维药罗勒子油脂的定性定量研究

阿布都许库尔·吐尔逊， 施 洋， 胡尔西丹， 孙 莲

(新疆医科大学1药学院化学教研室， 2学报编辑部， 乌鲁木齐 830011)

罗勒子为唇形科植物罗勒(OcimumbacilicumL.)的果实，是维吾尔医常用药材，已有几百年的药用历史。罗勒子性为一级干热，有止泻、开通阻滞、止血、爽身悦志、散气的作用，用于各种心脏病、心悸、痔疮出血、久泻等的治疗[1]，还可用于治感冒头痛、胸闷、妇女闭经或月经不调、暑天胃肠胀气、胸闷、口臭等[2]。现代药理学研究证明罗勒子油具有抗肿瘤、降血糖、降低血压、延长凝血时间及延长睡眠时间等作用[3]。现行的药品标准只有对罗勒子的形状和显微鉴别，无薄层鉴别及有效成分的定量测定。有研究显示，罗勒子的有效成分为亚油酸[4-10]。本研究对罗勒子中的亚油酸进行薄层鉴别，气相色谱法测定罗勒子油脂的组成及各脂肪酸的含量，为罗勒子的质量控制提供实验数据。

1 仪器及试药

1.1仪器GC2010气相色谱仪(日本岛津)，FID氢离子火焰检测器(日本岛津)，Rtx-Wax色谱柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm) (日本岛津)。

1.2试剂与药材肉豆蔻酸、软脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸对照品、内标物(正十七烷酸)均购于上海晶纯试剂有限公司。香草醛硫酸、正庚烷、三氟化硼、甲醇、石油醚、乙醚、丙酮、氢氧化钠、氢氧化钾、盐酸、酚酞均为分析纯。罗勒子购于新疆维吾尔医院，经新疆医科大学药学院天然药物教研室帕丽达·阿不力孜教授鉴定为罗勒(OcimumbacilicumL.)干燥成熟的种子。

2 方法与结果

2.1对照品溶液制备精密称取亚油酸对照品0.169 9 g，分别置25 mL量瓶中，加入10% BF3-甲醇溶液1 mL，60℃ 水浴中加热15 min，放冷，精密加入正庚烷10 mL,充分振摇，作为对照品贮备溶液。分别精密吸取亚油酸正庚烷层液1 mL，置5 mL量瓶中，加正庚烷至刻度，摇匀，即得3.399 8 mg/mL亚油酸标准储备液。

2.2供试品溶液制备称取过60目筛得罗勒子粉末100 g , 以石油醚为溶剂用索式提取脂肪油，精密称取罗勒子脂肪油70 mg,置25 mL量瓶中, 加入0.5 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液1 mL， 60℃ 水浴中加热15 min, 取出, 放冷, 再精密加入10% BF3甲醇溶液1 mL，60℃ 水浴中加热15 min，取出，放冷，精密加入正庚烷10 mL，充分振摇，取正庚烷层,作为供试品溶液。

2.3亚油酸薄层鉴别分别吸取亚油酸对照品溶液5 μL及供试品溶液1 μL，分别点于硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(37∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸试液，于105℃ 加热至斑点显色清晰，放在荧光下观察。供试品色谱中，在与亚油酸对照品溶液色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点，结果见图1。

254 nm (a: 紫外光) 366 nm (b: 紫外光) c: (可见光)

2.4色谱条件色谱柱: Rtx-Wax色谱柱(规格：meter 0.25 mmID，0.25 μm df)，柱温170℃，进样口温度250℃，氢焰离子化检测器，温度250℃，进样量1 μL，分流比(1∶15)。

2.5溶液的制备

2.5.1 对照品溶液的制备及甲脂化 精密称取肉豆蔻酸、软脂酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸 、油酸标准品各100 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成10 mg/mL标准储备液，取各标准品储备溶液50 μL，用甲醇稀释至1 mL，制成0.5 mg/mL单标液储备液。取内标物用甲醇配成1.0 mg/mL储备液，使用时再稀释成0.1 mg/mL溶液。取6种脂肪酸储备溶液各500 μL，置于10 mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得25 μg/mL混标液。取以上混标液6 mL于反应瓶中，加15%的三氟化硼-甲醇溶液2 mL，于60 ℃水浴回流酯化5 min后，精密加入正庚烷5 mL，用冷水迅速冷却回流装置，加入饱和氯化钠溶液2 mL，猛烈振摇，取上层正庚烷溶液备用。

