高效液相色谱法测定香菊颗粒中黄芪甲苷含量

2014-05-04马雯霞衷红梅

中国药业 2014年15期

马雯霞，衷红梅

(1．西安医学院第二附属医院，陕西西安 710038；2．陕西省食品药品检验所，陕西西安 710065）

香菊颗粒具有辛散祛风、清热通窍的功效，临床用于治疗急慢性鼻窦炎、鼻炎等疾病，其现行质量标准收载于《国家食品药品监督管理局·国家药品标准新药转正标准》第38册。标准中测定样品有效成分黄芪甲苷含量方法为薄层扫描法，由于受点样、展开、显色、扫描等多种因素的影响，该法测定结果差异较大。笔者参考文献[1－5]，采用高效液相色谱法对香菊颗粒中黄芪甲苷的含量进行测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters－Alliance 2695－2487型(YY01520041103)高效液相色谱仪；Alltech ELSD 2000型蒸发光散射检测器。香菊颗粒及其阴性样品（陕西雪龙海姆普德药业股份有限公司，批号为100302，100303，100306）；黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为 110781－200613，供含量测定用）；水为超纯水，乙腈为色谱纯，正丁醇、氨水均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm），柱温：30 ℃；流动相：乙腈－水 (32∶68)；流速：1．0 mL ／min；气流速:2．8 mL ／min；漂移管温度：105℃；进样量：10 μL。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4 000。

2．2 溶液制备

精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0．5 mg的溶液，即得对照品溶液。取样品（批号为100302）约10 g研细，精密称定，加甲醇50 mL，加热回流1 h，滤过，用甲醇15 mL分3次洗涤滤渣及容器，合并滤液和洗涤液，水浴蒸干，残渣加水20 mL，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20 mL，弃去氯仿液，水液用水饱和的正丁醇提取4次，每次15 mL，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，每次15 mL，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15 mL，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取阴性样品10 g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验：按拟订色谱条件，取2．2项下3种溶液，依法进样测定。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相同保留时间处有一致的色谱峰，阴性对照品溶液色谱则无此吸收峰，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：取质量浓度为436 μg／mL的黄芪甲苷对照品溶液，按拟订色谱条件分别进样 1，2，5，10，15，20，25，30 μL，记录色谱图，计算峰面积，以峰面积的对数值与进样量的对数值进行回归，得回归方程 Y＝1．379 X ＋5．961，r＝0．999（n＝8）。表明，黄芪甲苷进样量在 0．436～13．080 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定峰面积积分值。结果平均峰面积为16 147 022，RSD为0．32% （n＝6），表明方法精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，于制备后20 h内进样6次，记录峰面积积分值。结果平均峰面积为2 068 456，RSD为1．06%（n＝6），表明供试品溶液在20 h内基本稳定。

重复性试验：取同一样品(批号为100302）平行制备6份供试品溶液，按拟订方法测定黄芪甲苷的含量，结果平均含量为0．193 1 mg／g，RSD 为 1．90%（n ＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的香菊颗粒（批号为100302，每1 g含黄芪甲苷0．193 1 mg）样品适量，研细，取约10 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密吸取黄芪甲苷对照品溶液2 mL(质量浓度为0．586 4 μg ／mL)，加入样品，按供试品溶液制备方法制备待测溶液，依法进行含量测定，计算回收率。结果见表1。