非小细胞肺癌组织中Axin、β连环蛋白和p53的表达及意义

侯兴华 李春杨 金素芬

【摘 要】目的：探讨Axin（axis inhibition protein）β-连环素（β-catenin）和p53在非小细胞肺癌组织中的表达情况，及它们相互联系和意义。方法：采用免疫组织化学方法（S-P法）对50例肺癌组织Axin、β-catenin和p53蛋白的表达进行检测，同时以癌旁正常肺组织作为对照。结果：在肺癌组织中，Axin阳性表达率为58%（29/50），其中有两例细胞核表达。肺癌组织Axin表达显著低于癌旁正常肺组织（P<0.001）。Axin的表达，在高分化肺癌的阳性率（82.4%，14/17）和中分化肺癌的阳性率（ 48.1%， 13/27） 明 显 高 于 低 分 化肺癌 的 阳 性 率（33.3%，2/6）（P =0.028）。Ⅰ-Ⅱ期阳性率（69.7%，23/33）高于III-IV期阳性率（35.3%，6/17）（P=0.020）。无淋巴结转移的阳性率（21/30，70%）明顯高于有淋巴结转移的阳性率（40%，8/20）（P=0.035）。β-catenin细胞膜表达减少，出现细胞质表达为54%（27/50），均不表达为20%（10/50）。p53异常表达率为80%（40/50）。Axin表达与β-catenin细胞质表达及p53异常表达负相关（P<0.001）。50例肺癌组织患者Axin表达阳性组平均生存时间显著高于Axin表达阴性组平均生存时间（P<0.05）。结论：在肺癌组织Axin表达显著降低，Axin 的表达与肿瘤细胞的分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况密切相关， Axin阳性表达者预后明显好于阴性者。

【关键词】肺肿瘤；Axin；β-catenin；p53；免疫组织化学

【中图分类号】R734.2 【文章编号】1004-7484（2014）04-1937-01

肺癌是我国发病率最高的恶性肿瘤，本研究通过检测肺癌组织中Axin，β-catenin，p53的蛋白表达情况，旨在探讨Axin表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系。

1 材料和方法

1.1 研究对象 收集2006年1月-2013年5月胸外科手术标本肺癌及癌旁正常组织各50例，其中男33例，女17例，年龄41-76岁，平均年龄60岁。根据第7版AJCC癌症分期手册，I期28例，II期5例，III期16例，IV期1例。腺癌31例，鳞癌19例。高分化17例，中分化27例，低分化6例。有淋巴结转移20例，无淋巴结转移30例。术前均未接受过放、化疗。随访期间为手术日期开始到由于复发、转移而死亡或随访截止日期为止。

1.2 试剂及实验方法 兔抗人Axin多克隆抗体（SC-14029）购自Santa Cruz生物技术公司，鼠抗人β-catenin单克隆抗体（C19220-050）购自B.D.公司。即用型鼠抗人p53单克隆抗体（Kit-0010-2）及SP超敏免疫组化试剂盒（KIT-9710）和DAB酶底物显色试剂盒（DAB-0031）购自福州迈新生物技术公司。肺癌及癌旁正常组织石蜡包埋并连续切片，厚度3-4μm，脱蜡，水化，按S-P法常规步骤进行。一抗分别为Axin（1：50）和β-catenin（1：200）。以磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer Saline，PBS）代替一抗作为阴性对照，已知阳性片为阳性对照。

1.3 结果判定标准 每张切片在光镜下随机选取5个高倍视野，计数100个细胞的阳性细胞数。Axin正常阳性表达定位于细胞浆，参考Xu等[1]Axin阳性细胞率<40%为阴性，≥40%为阳性。β-catenin正常阳性表达定位于细胞膜，膜阳性瘤细胞数≥90%为细胞膜阳性表达，细胞质阳性瘤细胞数>10%为细胞质阳性表达。P53正常阳性定位于细胞核，p53阳性率<5%为阴性，≥5%为阳性。

1.4 统计学分析 应用SPSS for windows 19.0软件进行数据分析。采用Pearson卡方检验和似然比法比较肺癌组织中Axin、β-catenin、p53表达的差异和相互关系以及Axin表达与临床病理特征之间关系。用Kaplan-Meier法（Log-Rank检验）进行生存分析。P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 Axin在正常肺组织、非小细胞肺癌组织的表达 在正常肺组织中Axin有较高水平的表达（100%，50/50）。而在肺癌组织中其表达下降，阳性率为58%（29/50）。其中细胞核表达率为4%（2/50）。

