山东临沂 276005； 2.山东新时代药业有限公司，山东费县 273400)

毛细管气相色谱法测定霉酚酸酯原料药中有机溶剂残留量

张长军1，2，刘军1，2，沈庆钦1，2，贾可1，2，刘杰1，2

(1.鲁南制药集团股份有限公司，山东临沂 276005； 2.山东新时代药业有限公司，山东费县 273400)

建立毛细管气相色谱法测定霉酚酸酯原材料药中5种有机溶剂残留量。采用DB-WAX弹性石英毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm，0.5μm)，氢火焰离子化检测器(FID)，两次程序升温测定，5种有机溶剂能完全分离(R＞2.0)。乙酸乙酯、乙基苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯的线性范围分别为5.120～512.0，2.010～201.0，2.110～211.0，2.000～200.0，2.080～208.0 μg／mL (r＞0.999)，检出限分别为1.710，0.960，1.000，0.95，0.990 μg／mL，平均加标回收率为96.0%～103.0%，测定结果的相对标准偏差为0.76%～0.99% (n=9)。该方法准确，灵敏度高，可用于霉酚酸酯原料药中有机溶剂残留检测。

霉酚酸酯；毛细管气相色谱法；残留溶剂

霉酚酸酯(mycophenolate mofetil)是一种新型的具有免疫抑制作用的抗生素，具有高效和高安全性的优点，与其它同类药相比，无明显的肝肾毒性，主要用于肾脏和心脏移植术后器官排斥的预防，增加移植组织的成活率［1-2］。在霉酚酸酯原料药的合成工艺中，涉及到的有机溶剂主要为乙酸乙酯和二甲苯，其中二甲苯主要含有4种结构的化合物，通常为乙基苯(约17%)、邻二甲苯(约9%)、间二甲苯(约60%)和对二甲苯(14%)。根据 ICH(International of Technical Requirements for Registration of Pharmaceutical for Human Use，即：“人用药品注册技术要求国际协调会”)关于残留溶剂指导原则的要求，乙酸乙酯为三类溶剂，在原料药中的残留量不得超过0.5%，二甲苯(乙基苯，邻二甲苯，间二甲苯，对二甲苯)为二类溶剂，其残留总量不得超过0.217%。

有文献报道采用毛细管气相色谱法测定霉酚酸酯生产中用到的有机溶剂乙醇、异丙醇、乙酸乙酯和甲苯［3］，与鲁南制药集团股份有限公司生产过程使用的溶剂相差较大，不适合用于该公司产品的质量控制。为了有效控制霉酚酸酯原料产品的质量，笔者参考相关文献，建立了毛细管气相色谱法测定霉酚酸酯生产工艺中用到的5种溶剂(乙酸乙酯、乙基苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯)的残留量，并进行了方法学研究［4-7］。结果显示，该方法测量结果准确，灵敏度高，可用于霉酚酸酯中有机残留溶剂的控制。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪：7890A型，美国安捷伦公司；

电子天平：AB204-S型，瑞士Metiler Toledo公司；

霉酚酸酯：批号081201～081203，山东新时代药业有限公司；

乙酸乙酯、乙基苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、二甲亚砜：分析纯。

1.2 色谱条件

色谱柱：DB-WAX毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm，0.5μm)；气化室温度：250℃；FID检测器温度：300℃；载气：氮气；柱流量：3.0 mL／min；分流比10∶1；柱温：30℃保持2 min，以3℃／min升至80℃，然后以100℃／min升至200℃，保持5 min；进样体积：1.0 μL。

1.3 溶液制备

(1)对照品储备溶液。精密称取乙酸乙酯50.0 mg，乙基苯、间二甲苯、邻二甲苯、对二甲苯各21.7 mg，置于100 mL容量瓶中，加入二甲亚砜溶解并定容，混匀。

(2)对照品溶液。精密移取对照品贮备溶液5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入二甲亚砜溶解并定容。

(3)供试品溶液。精密称取霉酚酸酯样品0.5 g，置于10 mL容量瓶中，加入二甲亚砜溶解并定容，混匀。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件优化

通过对色谱柱、载气流量和升温梯度的考察和优化，结合系统适用性要求，最终确定了合适的色谱条件（见1.2）。在该条件下，5种有机溶剂及试样溶剂均能很好地分离，分离度R＞2.0，满足检测要求。精密移取空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液各1.0 μL，分别进样测定。色谱图见图1。

2.2 溶剂选择

用水作溶剂时，由于5种有机溶剂和霉酚酸酯样品的水溶性差而出现峰面积重复性较差，且色谱峰严重拖尾的现象，故选择溶解能力较好的二甲亚砜作为溶剂。在选定溶剂中，5种有机溶剂和样品均能较好溶解，色谱峰面积稳定，峰形较好，理论塔板数较高，且二甲亚砜对其它残留溶剂不产生干扰(见图1B)。

