2011至2013年唐山市丰南区手足口病病原学监测结果分析

刘伟 姚向晖

手足口病(hand－foot-mouth-disease，HFMD)近几年有全球性流行的趋势，由于该病无法在一次感染后获得终生免疫且引发手足口病的肠道病毒有20多种。所以对于重症病例、聚集性病例、疑难病例实验室检测显得尤为重要。目前国内手足口病的病原体以柯萨奇病毒A组16型(CA16)和肠道病毒71型(EV71)为主［1］。为了解丰南地区手足口病病原体的分布特征，为手足口病的诊断和预防措施提供科学依据，现将2011至2013年唐山市丰南区HFMD的病原学监测结果进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2011至2013年唐山市丰南区医疗机构就诊的手足口病患儿的咽拭子标本，标本采用冷链运送至实验中心立刻检测或－70℃冻存待检。

1.2 主要仪器与试剂 DA7600PCR扩增仪DYY-6C型水平电泳仪GAS7100B型凝胶成像仪，人肠道病毒(HEV)RNA、EV71RNA、CA16RNA检测试剂盒由广州中山大学达安基因股份有限公司提供，引物由上海之江生物科技有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 核酸提取严格按照说明书操作，运用Trizol试剂裂解沉淀法提取肠道病毒RNA。

1.3.2 Real Time RT-P CR扩增操作均按照试剂盒说明书进行，反应体系25 μl，每次实验均设置阴性对照和阳性对照扩增程序:40℃25 min，1个循环;94℃3 min，1个循环;93℃ 15 s～55℃ 45 s，共40个循环;72℃ 7 min;4℃保存。

1.3.3 检测扩增产物用0.5×TBE缓冲液配制2.5%琼脂糖凝胶，加样后110 V电压持续电泳50 min，用凝胶成像仪对PCR产物条带进行分析，以DL2000marker作为参照标准在紫外灯下观察特异性核酸条带，有目的片段条带出现即判为阳性。

1.4 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计量资料以表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2011至2013年丰南地区手足口流行情况 丰南地区的手足口病疫情已开始实施网络直报，数据显示，2011年报告发病强度较高，病例数达1714 例，2012和2013年处于较低发态势，分别为377和399例。手足口病发病数有明显的季节性，4月发病率逐渐增加，至6、7月达到峰值，呈单峰型。见图1。

图1 丰南区2011至2013年手足口各自然月病例分布

2.2 不同类型病例检测结果 检测的2490 例病例标本中，总肠道病毒核酸阳性2081份，阳性率83.57%，其中EV71阳性634例，阳性率25.46%，CA16阳性1026 例，阳性率41.20%，非EV71、CA16的其他肠道病毒阳性421例，阳性率16.91%。见表1。

表1 丰南区2011至2013年不同类型手足口病病例病毒核酸检测情况 份(%)

2.3 手足口病重症病例发病情况 本研究结果显示3年中丰南区共报告手足口病重病例129例，无死亡病例，高峰集中在每年7、8月份。2011年108例，总肠道病毒核酸阳性100例，阳性率 92.60%，其中EV71阳性63例，阳性率58.33%，CA16阳性20例，阳性率18.52%，非EV71、CA16的其他肠道病毒阳性17例，阳性率15.74%。2012年10例，总肠道病毒核酸阳性8例，阳性率80%，其中EV71阳性5例，阳性率50%，CA16阳性2例，阳性率20%，非 EV71、CA16的其他肠道病毒阳性1例，阳性率10%。2013年11例，总肠道病毒核酸阳性10例，阳性率90.91%，其中EV71阳性7例，阳性率63.64%，CA16阳性2例，阳性率18.18%，非EV71、CA16的其他肠道病毒阳性1例，阳性率9.09%。见表1。

2.4 不同年龄患者手足口病例分布 2490例手足口病例患者年龄最小5个月，最大14岁，5岁以下患者2195例，占构成比88.15% 。见图2。

图2 丰南区不同年龄手足口病例分布图

3 讨论

3.1 丰南区2011年的手足口发病病例明显偏高，重症病例也较多，原因可能是个别乡镇居民居住条件较差，卫生习惯较差，很多患儿在患病初期家长不够重视使病情加重，或有些乡镇医院医疗条件相对落后，不能给与有效治疗。2011年后区疾控中心针对暴发严重的乡镇重点进行手足口病的宣传，防控工作进一步加强，使得此后两年疫情明显好转，重症病例也大大减少。

3.2 手足口病由新西兰科学家首次报道，次年加拿大科学家从患者中分离出柯萨奇病毒，目前已知引起手足口病的肠道病毒有多种(型)其中以EV71和CA16最为常见，曾有报道我国1985年前手足口病的主要病原体是 EV71［2］，玉林、青岛和重庆［3－5］等地有报道称该地区引发手足口的主要病原体为EV71和CA16，EV71为优势病毒株，但我们的研究结果显示丰南区手足口的患者主要感染病原体为CA16，说明不同地区流行的手足口疫情主要病原体不尽相同，同时姜法春等［4，6］报道同一地区不同年份或季节报告的手足口病例感染的病原体优势菌株也有变化，但所有文献和研究资料均显示在我国流行的手足口疫情 EV71和CA16在病原学中占有重要的位置。

3.3 研究中发现虽然CA16检出率更高，但在重症病例中EV71的阳性率三年均在50%以上，远远高于CA16，这表明EV71的感染更易引起重症手足口病。此前有大量报道称EV71病毒感染性强，致病率高，易引起神经毒性，侵犯肺心脑［3，4，7］。我们的研究中得到同样的结论，因此对于EV71的感染更应引起高度重视。由于各种病原体所致的手足口病在临床上难以区别，利用分子生物学技术进行病原学检测，能快速准确的感染病原，有望对临床诊断和治疗提供帮助。

3.4 手足口病的流行具有明显的年龄性和季节性，本次研究显示夏季是手足口病暴发的高峰，重症病例也多发于此季节，温暖潮湿的气候更适于此类病毒的滋生与传播。感染该病的患者大多数为儿童，且5岁以下多发，占总数的88.15%。因此我们要加强夏季幼儿园和学校的疫情防护工作，避免在个别教育场所的大规模传染。同时增强幼儿和家长的自我保健意识，尤其5岁以下儿童要加强自身防护，减少疾病的发生。

1 朱汝南，钱渊，邓洁，等.北京市儿童手足口病与肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型感染有关.中华流行病学杂志，2007，28:1004-1008.

2 汪飞鹏，陈真，刘世芸，等.2010年池州地区手足口病病原学分析.预防医学情报杂志，2012，3:178-180.

3 叶瑞国，庞晓泸，蒋宁，等.2010-2011年玉林市手足口病病原学检测结果分析.预防医学论坛，2012，18:697-698.

4 姜法春，郝毕，董礼燕，等.青岛地区2007-2011年手足口病病原学分析.中华疾病控制杂志，2013，17:153-155.

5 赵华，赵春芳，陈应琼，等.重庆市2009年手足口病病原学分析.现代预防医学，2011，38:2384-2385.

6 李咏梅，张文卿，孙华.2008-2010年淄博地区70例手足口病患儿病原学分析.山东医药，2011，51:79-80.

7 罗文英，谢群，朱伟民，等.郴州市2009年46例临床诊断为手足口病的病原学分析.现代预防医学，2011，38:1130-1131.