改良高效液相色谱法测定元胡止痛滴丸和胶囊中延胡索乙素含量

杨 帆

(重庆市食品药品检验所·重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121)

元胡止痛系列品种由醋延胡索、白芷两味药组方，具有理气、活血、止痛之功效，用于气滞血瘀的胃痛、胁痛、头痛及痛经等症[1-2]。元胡止痛滴丸收载于2010 年版《中国药典第二增补本》，元胡止痛胶囊收载于2010 年版《中国药典(一部)》，两者均采用高效液相色谱(HPLC)法测定延胡索中延胡索乙素的含量，但方法仅采用氨试液-甲醇(1 ∶20)混合溶液超声提取，未进一步除杂，致使样品中延胡索乙素色谱峰分离不佳，影响含量测定结果的准确度。本试验中仅对供试品溶液制备方法进行改进，即采用甲醇对样品进行提取，并采用中性氧化铝对提取液进行纯化，使样品中延胡索乙素峰达到了基线分离，含量测定结果更为可靠。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);HPChmestation 色谱工作站。延胡索乙素对照品(中国食品药品检定研究院，批号为110736-201035，含量为99.6%);元胡止痛滴丸(甘肃陇神戎发制药有限公司，批号为20101202，20101110，20090903);元胡止痛胶囊(济南利蒙制药有限公司，批号为11100601，12020603;四川泰乐制药有限公司，批号为120803);乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:迪马Dialmonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:0.1%磷酸溶液(用三乙胺调pH 至6.0)-乙腈(65 ∶35);流速:1.5 mL/min;检测波长:280 nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取延胡索乙素对照品0.013 80 g，置50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液;精密量取1 mL，置10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。分别取滴丸或胶囊内容物适量，研细，混匀，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，取出，放冷，称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，通过中性氧化铝柱(100 ～200 目，8 g，内径1.5 cm)，用甲醇30 mL 洗脱，收集流出液和甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容于5 mL 容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。另取缺醋延胡索的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取2.2 项下4 种溶液各10 μL，按拟订色谱条件依法进样测定。结果阴性对照品溶液与对照品溶液在相同保留时间处未见色谱峰，故认为阴性对照品溶液对测定无干扰，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:取2.2 项下对照品贮备液，精密量取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置25 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10 μL，测定峰面积。以进样量(C，μg)为横坐标、峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程A=9 279.1 C-1.184 5，r=0.999 8( n=6)。结果表明，延胡索乙素进样量在0.054 98 ～0.549 8 μg 范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样5 次，测定峰面积。结果的RSD=0.88%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:分别取新制备的元胡止痛滴丸和胶囊的同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，12 h 时进样测定延胡索乙素峰面积。结果滴丸的RSD=1.3%，胶囊的RSD=1.8% ( n=5)，表明滴丸和胶囊供试品溶液在12 h 内稳定性。

重复性试验:分别取同一批元胡止痛滴丸和胶囊，依法制备供试品溶液各5 份，测定延胡索乙素的含量。结果滴丸的RSD=1.8%，胶囊的RSD=1.6% ( n=5)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已测定含量的同一批样品(同重复性试验样品，滴丸含量为0.320 0 mg/g，胶囊含量为0.409 9 mg/g)约1.0 g，各5 份，分置具塞锥形瓶中，分别精密加入延胡索乙素对照品溶液适量，按供试品溶液制备方法操作，测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 元胡止痛滴丸和胶囊加样回收试验结果(n=5)

2.4 样品含量测定

分别取元胡止痛滴丸、胶囊各3 批，依法制成供试品溶液，分别进样，测得峰面积，计算延胡索乙素的含量。结果见表2。

表2 元胡止痛滴丸和胶囊含量测定结果

3 讨论

本研究中元胡止痛滴丸、胶囊供试品溶液制备方法参考了元胡止痛片含量测定方法[1]，采用甲醇作为提取溶剂，提取液通过中性氧化铝柱纯化。试验中，比较了甲醇和氨试液-甲醇(1 ∶20)混合溶液作为提取溶剂，结果两者提取效果无明显差异，故选择甲醇为提取溶剂;同时对提取液通过中性氧化铝柱后洗脱剂甲醇的用量进行了考察，结果用甲醇30 mL 即可将氧化铝柱吸附的延胡索乙素洗脱完全。

改良后的方法除了使元胡止痛滴丸和胶囊延胡索乙素色谱峰分离更佳、含量测定结果更准确外，同时也使得滴丸和胶囊与元胡止痛片的含量测定方法一致，为系列品种通用质量标准的研究提供了参考依据。

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京:中国医药科技出版社，2010:525 -526.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典第二增补本[M]. 北京:中国医药科技出版社，2013:15.