明胶空心胶囊鉴别试验条件改进及修订操作步骤的建议

李如栋，覃志高,彭辽宇

明胶空心胶囊鉴别试验条件改进及修订操作步骤的建议

李如栋1，覃志高2,彭辽宇3

目的通过优化明胶空心胶囊鉴别试验中的某些条件，提高鉴别结果的准确性。方法在药典方法的基础上，鉴别试验(1)的母液加入一定量的活性碳进行脱色；鉴别试验(2)直接取用经脱色后的原液进行试验；鉴别试验(3)中用氢氧化钠代替钠石灰进行试验。结果鉴别试验(1)经改进后生成的絮状沉淀为真正的橘黄色，而原方法生成的颜色则为橘黄色与本底颜色的混合色；鉴别试验(2)取用经脱色后的原液进行试验的结果比原方法生成的浑浊更明显易判；鉴别试验(3)的两种方法均能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色，但氢氧化钠更易于购买与保存。结论为确保结果准确性，建议修订药典中明胶空心胶囊鉴别试验操作过程中的不合理步骤。

明胶；明胶空心胶囊；鉴别试验；脱色

明胶空心胶囊是由药用明胶所制成，以区别于其他非明胶为原料所制成的胶囊[1，2]，而明胶一般是动物的皮、骨、筋腱中的胶原质经部分水解后提纯而获得的蛋白质制品[3]，具有胶原蛋白质的理化性质。经查询文献[4-8]得知，明胶空心胶囊的鉴别试验与明胶的鉴别试验项目一致，均为3个理化鉴别。笔者在长期的日常检验中发现，由于胶囊是在明胶原料的基础上加入一定的辅料与遮光剂制作而成，如果直接按照现有方法操作，前两项鉴别试验基本无法呈现正反应；第三项鉴别的试剂则较难获取。针对这种情况，笔者对现有的方法进行改进，在前两项中去除干扰因素，对第三项寻找代替试剂，效果较好。

1 材料与方法

1.1 供试品与试剂 明胶空心胶囊8批，囊壳颜色分别为棕红、全红、黄红、黄绿、黄白、绿白、蓝白和橙黄。重铬酸钾试液、稀盐酸、鞣酸试液、纯化水均为本单位配制，氢氧化钠、钠石灰为分析纯，红色石蕊试纸为市售商品，乙醇灯。

1.2 鉴别试验(1)

1.2.1 药典法[4-8]取供试品0.25 g，加水50 ml，加热使溶化，放冷、摇匀，取溶液 5 ml，加重铬酸钾试液-稀盐酸(4∶1)的混合液数滴。

1.2.2 改进法 取供试品0.25 g，加水50 ml，加热使溶化，加入活性碳约0.5 g，煮沸2 min，摇匀，放冷，过滤，取滤液5 ml，加重铬酸钾试液-稀盐酸(4∶1)的混合液数滴。

1.2.3 结果规定 应生产橘黄色絮状沉淀。

1.3 鉴别试验(2)

1.3.1 药典法[4-8]取鉴别(1)项下剩余的溶液1 ml，加水50 ml，摇匀后，加鞣酸试液数滴。

1.3.2 改进法 取对比法中鉴别试验(1)的剩余溶液1 ml，加鞣酸试液数滴。

1.3.3 结果规定 应发生浑浊。

1.4 鉴别试验(3)

1.4.1 药典法[4-8]取本品约0.3 g，置试管中，加钠石灰少许。

1.4.2 改进法 取本品约0.3 g，置试管中，加氢氧化钠少许，混匀，加热。

1.4.3 结果规定 产生的气体能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色。

2 结 果

2.1 鉴别试验(1)结果 由表1可见，本研究中的8批明胶空心胶囊以药典法进行鉴别，仅1批呈正反应，其余7批为假阴性结果；而以改进法进行鉴别，则8批均为阳性结果。

