阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者外周血单核细胞PPARγ的调节作用

崔颖，牛楠，任卫国，张俊威，徐丹

近年来研究过氧化物酶体增殖体激活受体γ（PPARγ）配体或激活剂可减少炎症因子白介素-1β，白介素-6，肿瘤坏死因子-α，诱导性一氧化氮合酶、基质金属蛋白酶-9的表达，抑制单核细胞/巨噬细胞转录因子AP-1，核转录因子-κB和转录活化因子的活性，激活的PPARγ可调节动脉粥样硬化中的炎性反应，防止动脉粥样硬化的形成[1]。阿托伐他汀是调脂药物，现已广泛应用于冠心病的二级预防中，实验证明它能降低心血管事件的发生率；除了调脂的作用，阿托伐他汀还具抗炎作用和稳定斑块的作用，而它的抗炎作用可能和激活PPARγ表达有直接的关系[2]。本研究采用不同剂量的阿托伐他汀对急性冠状动脉综合征（ACS）患者进行干预治疗，并检测其对外周血单核细胞PPARγ蛋白表达影响，旨在探索他汀类药物对炎症反应抑制的可能机制，为寻求治疗急性脉综合征患者的新靶点提供依据。

1 资料和方法

1.1 研究对象 入选2011年7月至2012年12月在大连医科大学附属第二医院心内科住院急性冠脉综合征患者124例（ACS组），其中男性68例，女性56例，年龄36～89（66.62±10.79）岁。ACS诊断标准按美国心脏病学会（ACC）、美国心脏协会（AHA）制定的诊断标准[3,4]，所有患者均有阵发性或持续性心前区疼痛，并经冠状动脉造影或心电图、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶-同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白（TnT）等心肌损伤标志物检查确诊。通过问诊排除入院前4周内使用降脂药物、维生素E等药物治疗、各种急慢性炎症、结缔组织病、肿瘤、风湿性心脏病、肝肾疾病患者。同期住院体检人群35例作为正常对照组，其中男性20例，女性15例，年龄43～80（61.03±11.32）岁。入选受试者常规体检及检测血脂等生化指标。入选者均同意配合本实验，并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 分组 ACS组患者在抗栓、扩冠等常规治疗基础上给予阿托伐他汀干预治疗，随机分为阿托伐他汀小剂量组（10 mg/d）、大剂量组（40 mg/d），每组62例患者。阿托伐他汀（商品名立普妥，由美国辉瑞公司生产，批号：004405K1）每晚睡前服用。小剂量组患者中，男性29例，女性33例，年龄36～89（66.02±9.25）岁。大剂量组患者中男性30例，女性32例，年龄49～81（65.12±10.14）岁。两组患者年龄与性别构成无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。

1.2.2 PPARγ蛋白的表达及hsCRP检测方法 使用流式细胞仪及间接免疫荧光技术分析法检测。在患者入院第2日及阿托伐他汀干预1周时，分别采空腹肘静脉血，取全血80 μl放入2支1.5 ml的EP（Eppendorf）管中，每管40 μl，分别标记为阳性组及阴性对照组，分别加入200 μl的溶血素避光10 min后，在0.01M PBS缓冲液（pH7.2）室温离心洗1次（3000 g×2 min），弃上清。在5 μl的打孔液中浸泡15 min，在0.01M PBS缓冲液（pH7.2）室温离心洗1次（3000 g×2 min），弃上清。加入抗山羊抗人PPARγ 5 μl于阳性对照管中，37℃孵育60 min，在0.01M PBS缓冲液（PH7.2）室温离心洗1次（3000 g×2 min），弃上清。加正常山羊血清封闭液5 μl，室温5 min，在0.01M PBS缓冲液（pH7.2）室温离心洗1次（3000 g×2 min），弃上清。加入二抗驴抗山羊IGG FITC 5 μl（避光）过夜，在0.01M PBS缓冲液（pH7.2）中室温离心洗1次（3000 g×10 min），弃上清，加200μl 0.01M PBS上流式细胞仪检测。阴性对照组不加一抗，其余同阳性对照组。用Cellquest 软件计算蛋白表达强度。流式细胞仪检测结果用荧光指数（FI），FI=（样品基因蛋白荧光强度-阴性对照的平均荧光强度）/阴性对照的平均荧光强度。超敏C反应蛋白（hsCRP）采用按常规采用试剂盒进行检测。

1.3 统计学处理 使用SPSS 15.0软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间均数的比较采用t检验，计数资料采用例数和百分率表示，两组间率的比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正常对照组及ACS组一般资料比较 ACS组和正常对照组年龄，体重指数（BMI），收缩压（SBP）、舒张压（DBP），血尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）、白细胞计数（WBC）等指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。与正常对照组比较，ACS组患者治疗前hsCRP升高（P＜0.01），而PPARγ蛋白水平降低（P＜0.05，表1）。

