HPLC法同时测定抗痨胶囊中岩白菜素的含量

2014-04-29薛雅光薛雅峰

中外食品工业 2014年3期

薛雅光　薛雅峰

摘要：目的：采用反相高效液相色谱法同时测定抗痨胶囊中岩白菜素的含量。方法：采用AgiLentC18（4.6×250mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-水（9：91），流速为0.8 mL·min-1，检测波长275nm，柱温为30℃。结果：岩白菜素进样量在0.1035～0.9315mg 范围内，线性关系良好；平均回收率（n=6）分别为100.3% ，RSD分别为1.0%。结论：本法简便、准确，重复性好，可为抗痨胶囊的质量控制提供实验依据。

关键词：抗痨胶囊岩白菜素高效液相色谱法

中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）06-0025-03

Abstract：Objective： To develop an RP-HPLC method for the determination of bergenin in KangLao capsuLe. Methods ： The separation was performed on a Agilent C18 coLumn （4.6mm×250 mm，5μm） with a mobiLe phase of methylcyanide-water （9∶91） . The fLow rate was 0.8 mL·min-1， and the detecting wavelength was 275nm；coLumn temperature of 30℃.ResuLts ： The Linear ranges of bergenin was 0.1035 to 0.9315mg；the average recovery of was 100.3 % （RSD= 1. 0%）.ConcLusion ：The method is simpLe and accurate with good reproducibiLity . It can be used to controL the quaLity of KangLao capsuLe .

Key Words： KangLao capsule bergenin，HPLC

矮地茶为紫金牛科植物紫金牛Ardisia japonica（Thunb.）BLume的干燥全草。全株含挥发油0.1%～0.2%，去油后的残渣中分离得岩白菜素、紫金牛酚、紫金牛素等。具有清热解毒，止咳化痰。用于小儿哮喘，肺结核，肝炎。所含主要成分岩白菜素具有止咳，镇痰祛痰[1]等药理活性。有关岩白菜素含量的测定方法，2005年版《中国药典》（一部）收载了矮地茶药材中的含量测定方法[2]。经过系统的研究，笔者建立了适用于抗痨胶囊测定矮地茶中的岩白菜素含量测定的反相高效液相法[3-5]，控制本制剂的内在质量，具有合理性，且方法易于操作，结果准确，重现性良好。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试药

岩白菜素对照品（由中国药品生物制品检验所提供）批号：111532-2000202，规格：供含量测定用。甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水。

1.1.2 主要仪器

日本岛津LC-2010C高效相色谱仪。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：AgiLentC18（4.6×250 mm，5μm），流动相：乙腈-水（9：91），检测波长：275 nm，柱温：30℃，进样量10μL。

1.2.2 测定波长的选择

取岩白菜素对照品的甲醇溶液，经UV-2201紫外-可见分光光度计在200nm～350nm范围内扫描，岩白菜素在275nm波长处，有最大吸收（见图1），参考中国药典2005年版一部中矮地菜药材含量测定项下的有关规定，选择275nm为本实验的测定波长。

1.2.3 对照品溶液制备

对照品溶液的制备精密量取岩白菜素对照品适量，用甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。

1.2.4 供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品，研细，取细粉0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率200W频率40kHz）60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，即得。

1.2.5 阴性样品溶液的制备

按处方（不含矮地茶药材）比例及生产工艺配制阴性，同1.2.4项下方法操作，制得阴性样品溶液。

精密吸取岩白菜素对照品溶液，供试品溶液，阴性样品10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果阴性对照色谱在与岩白菜素峰相应的保留时间附近无干扰峰，（见图2）。

1.2.6 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液（0.1035 mg·mL-1）1、2、3、4、5、6、7、8、9μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标，峰面積值为纵坐标，绘制标准曲线，岩白菜素的回归方程为Y=1755025.15X+9836.84，r=1.0000。结果表明：岩白菜素进样量在0.1035～0.9315mg，与峰面积具有良好的线性关系。

1.2.7 精密度试验

取同一供试品溶液（批号：060407），重复进样6次，测定峰面积。结果岩白菜素峰面积的RSD（n=6）分别为0.4%，表明精密度良好，理论板数不低于1500。

1.2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液（批号：060407），分别在0、4、16、28、46、96h测定，岩白菜素峰面积的 RSD（n=6）分别为1.5%。说明供试品溶液在96h内基本稳定。

1.2.9 重复性试验

精密称取同一批号（批号：060407）的样品共6份，按前述制备供试品方法制备，依法测定。结果岩白菜素含量平均值（n=6）分别为2.542mg/粒，RSD为1.7%，表明该方法重复性良好。

1.2.10 回收率试验

精密称取已测知含量（批号：060407，含量为2.542 mg/粒）的样品约0.25g，置具塞锥形瓶中，每份精密加入岩白菜素对照品溶液（53.45μg·mL-1）25mL，再精密加入甲醇25mL，超声处理（功率200W频率40kHz）60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，即得。共处理 6份，依正文方法独立测定六次，计算回收率，结果见表1。

如表1所示，测得岩白菜素的平均回收率为100.3%，RSD=1.0%。结果表明本法回收率较好，准确度较高。

2 结果

测定分别对不同批次的抗痨胶囊中岩白菜素的含量进行测定，测定结果见表2。

3 討论

3.1 检测波长的选择

对岩白菜素进行光谱扫描，根据扫描结果，并参考2005年版中国药典中矮地茶测定项下的检测波长，故选择275nm为测定波长。

3.2 供试品制备方法的选择

分别采用样品0.5g，精密加入甲醇50mL，分别超声50、60、70min，制备供试品溶液依据实验结果，超声60 min测定结果较高且时间较短，故选择超声60min提取样品。

3.3 流动相的选择

曾经试验流动相为甲醇-水（20：80），此流动相的分离效果没有乙腈-水（9：91）流动相分离效果好，故选择乙腈-水（9：91）为流动相。

参考文献

[1] 王刚，麻兵继.岩白菜素的研究概况[J].安徽中医学院学报，2002，21（6）：59.