表1 明胶空心胶囊囊壳在鉴别试验(1)中各阶段颜色变化及沉淀情况

注：“/”表示未观察到橘黄色絮状沉淀生成

2.2 鉴别试验(2)结果 以药典法进行鉴别试验(2)，在滴加鞣酸试液后，在试液的接触面有少量浑浊生成，振摇后，浑浊完全溶解；而以改进法进行试验时，则有明显沉淀生成，此时溶液也是浑浊的，振摇后，沉淀不溶解。

2.3 鉴别试验(3)结果 药典法不能呈阳性反应；改进法可以呈显阳性反应。

3 讨 论

3.1 本底色的干扰与排除 由于目前市面上的胶囊基本都在囊壳中加入遮光剂或药用色素，以满足避光或改善色泽的需要，这些额外添加的物质在上述试验条件下基本不溶于水而呈混悬状态，此时，溶液颜色即为2节囊壳所含的不同的遮光剂或药用色素溶于水后的混合色。当反应生成橘黄色絮状沉淀时，溶液更深的本底颜色将反应现象予以掩盖或表现为几种颜色的混合色，严重干扰对结果的判断，所以，必须除去本底颜色的干扰。研究表明，在原溶液中加入一定量的活性炭后，可将遮光剂或药用色素吸附于其中，过滤后溶液变为无色(或仅略显黄色)，从而排除了干扰。需要指出的是，药用炭的加入量要合适，过少则无法除尽溶液中的遮光剂或药用色素；过多则大量吸附胶原蛋白质，使其浓度大大降低而不利于后续现象的观测，甚至有时无法呈现正反应。笔者经过预实验的摸索发现，当药用炭用量约0.5 g时能起到很好的兼顾作用。

3.2 混浊与沉淀的量效关系 浑浊与沉淀的关系主要表现为量的关系，当生成的固体颗粒很少，在溶液中基本为混悬状态，即表现为浑浊；当生成的固体颗粒很多，固体颗粒过饱和时，聚集成较大颗粒沉积于容器底部而形成沉淀。本研究中两种方法之所以产生不同结果，是因为药典法将供试液稀释了50倍。行业标准解释表明：明胶在1∶4500的浓度时可和鞣酸生成絮状沉淀[8]，如果按药典法稀释，溶液浓度为0.25/(50×50)=1∶10000，当刚刚加入鞣酸试液未振摇时，鞣酸与溶液的接触面可看到少量浑浊；当振摇后，少量浑浊即全部溶于水中，这表明药典法所呈现结果不稳定，易产生误判。但改进法溶液的浓度为0.25/50=1∶200，所以浑浊(沉淀)很明显，而且此时溶液为饱和状态，振摇后沉淀也不会溶解，说明改进法能很好地保证结果的重现性。药典法之所以将原溶液稀释50倍，可能是因为以没有除去遮光剂的溶液进行试验的情况下其本底色会干扰鉴别(2)的实验现象，而稀释后使本底色变得很淡，基本不影响结果判断；但同时产生的另外一问题是，经稀释后溶解度的因素又极大地弱化了鉴别(2)的实验结果。如上所述，本研究中加入药用炭的做法起到了一举两得的效果。