2.1 Axin 的表达与临床病理特征的关系 肿瘤细胞的分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况密切相关。高分化的阳性率（82.4%，14/17）和中分化的阳性率（ 48.1%， 13/27） 明 显 高 于 低 分 化 的 阳 性 率（33.3%，2/6）（P =0.028）。Ⅰ-Ⅱ期阳性率（69.7%，23/33）高于III-IV期阳性率（35.3%，6/17）（P=0.020）。无淋巴结转移的阳性率（21/30，70%）明显高于有淋巴结转移的阳性率（40%，8/20）（P=0.035）。Axin的表达与患者年龄，性别，肺癌组织学分型无关。

2.3 非小细胞肺癌组织中β-cateninp和53蛋白的表达 肺癌组织中β-catenin细胞膜表达减少，出现细胞质表达（54%，27/50），均不表达（20%，10/50）。p53蛋白过表达，（80%，40/50）。Axin表达与β-catenin细胞质表达和p53表达负相关（P<0.05）。

2.4 Axin 的表达与非小细胞肺癌患者生存时间的分析50例肺癌组织患者生存时间为2～72个月，平均生存时间为34.278±4.303个月，中位生存时间为30.000±3.405个月。Axin表达阴性组平均生存时间为16.741±3.818个月，中位生存时间为14.000±3.615个月；Axin表达阳性组平均生存时间为36.992±4.716个月，中位生存时间为30.000±6.064个月。统计分析表明，在肺癌组织中， Axin阳性表达者预后明显好于阴性者（P=0.031）。

3 讨论

Wnt信号转导通路可调控包括肺组织在内的细胞的生长、迁移和分化，许多文献也报道了非小细胞肺癌发生中存在着Wnt信号通路异常激活[2]。因此，本研究检测了Wnt信号通路重要分子β-catenin，Axin及突变型p53 在非小细胞肺癌中的表达情况，通过其表达与临床病理特征的比较，探讨Axin表达与肺癌发生发展的关系。细胞正常生长时，细胞质内酪蛋白激酶CKIa和糖原合成激酶GSK-3β以三明治的模式将β-catenin夹在中间， 三者结合在Axin上。细胞内的β-catenin总保持较低的水平。Axin作为构架蛋白，能与肿瘤抑制因子肠腺息肉瘤蛋白（adenomatous polyposis coli，APC）和糖原合成激酶GSK-3β形成APC多蛋白复合体，介导β-catenin磷酸化，促进β-catenin 的降解。磷酸化的Axin结合β-catenin的能力更强，Axin还可作为一种分子伴侶协同β-catenin从细胞核转移至细胞质，促进β-catenin在细胞质中的降解。而当Wnt 信号被异常激活时，GSK-3β不能正常磷酸化β-catenin， 导致β-catenin不能被泛素识别，从而不能被蛋白酶复合体降解。细胞质中没有被降解而过量积累的β-catenin会转移到细胞核内，与核内转录因子LEF/TCF家族成员结合，刺激一系列癌基因的过量表达，引起细胞异常增殖，最终致使细胞发生癌变。Axin作为Wnt信号通路中最重要的负性调节因子，多种肿瘤中可检测到其表达减少[3]。

本研究结果发现Axin阳性表达与β-catenin细胞质表达负相关，与β-catenin在细胞膜表达正相关，符合上述调控机制。在肺癌组织中，Axin的表达与非小细胞肺癌的分化、分期及淋巴结转移情况明显相关，而与肺癌组织学分型无关，这与其他学者研究结果基本一致。徐洪涛等[6]发现Axin与β-catenin在少数非小细胞肺癌的细胞核中表达，在本研究，两例肺鳞癌中出现Axin细胞核表达。可能与观测病例数较少有关。这有待今后大样本分析及深入研究来证实。

本研究发现Axin表达与p53的表达呈负相关。有研究表明Axin可与p53相互结合并通过同源结构域相互作用蛋白激酶2（Homeodomain-interacting Protein Kinase-2，HIPK2）激活野生型p53实现其肿瘤抑制因子作用 。Axin还能与p53一起下调β-catenin。Wnt信号通路中过量积累的β-catenin激活p53， 活化的p53能诱导构架蛋白Axin转移到胞浆降解β连环蛋白复合体， 导致β-catenin降解，说明Axin与野生型p53协同发挥肿瘤抑制因子的作用。

Axin表达与肺癌患者预后有关，阳性表达患者预后好。因而Axin表达对预后判断有参考意义。

参考文献

[1] Xu HT， Wei Q，Liu Y， et a1. Overexpression of axin downregulates TCF-4 and inhibits the development of lung cancer [J]. Ann Surg Oncol， 2007， 14（11）：3251-3259.

[2] Clevers H. Wnt/beta-catenin signaling in development and disease [J]. Cell， 2006， 127： 469-480.

[4] 曹红一，刘树立，李明珠，等. Axin、p53在非小细胞肺癌中的表达及意义. 解剖科学进展，2012，18（2）：159-162.