HPLC法测定维药恰麻古中槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量

拜 年， 贾樱樱， 海力茜·陶尔大洪， 古娜娜·对山别克

(新疆医科大学1第一附属医院药学部， 乌鲁木齐 830054； 2第二附属医院药剂科， 乌鲁木齐 830063； 3药学院， 乌鲁木齐 830011)

恰麻古植物学名为芜菁 (RadixseuFoliumBrassicaeRapae),属于十字花科芸苔属芸苔种，2年生草本植物[1-5]。芜菁具有很高的药用价值，始载于《名医别录》，味苦温，无毒。古代中医书籍记载，芜菁助消化，祛风，镇咳，驱腹胸寒气，解热毒，消肿，强身。《维吾尔药志》记：性温，开胸顺气，健胃消食，解毒；用于胸闷、腹胃胀痛、食欲不振、疮疖肿毒等疾病[6-10]。槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷是恰麻古中所含的黄酮类成分之一，目前尚未见采用HPLC法测定维新疆阿克苏、吐鲁番、伊犁地区维药恰麻古中槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量。从而为恰麻古药材质量控制中的有效成分含量测定提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1仪器高效液相色谱仪LC-20A，日本岛津 超声波清洗器SK8210HP型，上海科导公司；分析天平BS124S型(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，天平BL600型(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

1.2药材维药恰麻古采自新疆阿克苏、吐鲁番、伊犁地区，由新疆医科大学药学院生药/天药教研窒帕丽达·阿不力孜教授鉴定为十字花科芜菁(BrassicarapaL)的块根。将药材切片、晾干、粉碎、过筛，放于干燥器中备用。

2 方法与结果

2.1对照品溶液的制备精密称取适量槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品，置于100 mL量瓶中，用75%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品溶液的浓度为0.210 mg/mL。精密吸取5 mL 槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，作为对照品溶液备用

2.2供试品溶液的制备精密称取恰麻古粗粉约1.0 g，置100 mL具塞三角瓶中，加10 mL乙醇，并进行超声提取，15 min/次，共进行3次，出去滤液，称重，加入适量的乙醇溶液填补在超声过程中损失的重量，离心，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试溶液，备用。

2.3色谱条件色谱柱：KromasilC18(200 mm×4.6 mm,5 μm)， 流动相：乙腈-0.5%冰醋酸水溶液(25∶75,v/v)，检测波长：257 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：30℃，进样量：10 μL。分A、B对照品及供试品溶液，按上述色谱条件，分离较好，峰行对称，色谱图见图1。按槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的峰面积计算，柱理论塔板数>2 500。

2.4标准曲线的绘制精密吸取槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品溶液0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 mL,分别置于10 mL容量瓶中，加乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，在“2.1”条件下分别进样10 μL，以峰面积(A)对浓度(C)进行回归，绘制出标准曲线(图2)，回归方程Y=2.254×104X-8.391×103,r=0.999 7。结果槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在0.010 5～0.210 0 mg/mL的浓度范围内呈良好的线性关系。

A: 对照品 B: 供试品图1 高效液相色谱图

图2 槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的标准曲线

2.5精密度试验取槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品溶液，连续进样6次，按“2.1”项下方法测定，以峰面积(A)计算，结果槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品RSD为1.4%，说明精密度良好。

2.6重复性试验分别制备供试品溶液6份，按“2.1”项下方法测定含量，结果槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量的RSD为1.5%，说明重复性良好。

2.7稳定性试验按“2.1”项下方法制备供试液，进样通过6个时间段进行，分别为0、1、2、4、8、12 h，每次进样10 μL，测出峰面积(A)，结果RSD为0.9%，说明槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在12 h内稳定。

2.8回收率试验精密称量恰麻古粗粉约0.5 g,共9份，分别加入对照品储备液适量，按“2.1”项下方法制备低、中、高浓度的样品溶液各3份，在“2.3”项下色谱条件进行进样并计算回收率，结果平均加样回收率为99.1%，RSD为2.4%(表1)。

表1 槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷回收率试验(n=9)

2.9样品含量精密称取新疆不同产地的恰麻古，按“2.2”项下方法制备供试品溶液。每个样品重复操作5次，按“2.3”项下色谱条件测定，均进样10 μL，测得新疆阿克苏、吐鲁番、伊犁地区槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量分别为0.702、0.334、0.524 mg/g.。

3 结论

3.1色谱条件的选择通过对甲醇-水、乙腈-水系统不同比例进行考察，结果表明采用乙腈-0.5%冰醋酸水溶液为流动相可以达到良好的分离，而且色谱峰峰形良好，分析时间短，检测波长选择槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的最大吸收波长为257 nm。分离度>1.5，保留时间为6.5 min，理论塔板数>3 000。

3.2提取条件的选择本实验选用了超声法提取，通过与回流提取法比较可知回流提取法耗费时间且干扰物较多，所以采用了超声法提取，并确定75%乙醇、超声提取15 min提取率最高。

本实验采用HPLC法测定槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量，经验证其方法操作简单，精密度、重复性等均达到了定量分析的要求，准确精密，可作为恰麻古质量评价的方法之一。所得结果对以后新疆维吾尔药材的开发利用具有一定的现实意义。

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