高效液相色谱法测定芩双片中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量*

2014-07-14王光函邸子真邹桂欣吕晓东

中国药业 2014年2期

王光函，邸子真，赵，邹桂欣，吕晓东

（1．辽宁省中医药研究院辽宁沈阳 110034； 2．辽宁中医药大学辽宁大连 116600）

芩双片是由麻黄、大青叶、甘草等9味中药组方的复方制剂，具有清热解毒、化痰止咳、宣肺平喘之功效，用于肺热壅肺型咳嗽、喘证及感冒后咳嗽。方中麻黄为君药，起到宣肺、解毒、清热的作用。本研究中采用高效液相色谱法对麻黄中的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱进行含量测定，为提高和完善本制剂质量标准提供了试验依据。

1 仪器与试药

Agilent1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；FA1004型电子天平（上海上天精密仪器有限公司）；KQ－250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。盐酸麻黄碱对照品（批号为171241－201007），盐酸伪麻黄碱对照品（批号为 171237－200807），均由中国药品生物制品检定所提供；芩双片（辽宁省中医药研究院药学室自制）；磷酸为色谱纯，水为哇哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：PhenomenexSynergi4μPolar－RP 柱（250mm×4．6mm，5 μm）；流动相：0．09%磷酸溶液（含 0．04% 三乙胺和 0．02% 二正丁胺）；检测波长：210 nm；流速：1．0 mL ／min；柱温：室温。

2．2 溶液制备

取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 mL含盐酸麻黄碱106 μg、盐酸伪麻黄碱29．12 μg的混合对照品溶液。取本品适量，研细，取 1g，精密称定，精密加入1．44%的磷酸溶液25 mL，称重，超声处理20 min，放冷，称重，用1．44%的磷酸溶液补足减失的质量，滤过，摇匀，取续滤液，即得供试品溶液。另取处方中除麻黄以外的其他药材，按芩双片处方和制法制备不含麻黄的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性考察：取对照品溶液5 μL、供试品溶液10 μL及阴性对照品溶液10 μL，按2．1项下色谱条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，在此条件下盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱与其他成分有很好的分离度，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密吸取盐酸麻黄碱（106 μg／mL）和盐酸伪麻黄碱（29．12 μg ／mL）的混合对照品溶液 2，4，6，8，10，12 μL，注入液相色谱仪中，测定峰面积，以峰面积和进样量进行线性回归，得回归方程，盐酸麻黄碱为Y＝1 752．6X＋14．12（r＝0．999 9），线性范围为 0．212～1．272 μg；盐酸伪麻黄碱：Y＝1 739X＋1．386 7（r＝0．999 8），线性范围为 0．058 24 ～0．349 44 μg。

精密度试验：精密吸取同一混合对照品溶液5 μL，重复进样6次，按上述色谱条件测定，记录峰面积。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品峰面积的RSD分别为2．37%和1．33%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液 10 μL，分别在 0，2，4，8，24 h时进样，按上述色谱条件测定，测定各峰面积，计算样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量之和。结果的RSD为1．24%（n＝5），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

重现性试验：取同一批号的样品适量，研细，取1 g，精密称定，平行6份，按供试品溶液制备方法制备溶液，上述色谱条件测定，计算样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量之和。结果的RSD为2．23%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取同一批号的样品（盐酸麻黄碱含量1．036mg／g，盐酸伪麻黄碱含量0．452 mg／g）适量，按供试品制备方法制备待测溶液按2．1项下色谱条件测定，计算样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的回收率。结果见表1和表2。

表1 盐酸麻黄碱加样回收率试验结果（n＝9）

表2 盐酸伪麻黄碱加样回收率试验结果（n＝9）

2．4 样品含量测定

对5批样品进行含量测定，每批样品平行2份，依法制备供试品溶液并测定，计算样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量之和。结果批号为 120901，120902，120902，120904，120905 的样品中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱总含量分别为 0．605，0．583，0．613，0．642，0．617 mg ／片，平均 0．6 12 mg ／片。