三七有效成分对免疫性肝损伤的保护作用

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三七有效成分对免疫性肝损伤的保护作用

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目的 研究三七有效成分三七总皂苷、总黄酮及多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法昆明种小鼠60只随机分为正常组（A组）、模型组（B组）、三七总皂苷组（C组）、三七总黄酮组（D组）、三七多糖组（E组）。C、D、E组分别给予三七总皂苷、三七总黄酮、三七多糖灌胃，1次/d，14 d后B、C、D和E组于尾静脉注射卡介苗，26 d于尾静脉注射脂多糖，禁食12 h后于眼球静脉丛采血，检测血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、白细胞介素-4（IL-4）的含量；取肝、脾、胸腺计算脏器指数；另取肝脏做病理学检查。结果与B组比较，C、D、E组小鼠肝、脾、胸腺指数、血清ALT水平明显降低（P＜0.01），IL-4、T-SOD显著升高（P＜0.01）；病理学示C、D、E组肝脏炎症细胞浸润、水肿和点状、片状坏死程度均比B组明显减轻。结论三七总皂苷、总黄酮及多糖对免疫性肝损伤均有明显的保护作用。

三七皂甙；卡介苗；脂多糖类；三七总黄酮；三七多糖；免疫性肝损伤

三七为五加科植物参三七的根，含皂苷类、黄酮类、多糖类、醇类及三七素等有效成分。三七的药理作用非常广泛，具有止血、活血化瘀、降血脂、降血压、抗衰老、抗炎、抗肿瘤及调节免疫等作用。实验表明，三七总皂苷具有增强细胞免疫、体液免疫和自然杀伤（NK）细胞功能的作用[1]。研究发现三七提取活性成分Rh2、Rg3能够保护荷瘤小鼠的免疫器官并增强免疫功能，提高荷瘤小鼠的免疫应答，调节细胞因子的分泌[2]。而有关三七的其他活性成分对肝组织细胞的免疫损伤作用尚少见相关报道。本研究通过卡介苗（BCG）联合脂多糖（LPS）诱导小鼠免疫性肝损伤模型，观察三七有效成分三七总皂苷、总黄酮及多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料 昆明种小鼠60只，体质量20～25 g，雌性，清洁级，购自右江民族医学院动物房，动物许可证号：syxk桂2011-0010。三七粉（云南向辉生物科技有限公司），按文献[3-5]分别醇提三七总皂苷、醇提三七总黄酮、水提三七多糖。BCG购于成都生物制品研究所有限责任公司，LPS购于美国sigma公司，白细胞介素（IL）-4试剂盒（96T）购于美国R＆D公司，血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)试剂购于南京建成生物工程研究所，丙氨酸转氨酶（ALT）试剂购于四川迈克生物科技股份有限公司。722可见光分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），Tristar-LB941多功能酶标仪（德国伯托公司），HH·W21·600S数显电热恒温水温箱（上海跃进医疗器械厂），TGL-18G-C高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂），组织包埋机（德国美康公司），Primo star生物显微镜（德国卡尔·蔡司公司）。

1.2 方法

1.2.1 分组及给药 将60只雌性小鼠用数字表随机分为正常组（A组）、模型组（B组）、三七总皂苷组（C组）、三七总黄酮组（D组）和三七多糖组（E组），每组12只。C、D、E组分别给予三七总皂苷、三七总黄酮、三七多糖（400 mg·kg-1·d-1）灌胃，A组和B组给予等量生理盐水灌胃。

1.2.2 造模及处理 给药14 d后，B、C、D和E组于尾静脉注射BCG 0.2 mL（12.5 mg/kg，约含5×107个活菌）。26 d后再于尾静脉注射LPS 7.5 μg/只（0.2 mL）。禁食不禁水12 h后称体质量，经眼眶后静脉丛采血，脱臼处死，立即取肝脏、脾脏和胸腺。计算脏器指数=脏器质量(mg)/体质量(g)×100％。取相同部位及大小的肝组织小块，放入10％福尔马林溶液中固定，常规HE染色，光镜下观察组织病理学变化。采血后室温放置30 min，3 500 r/min离心5 min，取血清测定ALT、IL-4和T-SOD含量，按试剂盒说明书操作。

1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件进行处理，数据以±s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，LSD-t法进一步做两两比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组小鼠脏器指数比较 B组体质量低于A组，而肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数明显高于A组；且C、D及E组的肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数明显低于B组（均P＜0.01），见表1。

Tab.1 Comparison of organ index between five groups of mice表1 各组小鼠脏器指数比较 （n=12，±s）

Tab.1 Comparison of organ index between five groups of mice表1 各组小鼠脏器指数比较 （n=12，±s）

＊＊P＜0.01；a与A组比较，b与B组比较，P＜0.01

组别A组B组C组D组E组F体质量（g）32.870±2.250 30.508±2.094a32.975±2.525 33.950±3.274 28.373±1.505 10.529＊＊肝脏指数（mg/g）4.591±0.382 5.246±0.095a4.729±0.192b4.636±0.120b4.702±0.313b9.027＊＊组别A组B组C组D组E组F脾脏指数（mg/g）0.371±0.177 0.506±0.121a0.410±0.059b0.424±0.051b0.425±0.041b17.648＊＊胸腺指数（mg/g）0.328±0.072 0.392±0.075a0.281±0.093b0.288±0.081b0.301±0.082b16.604＊＊

2.2 各组小鼠血清ALT、IL-4、T-SOD含量比较 B组的ALT高于A组，IL-4、T-SOD低于A组；C、D、E组的血清ALT低于B组，IL-4、T-SOD水平高于B组（均P＜0.01），见表2。