2.5.2 罗勒子油脂的提取 称取罗勒子粉100 g，用乙醚超声提取1 h，过滤得淡黄色油脂，含油量达25%。

2.5.3 罗勒子油脂皂化及甲脂化 取罗勒子油脂约20 mg，精密称定，置回流瓶中，加0.5 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液2 mL，于60℃水浴中回流10 min，取出放冷至室温，再加15%的三氟化硼-甲醇溶液2 mL，于60℃水浴回流酯化5 min后，精密加入正庚烷5 mL，用冷水迅速冷却回流装置，加入饱和氯化钠溶液2 mL，猛烈振摇，取上层正庚烷溶液1 μL，在上述色谱条件下进样，色谱图见图2和图3。

2.6方法学考察

2.6.1 线性关系考察 精密量取以上制备的脂肪酸标准品混合液适量，置于离心管中，氮气吹干，加入内标溶液，溶解，分别进样1、3、5、7、9 μL，以亚麻酸、花生四烯酸、肉豆蔻酸、油酸、软脂酸、亚油酸的峰面积对正十七烷酸的峰面积的比值对各种脂肪酸的浓度进行线性回归，得回归方程，结果见表1。

2.6.2 精密度试验 取供试品连续进样5次，测定各脂肪酸的峰面积对正十七烷酸峰面积比值的RSD% 值分别为1.3%、2.9%、5.4%、1.8%、2.5%、3.1%。

图2 罗勒子油样品GC色谱图

1：肉豆蔻酸 2：软脂酸 3：亚油酸 4：亚麻酸 5:花生四烯酸 6:油酸

表1 6种脂肪酸标准品的标准曲线(n=5)

2.6.3 重复性试验 取同一批供试品共5份，在上述色谱条件下平行操作，测得亚麻酸、花生四烯酸、肉豆蔻酸、油酸、亚油酸、软脂酸的峰面积对正十七烷酸峰面积比值的RSD% 值分别为3.7%、4.6%、2.3%、3.4%、4.3%、1.0%。

2.6.4 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在同一天不同时间分别测定各脂肪酸的含量，结果基本稳定，含量的RSD分别为1.7%、3.3%、2.5%、1.9%、3.6%、2.7%。

2.6.5 回收率试验 精密称取已知各种脂肪酸含量的样品9份，于每3份中依次加入200 μL低(50 μg/mL)、中(200 μg/mL)、高(500 μg/mL)浓度的混标溶液，按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，进样测定，结果见表2。

2.7罗勒子中各脂肪酸含量的测定将以上制备的供试品溶液，在选定的色谱条件下进样1 μL，计算亚麻酸、花生四烯酸、肉豆蔻酸、油酸、亚油酸及软脂酸的相对含量分别为32.23%、14.69%、23.34%、19.35%、28.34%及15.65%。

表2 回收率测定结果

3 结论

3.1展开剂的选择在薄层鉴别研究过程中，分别考察了石油醚-乙酸乙酯(37∶3)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(10∶30∶2)、石油醚-醋酸乙酯(8∶3)、石油醚-醋酸乙酯-甲酸(18∶2∶1)等展开系统，结果表明，石油醚-乙酸乙酯(37∶3)的Rf值为0.72，较合适，分离效果良好。

3.2提取方法的选择比较了超声提取及索氏提取法对罗勒子脂肪油提取率的影响，结果表明2种提取方法对罗勒子脂肪油的提取率基本相等，考虑超声提取方法方便简单的特点，故选择超声提取法。

3.3甲酯化试剂的选择由于罗勒子所含不饱和脂肪酸大多为十二碳以上的长链不饱和脂肪酸，选用氢氧化钾- 甲醇溶液进行甲酯化，酯化反应不完全；三氟化硼- 甲醇溶液对十二碳以上的长链不饱和脂肪酸酯化效果较好，本实验用三氟化硼- 甲醇溶液进行甲酯化。

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