3.3 碱解反应的条件改进 鉴别(3)的反应实质是胶原蛋白质与强碱在加热条件下氧化分解生成氨气，氨气能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。钠石灰是由NaOH与CaO按一定比例(CaO含量约为75%，NaOH含量>3%)混合后加一定着色剂制成的试剂，临床上用于除湿及除CO2，其中主要是发挥CaO的作用[9]。药典之所以用钠石灰作为该鉴别的反应试剂，可能是考虑到上述反应生成较多的水与CO2，应使用可除去这2个成分的试剂，消除其可能影响(氨极易溶于水，CO2可与氨在有水的情况下再度反应)。本研究结果证明，NaOH也能达到相同的效果。一般来说，NaOH为较常用的试药，价钱相对便宜，为实验室必备；而钠石灰使用率极低，价格相对较高，购买时需预订(笔者进行试验时，联系了所在城市的10余家化学试剂经销商，无一商家有现货；几经周折，一商家答应帮助订货，到货期为2个月)。而且由于钠石灰中同时存在NaOH与CaO，其吸湿与吸CO2能力大大超过NaOH，不易贮存，开瓶后不到半年，剩余的钠石灰已不能再用于做实验，造成一定的浪费。故建议药典中可考虑用NaOH代替钠石灰。另外，按药典原方法，该试验不进行加热，无法生成氨气，不利于结果的判定，所以改进实验中加入了“加热”这一实验条件。历版明胶空心胶囊标准也一直标明这一条件，但中国药典2010年版却将这一条件删除，高亚敏[10]2010年在对最新版药典进行解释时亦明确指出该鉴别一定要加热，但至今中国药典也没有进行任何修订或勘误。

总之，现行版中国药典所收载的明胶空心胶囊的3项鉴别试验均存在不同程度的缺陷，如果按照笔者研究成功的改进法进行修订则基本可以消除这些缺陷。

[1] 李如栋，覃志高.关于明胶空心胶囊脆碎度检查的建议[J].中国药房,2013,24(9): 818-820.

[2] 周 涛.明胶空心胶囊标准简介[J].明胶科学与技术,2008,28(1):47-48.

[3] 刘振龙.明胶空心胶囊质量现状及其控制策略研究[J].中国卫生产业,2011,8(6):24-25.

[4] 卫生部药典委员会.卫生部颁药品标准(化学药品及制剂第1册)[S].1989:79-81.

[5] 卫生部药典委员会.卫生部颁药品标准(二部第5册)[S].1996:39-40.

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社,2000:438-439.

[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:1204-1206,附录199,附录164,XIV,附录69.

[8] 中国医药包装协会.明胶空心胶囊[S].2007:14.

[9] 国家药典委员会.国家药品标准(化学药品地方标准上升国家标准第6册)[S].2005:121.

[10] 高亚敏.中国药典(2010年版)“明胶空心胶囊”[J].明胶科学与技术,2010,30(2):97-99.

(2013-11-11收稿 2014-03-20修回)

(责任编辑 梁秋野)

Improvementofconditionofidentificationtestaboutvacantgelatincapsulesandtheoperatingstepsofproposedamendment

LI Rudong1, QIN Zhigao2, and PENG Liaoyu3. 1. Department of Medical Service, 3. Department of Pharmacy, Guangxi Zhuang Autonomous Regional Corps Hospital, Chinese People’s Armed Police Forces, Nanning 530003, China; 2. Nanning Institute for Food and Drug Control, Nanning 530001, China

ObjectiveTo improve the accuracy of results by optimizing the conditions of gelatin capsules identification test.MethodsOn the basis of the original method, the identification test (1): to the mother liquor add a certain amount of active carbon for decolorizing; identification test (2): directly take the decolorized concentrate to do experiment; identification test (3): use sodium hydroxide instead of soda lime.ResultsIdentification test (1) the floccules generated by the improved method were of real orange color, while the floccules generated by the original method were of a mixture of orange color and background color; identification test (2): the turbidity generated by using decolorized concentrate was more marked and easier to distinguish; the two methods of identification test (3) can both make the wet red litmus paper turn blue, but sodium hydroxide is easier to procure and preserve.ConclusionsThe results of this study show that in order to ensure the accuracy of results, economy and rationality, the unreasonable steps for vacant gelatin capsules identification test should be revised.

key words gelatin;vacant gelatin capsules; identification test; decoloration

李如栋，本科学历，主管药师，E-mail:474892886@qq.com

530003南宁，武警广西总队医院：1.医务处，3.药局；2.530001，南宁食品药品检验所

覃志高，E-mail:nnqzg@163.com

R927