坎地沙坦酯氨氯地平片中降解产物的研究

靳茂礼 ，姚振江 ，申 磊 ，董珊红

（1.河北省石家庄市食品药品检验所，河北 石家庄 050031；2.石药集团中诺药业＜石家庄＞有限公司，河北 石家庄 050091）

坎地沙坦酯氨氯地平片是由坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平组成的复方制剂，为血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂和钙离子拮抗剂的组合，虽然2个主要成分作用机制不同，但临床疗效确切、降压平稳，临床耐受性和安全性良好。本试验中采用坎地沙坦酯片国家药品标准中有关物质的检测方法[1]测定了坎地沙坦酯氨氯地平片的降解产物，采用液相色谱－质谱/质谱（LC－MS/MS）分析3种分析方法，测定降解产物峰面积与坎地沙坦酯峰面积的比值、降解产物的保留时间，确定了坎地沙坦酯氨氯地平片降解产物的来源。现报道如下。

1 仪器与试药

戴安U3000型高效液相色谱仪；LC－MS联用系统；梅特勒AE－240型分析天平。坎地沙坦酯氨氯地平片（日本武田药品工业株式会社，批号为0007，规格为每片8mg∶5mg）；乙腈为色谱纯，磷酸、醋酸等为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

对坎地沙坦酯氨氯地平片配制的供试品溶液进行热破坏，使其产生降解产物。取坎地沙坦酯氨氯地平片10片，研细，精密称取细粉 1.625 g，加乙腈－水（3 ∶2）50 mL，超声使溶解，溶液 98 ℃水浴2 h，放冷至室温，过滤，量取续滤液适量，稀释成每1 mL中含坎地沙坦酯0.4mg的溶液，作为供试品溶液。

2.2 检测方法与条件

2.2.1 坎地沙坦酯氨氯地平片有关物质研究方法

色谱柱：菲罗门 C18柱 （250mm ×4.6mm，5μm）；流动相：A 为磷酸盐缓冲液（取8mmol/L磷酸二氢钾溶液，用8mmol/L磷酸氢二钾溶液调节pH至6.0），B为乙腈，按表1进行线性梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：254 nm；进样量：20 μL。

表1 流动相梯度洗脱表

2.2.2 坎地沙坦酯片国家药品标准方法

色谱柱：菲罗门 C18柱（250mm ×4.6mm，5 μm）；流动相：A为乙腈－水－醋酸（57∶43∶1），B 为乙腈－水－醋酸（90∶10∶1），在30 min内使流动相A的比例由100%到0，流动相B的比例由0到 100%，分析时间约为坎地沙坦酯峰保留时间的 2.5倍；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：254 nm；进样量：20 μL。2.2.3 LC－MS/MS质谱条件

质谱条件：离子源为电喷雾离子化（ESI）源；喷雾电压IS为5 500 V；雾化温度为 650 ℃ ；雾化气 NEB（GAS 1）为 60 L/min；帘气 CUR 为 25 L/min；辅助气 AUX（GAS 2）为 60 L/min；检测方式为正、负离子全扫描（Q1），解簇电压分别为 50 V；扫描范围为100～1 500 amu，图谱显示相对分子质量范围为100～1 100 amu；对主要色谱峰主要生成碎片进行二级质谱全扫描。

色谱条件：液相色谱柱为菲罗门C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流动相体系1为流动相A甲酸－三乙胺缓冲液、流动相B、乙腈；体系 2为流动相 A 乙腈－水－甲酸（V∶V∶V，57∶43∶0.1）、流动相 B 乙腈－水－甲酸（V∶V∶V，90∶10∶0.1）；柱温为 35℃。

2.3 降解产物定性

2.3.1 利用相同波长下降解产物与坎地沙坦酯峰面积之比

将 2.1 项下供试品溶液按 2.2.1 和 2.2.2 项下方法分别测定。色谱图见图1。各个降解产物峰面积与坎地沙坦酯峰面积比值见表2。暂将在2.2.1项下条件测得的杂质峰与坎地沙坦酯峰保留时间比值约为 0.85，1.1，1.2，1.3，1.5 的杂质分别定为杂质 1、杂质2、杂质 3、杂质 4、杂质5。在同一波长下，降解产物与坎地沙坦酯的吸收系数之比固定不变，上述2种色谱系统检测波长均为254 nm，故同一供试品溶液中降解产物峰面积与坎地沙坦酯峰面积的比值在上述2种色谱条件下应相同。

2.3.2 利用杂质保留时间

将在2.2.1项下色谱条件分离出的杂质接出，得到杂质1、杂质 2、杂质 3、杂质 4、杂质 5接出液。按照 2.2.2项下色谱条件，分别进样杂质接出液和供试品溶液。色谱图见图2和图3，测得其保留时间见表 3。结果表明，杂质 1、杂质 2、杂质 3、杂质4、杂质5分别对应坎地沙坦酯有关物质Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ。

图1 不同色谱条件下供试品溶液的高效液相色谱图

表2 降解产物与坎地沙坦酯峰的峰面积比值

表3 杂质的保留时间

图2 坎地沙坦酯氨氯地平片有关物质高效液相色谱图

图3 供试品溶液有关物质高效液相色谱图

2.3.3 LC－MS/MS分析

将供试品溶液按照2.2.3项下质谱条件检测，进行正离子的Q1全扫描。结果见图4和图5。在不同流动相体系下，12.19 min及36.48 min色谱峰可确定为坎地沙坦酯色谱峰，其余杂质峰相对分子质量信息与其类似者暂无法确定其归属情况。在不同流动相体系下，6.90 min及31.29 min色谱峰可确定为同一物质来源化合物产生的质谱信息，也就是说2个色谱峰可判断为同一杂质成分产生。

图4 正离子全扫描总离子流质谱图

图5 色谱峰的正离子全扫描质谱图

3 讨论

坎地沙坦酯氨氯地平片破坏性试验中，其中以热破坏试验产生降解产物最多，故以热破坏作为得到坎地沙坦酯氨氯地平片降解产物的方法。

采取了3种方法确定坎地沙坦酯氨氯地平片的降解产物，证实坎地沙坦酯氨氯地平片降解产物与坎地沙坦酯中有关物质存在对应关系，确定了坎地沙坦酯氨氯地平片降解产物的来源。

参考文献：

[1] JX 20000248，国家标准·坎地沙坦酯片[S].