图1 霉酚酸酯残留溶剂色谱图

2.3 空白试验

取二甲亚砜作为空白溶液，在1.2色谱条件下进行测定。结果显示，空白溶剂无干扰峰，见图1A。

2.4 专属性试验

取对照品溶液进样测定，色谱图见图1B。结果显示，5种有机溶剂均完全分离(R＞2)，理论塔板数均大于10 000。

2.5 工作曲线方程

精密移取对照品贮备溶液10.0，6.0，5.0，4.0，3.0，2.0，1.0，0.1 mL至10 mL容量瓶中，加二甲亚砜稀释至刻度，混匀，依次进样分析。以待测溶剂的质量浓度c为横坐标、以其峰面积A为纵坐标进行线性回归，工作曲线方程、线性范围、线性相关系数见表1。

2.6 定量限和检出限

精密移取0.1 mL对照品贮备溶液至10 mL容量瓶中，加入二甲亚砜稀释至刻度，混匀。取上述溶液适量，加入二甲亚砜采用递减稀释法依次测定。以信噪比S／N=10时的质量浓度为定量限，以信噪比S／N=3时的质量浓度为检出限。5种有机溶剂的定量限和检出限见表1。

2.7 精密度试验

配制对照品溶液1份，连续进样6次，记录色谱峰面积，然后计算各组分峰面积的相对标准偏差，见表2。由表2可知，5种溶剂峰面积测定结果的相对标准偏差均小于2% (n=6)，表明该方法精密度良好。

表1 线性方程、相关系数、线性范围及检出限

表2 精密度试验结果(n=6)

2.8 回收试验

精密称取已知残留溶剂含量的霉酚酸酯样品9份，每份0.5 g，置于10 mL容量瓶中，分为3组进行测定，然后进行加标回收试验，结果见表3。由表3可知，5种有机溶剂的加标回收率在96.0%～103.0%之间，说明该方法的准确度较高。

表3 回收试验结果(n=9)

2.9 样品测定

按照方法配制供试品溶液，进样分析。结果显示，3批样品(081201，081202，081203)中，只检测到乙酸乙酯，其余4种溶剂均未检出，色谱图见图1C。3批样品中乙酸乙酯检测结果分别为0.074%，0.061%，0.065% (n=2)，产品质量符合国际标准规定的有机残留溶剂限量要求。

3 结语

采用气相色谱法对霉酚酸酯原料药中5种残留有机溶剂进行了测定。结果表明，该方法测定结果准确，灵敏度高，在考察的浓度范围内线性关系良好(r＞0.999)，加标回收率符合检测要求。该法可作为霉酚酸酯原料药中残留溶剂的控制方法。

［1］徐小薇，姜萍.免疫抑制作用的抗生素——霉酚酸酯［J］.中国药学杂志，1999(8): 66-67.

［2］叶文玲.霉酚酸酯药理作用的研究现状［J］.国外医学：泌尿系统分册，1998(6): 42-45.

［3］林斌.气相色谱法测定吗替麦考酚酯有机溶剂残留［J］.海峡药学，2011(3): 52-54.

［4］ICH指导委员会.药品注册的国际技术要求2007质量部分[M].周海钧，主译.北京：人民卫生出版社，2006: 129-144.

［5］梁汉昌.痕量物质分析气相色谱法[M].北京：中国石化出版社，2000: 5-12.

［6］吴烈钧.气相色谱检测方法[M].北京：化学工业出版社，2001: 191-192.

［7］吕鸿，张文申，许峰，等.气相色谱法快速同时测定室内装饰装修材料胶黏剂中的苯、甲苯、二甲苯的含量［J］.化学分析计量，2011(1): 59-61.

Determination of Organic Solvents Residue in Mycophenolate Mofetil by Capillary Gas Ghromatography

Zhang Changjun1，2, Liu Jun1，2, Shen Qingqin1，2, Jia Ke1，2, Liu Jie1，2
(1. Lunan Pharmaceutical Group， Shandong Linyi 276005，China；2.Shandong Newtimes Pharmaceutical Company Ltd.， Feixian 273400，China)

Capillary gas chromatography method was established to determine the contents of five organic solvents residue in mycophenolate mofetil. DB-WAX (30 m×0.53 mm，0.5 μm) capillary column was used for the separation of five solvents. Hydrogen flame ionization detector was used for detection, five solvents could be separated completely under condition of two temperature program. The linear range of ethyl acetate, ethyl benzene, p-xylene, m-xylene, o-xylene were 5.120-512.0，2.010-201.0，2.110-211.0，2.000-200.0，2.080-208.0 μg／mL, repectively, and detection limits were 1.710，0.960，1.000，0.95，0.990 μg／mL, repectively. The average recoveries of five solvents were in the range of 96.0%-103.0%，and the relative standard deviation was 0.76%-0.99% (n=9). The method is accurate, sensitive, and it is suitable for the determination of organic solvents residue in mycophenolate mofetil.

mycophenolate mofetil; capillary gas chromatography; residue solvent

O657.7

A

1008-6145(2014)04-0060-03

10.3969／j.issn.1008-6145.2014.04.018

联系人：刘军； E-mail: ljljlj0531@126.com

2014-05-08