Tab.2 Comparison of serum levels of ALT,IL-4 and T-SOD between five groups of mice表2 各组小鼠血清ALT、IL-4和T-SOD水平比较（n=12，±s）

Tab.2 Comparison of serum levels of ALT,IL-4 and T-SOD between five groups of mice表2 各组小鼠血清ALT、IL-4和T-SOD水平比较（n=12，±s）

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2.3 小鼠肝脏肉眼观察 B组肝脏肿大，表面有大小不等的坏死斑点。C、D及E组肝脏肿大较轻，坏死斑较B组轻。A组肝脏表面光滑未见肿大和坏死斑点。

2.4 肝组织病理学检查 与B组相比，C、D和E组肝组织炎症细胞浸润、水肿、坏死程度及纤维增生均明显减轻，见图1。

3 讨论

目前BCG+LPS联合诱导小鼠产生免疫性肝损伤的动物模型是研究临床肝炎发病和治疗较理想的动物模型[6]，BCG与LPS联合诱导小鼠产生的免疫性肝损，其病理改变与肝细胞损伤机制和乙型病毒性肝炎相类似，其病理组织学的特征损伤是肝坏死和大量的单核细胞浸润[7]。本实验采用小鼠尾静脉注射BCG+LPS造模后，病理组织观察肝细胞严重水肿、坏死，汇管区及周围大量炎性细胞浸润，证明BCG+LPS所造成的小鼠免疫性肝炎模型获得成功。采用三七总皂苷、三七总黄酮和三七多糖灌胃后，肝组织病理观察显示肝细胞肿胀、坏死，汇管区及周围大量炎性细胞浸润现象明显减轻，说明三七总皂苷、三七总黄酮和三七多糖均可对小鼠免疫性肝损伤具有保护作用。

免疫器官指数是衡量机体免疫功能的初歩指标，在一定程度上可反映免疫器官内淋巴细胞的数量，肝脏指数可反映肝脏的损伤及炎症程度。本实验结果显示给予三七总皂苷、三七总黄酮和三七多糖灌胃后能明显降低小鼠肝、脾、胸腺指数，说明三七能抑制炎性介质的分泌。

IL-4是Th2细胞自身分泌的生长因子，对于B细胞、T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和造血细胞都有免疫调节作用[8]。本实验中B组血清IL-4水平较A组明显降低，说明Th2细胞活性受到抑制，而C、D、E组给药后IL-4含量显著增高，说明Th2细胞活性受抑制得到缓解，结果表明三七总皂苷、三七总黄酮和三七多糖具有不同程度的调节Th2细胞分泌的功能。

活性氧自由基引发的氧化应激是肝病发病的共同病理生理基础，因此，对氧化应激导致肝细胞损伤的研究便成为治疗肝脏疾病的一个重要途径[9]，SOD对氧自由基有清除作用，可保护细胞免受损伤。BCG+LPS所致的小鼠免疫性肝损伤过程中可诱导免疫反应产生大量氧自由基，本实验结果显示，B组T-SOD活性比A组显著降低，而C、D、E组用药后血清T-SOD活性显著升高，表明机体抗氧化能力增强，加速自由基的清除。此外，B组血清ALT含量明显升高，而C、D、E组血清ALT含量显著降低，说明给药组肝脏受损伤程度减轻。

综上，三七总皂苷、三七总黄酮和三七多糖对免疫性肝损伤均有不同程度的保护作用，三者作用无明显差异。

Fig.1 Pathological images of liver tissues in five groups of mice（HE，×200）图1 各组小鼠肝组织病理学观察（HE，×200）

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（2014-02-17收稿 2014-04-20修回）

（本文编辑 闫娟）

Protective Effects of Active Ingredients of Notoginseng on Immunological Liver Injury

WEI Wei1,HUANG Yongzhi2,LIANG Liudan1,NONG Fengying1,NONG Chaopeng1,LI Tao1△
1 Youjiang Medical College for Nantionalities,Guangxi 533000,China;2 Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities
△

E-mail:lili0841@qq.com

ObjectiveTo investigate the protective effects of active components of notoginseng on immunological liver injury in mice.MethodsSixty Kunming mice were randomly divided into normal group(group A),model group (Group B),PNS group(Group C),total flavonoids group(Group D),and polysaccharide group(group E).C,D and E groups were given PNS,total flavonoids and polysaccharide orally,1/day for 14 days.Then BCG was intravenous injected in B,C,D and E groups,and after 26 days lipopolysaccharide(LPS)was intravenous injected.Samples of eye venous plexus blood were collected,and serum levels of alanine aminotransferase(ALT),total superoxide dismutase(T-SOD)and Interleukin-4(IL-4) were detected.Organs index was calculated by checking pathological resultsof liver,spleen and thymus.ResultsCompared with group B,the thymus index and serum ALT levels were significantly decreased in C,D and E groups(P＜0.01), but the levels of IL-4 and T-SOD increased significantly(P＜0.01).Pathological resultsshowed that there were more serious inflammatory cell infiltration in liver,edema and necrosis of dot in C,D and E groups than those in group B.ConclusionThe active components of notoginseng showed a significant protective effect on immunological liver injury.

sanchinoside；BCG vaccine；lipopolysaccharides；total flavonoids；polysaccharide；immune liver injury

R285.5

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.09.011

广西壮族自治区2013年度自治区级大学生创新训练项目（QJCX201347）

1右江民族医学院临床学院（邮编533000）；2右江民族医学院附属医院

△通讯作者 E-mail:lili0841@qq.com