不同采收期蒙药库页悬钩子中总皂苷的含量测定

王宝珍 ，解红霞，乌日宁，孙冉冉

（1.内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特 010110； 2.内蒙古医科大学附属医院药剂部，内蒙古 呼和浩特 010059）

库页悬钩子为蔷薇科库页悬钩子 Rubus sachalinensis Leveille的干燥茎，又名悬钩子木，蒙药名甘达嘎日[1]。从悬钩子属药用植物中分离得到多种化学成分，主要包括黄酮类、萜类、生物碱类、甾体类、醌类(少量)、有机酸类及鞣质类[2－4]。萜类化合物是悬钩子属药用植物的主要化合物类型。目前己对30余种同属植物的化学成分进行了研究，报道了60余种三萜（苷）化合物，其母核主要为乌苏烷型和齐墩果烷型，少数为羽扇豆烷型[5]。蒙药治感冒、咳嗽、头痛药方中大多以库页悬钩子为主药或配伍有库页悬钩子，为蒙医常用药[6－7]。吴香杰等[8]报道了库页悬钩子的总黄酮含量测定方法，但有关库页悬钩子总皂苷的含量测定未见报道。笔者建立了该药材总皂苷的含量测定方法，并比较了不同采收期总皂苷的含量差异，确定了最佳采收期。

1 仪器与试药

ESJ200－4型电子分析天平（沈阳龙腾电子有限公司）；HHS4型电热恒温水浴锅（北京科伟永兴仪器有限公司）；TU－1901型双光束紫外可见分光光度计（北京普析仪器有限责任公司）；IKA－RV10型旋转蒸发仪（德国）。库页悬钩子采集于内蒙古呼和浩特市小井沟，由内蒙古医科大学药用植物教研室乔俊缠教授鉴定；齐墩果酸对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号为20120228）；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

精密称取齐墩果酸对照品2.74mg，加无水甲醇溶解为每1.0 mL含齐墩果酸0.548mg的溶液，摇匀即得对照品溶液。精密称取药材 0.5 g，置圆底烧瓶，用70%乙醇30 mL回流提取3次，每次2 h，合并滤液浓缩旋蒸，转移至分液漏斗，用石油醚等体积萃取3次，将下层浓缩至25 mL，精密吸取10 mL，用水饱和正丁醇萃取3次，每次10 mL，静置，弃去水层，合并正丁醇，将正丁醇溶液减压蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶，即得供试品溶液[9]。

2.2 测定波长选择

悬钩子属的三萜类化合物其母核主要为乌苏烷型和齐墩果烷型，据其特点，选择齐墩果酸为对照品，用5%香草醛－冰乙酸和高氯酸染色，采用分光光度法进行比色测定。在200～800 nm波长范围进行光谱扫描，光谱图见图1。对照品和样品在547 nm波长处均有明显吸收，故选547 nm为测定波长。

图1 紫外吸收光谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.02，0.06，0.2，0.4，0.6，0.8 mL 置具塞试管中，水浴挥干溶剂，依次加入0.2 mL 5%香草醛－冰醋酸溶液、0.8 mL高氯酸，摇匀，于60℃水浴加热15 min，取出迅速冷却，终止反应。加入5 mL乙酸乙酯，摇匀，于547 nm波长处测定吸光度。以吸光度(Y)对齐墩果酸对照品取样量(X)进行回归分析，得回归方程 Y＝6.77 X－0.022 1，（R2＝0.999 2），齐墩果酸进样量在 0.010 96 ～0.438 40 g/L 范围内与吸光度线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液0.1 mL，按拟订方法在547 nm波长重复进样6次，分别测定吸光度值。结果的 RSD为0.22%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密量取同一供试品溶液0.5 mL，按拟订方法分别配置溶液后于 0，15，30，45，60，75 min 时进样，测定吸光度值，结果的 RSD为0.31%，表明样品溶液在75 min内稳定，符合含量测定要求。

重复性试验：取样品 6份，每份约 0.5 g，精密称定，按 2.1项下方法制备样品溶液，按拟定方法测定吸光度值，计算含量。结果的 RSD为1.28%，表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的供试品粉末约0.25 g，精密称定 6 份，加入质量浓度为 1.01 g/L 的标准品 1.75 mL，按 2.1 项下方法制备样品溶液，精密吸取0.5 mL，按拟订方法测定吸光度值，计算回收率，结果见表1。

表1 总皂苷加样回收试验结果（n＝5）

2.4 样品含量测定

对5批不同采收期样品，按2.1项下方法制备样品溶液，按拟订方法测定吸光度，计算含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）

本试验通过加热回流提取法对5批库页悬钩子进行了总皂苷含量测定，其总皂苷含量均较高，其中9月的样品含量最高，可初步认为9月为蒙药库页悬钩子的最佳采收时期。

3 讨论

对空白试剂作为参比溶液，以及加显色剂的空白溶剂作为参比溶液分别进行了考察，并与供试品溶液的测定结果进行了比较。结果表明，加显色剂的空白溶剂作参比溶液的色谱图较好，故选用加显色剂的空白溶剂作为参比溶液。参考文献[10]选用70%乙醇为提取溶剂，分别对热回流、冷浸、超声提取3种方法进行了对比。结果表明，热回流提取方法提取较为完全，总皂苷含量较高，故选用热回流方法提取供试品溶液。在萃取过程中，进行了2种萃取方法的考察，即采用正丁醇萃取和水饱和正丁醇萃取。考察结果表明，采用水饱和正丁醇萃取效果较好，故最终确定该方法。

通过考察不同采收期库页悬钩子中总皂苷的含量，发现不同采收期含量差异较大，最佳采收季节为9月。

参考文献：

[1] 占布拉·道尔吉.蒙药正典[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社，2006：184.

[2] 徐丹丹，周洪波，房志坚.粗叶悬钩子的化学成分研究[J].广东药学院学报，2012，28(2):1－3.

[3] 梁成钦，苏小建，周先丽，等.茅莓化学成分研究[J].中药材，2011，34(1):64－66.

[4] 邬美玉.山莓化学成分研究[J].药学实践杂志，2011，29(4):287－290.

[5] 孟祥娟，刘 斌，热增才旦，等.悬钩子属植物化学成分及药理活性研究进展[J].天然产物研究与开发，2011，23(4):767－775.

[6] 白淑珍，金红光，包明兰.蒙成药额日敦－7汤研究进展[J].中国民族医药杂志，2008（1)69－71.

[7] 李敬朋，赵玉英，青 松，等.蒙成药查干－汤黄酮的提取和含量测定[J].内蒙古民族大学学报，2010，25(3):270－271.

[8] 吴香杰，白明刚，陈常莲.蒙药材“杆达嘎日”的质量研究[J].辽宁中医杂志，2007，34(9):9.

[9] 任凌燕，李惠芝，王继生，等.茅莓总皂昔的含量测定[J].重庆医科大学学报，2005，30(6):854－856.

[10] 王继生，邱宗荫，夏永鹏，等.茅莓总皂苷提取分离工艺考察[J].中国医院药学杂志，2011，31(13):1 138－1 139.