食品中大肠菌群平板计数结果不确定度的评定探讨

王婷

摘要：本文主要是对大肠菌群平板计数结果的影响因素进行简单分析，这对于大肠菌群平板计数结果不确定度的评定具有积极的作用。

关键词：大肠菌群 平板计数结果 不确定度的评定 探讨

中图分类号：TS207.4 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）06-0093-02

在食品卫生状况的评定过程中，大肠菌群的评定是一个非常重要的评定指标，在日常的检验工作中，保证大肠菌群检验结果的可信度是非常必要的，在实际的测量应用中，对于测量不确定度的评定主要目的是为了对相关的测量结果的可疑程度进行一种定理性的表述，随着各项技术的发展，平板计数结果不确定度评定方法逐渐在大肠菌群中具有广泛的应用，本文就主要对其检验方法及各种不确定度分量的评定进行简单分析。

1 平板计数结果不确定度的检验方法

本次研究中，对平板计数结果不确定度评定的检验方法，主要是采用食品微生物学检验大肠菌群计数标准中的第二法平板计数法来进行检验，首先对其检验流程进行简单分析，主要表现为：选取25克左右的样品，将其应用225毫升的磷酸盐缓冲溶液进行稀释，然后进行结晶紫中性红胆盐琼脂平板的制作，以上步骤完成之后，将其温度控制在36摄氏度左右，将其培养18到24小时，并在其中挑选可疑菌落及具有明显代表性的菌落，将其放置于煌绿乳糖胆盐肉汤管中，将温度控制在36摄氏度左右，对其培养24小时到48小时，对计数产气情况进行观察，最后要报告大肠菌群检验的技术结果。

2 平板计数结果中各个不确定度分量的评定

在整个平板检验的过程中，其不确定度分量是比较多的，在其取样阶段，稀释体积、温度、称样量、检测环境等都会对计数结果产生影响，在其培养的过程中，培养基质量、培养温度、培养时间等的不同，直接会导致计数结果的不同，在样本的保存过程中，温度与时间的不同，都会对计数结果产生影响，并且在计数结果判定的过程中，人员计数、肉汤管产气比例、修约等都会对计数结果造成直接的影响。下面对其各种不确定分量进行简单分析。

首先在样品的称量过程中，具有较多的不确定分量，取样的过程中是将样品进行充分的混匀之后进行随机的取样，在计数的过程中，认为样品是具有充分的代表性的、均匀的样品，在相关的标准中，对于均质袋的拍击时间与拍击标准予以了明确的规定，在实际的操作过程中，应该严格的按照相关的标准来执行，所以可以将此处的不确定度予以忽略，在样品的质量称量过程中，其精确度应该精确到0.1克，25克的样品质量是通过电子天平来称量，225毫升的缓冲液是通过容量为500毫升的量筒来量取，根据相关的标准，普通玻璃量器的容量允许误差值为5毫升，在实际的应用中，由测量仪器、数字式仪表所导致的不确定属于矩形分布，那么在实际的不确定计算过程中，可以对玻璃容器与天平的标准不确定度进行计算，计算得到，玻璃容器的标准不确定度的值为2.8868毫升，天平的标准不确定度容量的值为0.0577克，将225毫升与25克实际称量数据代入，计算得到玻璃容器的实际不确定度值为0.0128，天平的实际不确定度值为0.0023，那么该步骤中总的不确定度值为：0.013。

对样品进行10稀释的过程中，也会引入较多的不确定度，需要对样品进行10倍的梯度稀释，在此过程中，需要应用分度吸管进行10毫升溶液的量取，以及移液器进行1毫升样品的量取，根据相关的标准，移液器在进行1毫升溶液的量取时期容量的允许误差值为±1%，用分度吸管进行10毫升的容量量取时，其容量允许误差值为：±0.05毫升，假定其不确定度的分布是矩形分布，能够对其标准不确定度的值进行计算，计算得到：分度吸管的标准不确定度的值为0.0289毫升，移液管的标准不确定度的值为0.00577毫升。将其实际的量取值代入，计算得到：分度吸管的实际不确定度值为0.00289，移液器的实际不确定度值为：0.00577，该步骤中的总的不确定度的值為0.005808，由于本次检验中，是在20摄氏度的标准温度中开展的，因此，在不确定度的计算过程中，可以将温度对不确定度的影响忽略，如果检验工作不是在标准温度中开展，则需要考虑温度因素对于容器体积产生的影响。

在对平板菌落数的相对标准不确定度进行计算时，通常采用的计算方法是依据普松分布理论来进行计算，具体方法为：在某个稀释度的平行检测工作中，如果其六个计数平板上的菌落数的均值表示为Z，那么由普松分布所引起的相对标准不确定度的值为，本次研究中，其菌落的平均值为119CFU，那么计算得到其相对标准的不确定度的值为0.09165。

在肉汤管产气试验中，可疑菌落与典型菌落的挑选中会产生较大的不确定性，这主要是因为，所挑选的菌落不同，会产生不同的不确定度，本次试验中，是从两个平板上分别的挑选菌落加入到肉汤管中，计算得到其相对标准不确定度的值为：0.04188。

3 讨论

在实际的大肠菌群平板计数的过程中，对其计数结果具有较大影响的因素有很多，除了上文中计算的各种不确定分量之外，数值修约、人员计数、培养时间、培养条件、培养基质量、检测环境、保存条件等都会对计数结果的不确定度产生影响，由于在本次试验中，检验工作是由同一人员在同一检测环境中进行，并且整个检验过程是严格按照相应的检验标准来进行，所以在其不确定度分析的过程中，将人为因素及环境因素对不确定度的影响进行了忽略。计算结果表明，对平板计数结果不确定度影响最大的因素是：煌绿乳糖胆盐肉汤管产气比例及样品平板大肠菌群数量所产生的不确定度，在实际的试验过程中，应该根据其不确定分量的分布特点，制定出合理的试验方案，在整个试验的过程中，尽可能的进行规范化的操作，尽量的减少一些关键步骤中的不确定度分量的值，使计算结果的准确性得到有效提升。

参考文献

[1]凌云，王李宝，沈辉，万夕和.食品中大肠菌群平板计数结果不确定度的评定[J].食品与机械，2010（9）.

[2]甄珍.食品中大肠菌群测定结果不确定度的评定[J].高师理科学刊，2011（9）.