表1 正常组与ACS组治疗前一般临床资料的分析

2.2 ACS组患者不同剂量阿托伐他汀干预1周后血脂变化 阿托伐他汀大、小剂量组患者治疗前血总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平比较均无统计学差异（P＞0.05）。阿托伐他汀干预1周后，两组患者TC水平均降低（P＜0.05），大剂量组患者TC降低更加显著（P＜0.01）；小剂量组患者TG、LDL-C水平虽较治疗前降低，HDL-C水平较治疗前升高,但差异无统计学意义（P＞0.05）；大剂量组TG、LDL-C水平较治疗前明显降低，HDL-C水平较治疗前明显升高，均有显著统计学意义（P＜0.01）。阿托伐他汀大剂量组患者治疗前后TC、TG、LDL-C下降幅度及HDL-C升高幅度均较小剂量组患者变化显著（P＜0.01）（表2）。

2.3 ACS组不同剂量阿托伐他汀干预1周后hsCRP、PPARγ蛋白表达变化 阿托伐他汀干预1周后，小剂量组患者hsCRP水平较治疗前略有降低，单核细胞PPARγ蛋白表达水平较治疗前略升高，但治疗前后差异无统计学意义（P＞0.05）；大剂量组患者hsCRP水平较治疗前有明显降低，单核细胞PPARγ蛋白表达水平较治疗前有明显升高，治疗前后差异有显著统计学意义（P＜0.01）；阿托伐他汀大剂量组患者治疗前后hsCRP下降幅度及PPARγ蛋白表达水平升高幅度均较小剂量组患者变化显著（P＜0.01，表2）。

3 讨论

急性冠脉综合征（ACS）是由于不稳定斑块破裂出血、血栓形成，继而造成冠状动脉阻塞和痉挛，冠状动脉灌注区域心肌严重缺血甚至坏死的一组急性症状[5]。炎症反应是造成粥样硬化斑块不稳定的主要因素，炎症因子hsCRP在ACS时显著增高，近年来通过hsCRP指标检测机体炎症反应、判断心血管疾病已得到较广泛的应用。本研究发现ACS组患者hsCRP较正常组升高（P＜0.01）,说明ACS患者存在炎症激活，炎症激活状态与病情加重有关。

过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ属Ⅱ型核受体超家族成员，是配体活化的转录因子之一。PPARγ作为一种重要的核受体，具有多种生物学效应，大量的研究已经证实PPARγ参与脂代谢、糖代谢以及细胞分化和凋亡等多种生理反应的调节，也参与调节炎症与免疫反应。PPARγ及其配体在炎症过程中具有重要的调控作用[6]，本研究可见正常组与急性冠脉综合征患者周围血单个核细胞均表达PPARγ，但PPARγ表达水平在急性冠脉综合征患者明显低于正常对照组（P＜0.05），提示PPARγ可能参与循环血单核细胞的功能调节，随着炎症程度的增强表达减弱。本研究提示检测循环单核细胞PPARγ的表达，对于认识动脉粥样硬化斑块的炎症反应及斑块的稳定性可能具有重要的临床意义。

本研究通过临床观察表明，经阿托伐他汀调脂干预治疗1周后，小剂量组（10 mg/d）与大剂量组（40 mg/d）均可降低TC，TG，LDL-C及升高HDL-C，大剂量组治疗前后与小剂量组相比降TC、TG、LDL-C，升高HDL-C的幅度更明显（P＜0.01）。ASCOT和CARDS研究显示：阿托伐他汀10 mg/d在较短的治疗时间显著降低高血压、糖尿病患者的心血管事件。PROVE-IT研究显示：阿托伐他汀80 mg/d治疗明显降低ACS患者主要终点事件，且这种获益在治疗30 d时即显示出来。本研究观察与上述研究结果一致。本研究中阿托伐他汀小剂量组患者hsCRP水平较治疗前略有降低，单核细胞PPARγ蛋白表达水平较治疗前略升高，但治疗前后差异无统计学意义（P＞0.05）；大剂量组患者hsCRP水平较治疗前有明显降低，单核细胞PPARγ蛋白表达水平较治疗前有明显升高，但治疗前后差异有显著统计学意义（P＜0.01）；阿托伐他汀大剂量组患者治疗前后hsCRP下降幅度及PPARγ蛋白表达水平升高幅度均较小剂量组患者变化显著（P＜0.01），提示阿托伐他汀可能部分激活PPARγ抑制炎症反应，并具有剂量依赖性。炎症因子hsCRP的大幅度下降可以初步反映临床上急性冠脉综合征患者在他汀药物治疗后的良好效应，提示应激状态下冠心病患者的单核细胞对早期他汀药物干预反应良好，炎症活动减弱，有助于斑块稳定。

表2 不同剂量阿托伐他汀干预前、后血脂及单核细胞PPARγ蛋白表达变化

[1] 马晶晶,章涛. PPARγ功能与疾病关系研究进展[J]. 中国药理学通报,2012,28(5):601-4.

[2] 李松森. 阿托伐他汀对冠脉介入治疗后血清hsCRP和PPARγ的影响[J]. 中外医疗,2012,31(21):6-7.

[3] 蒋世亮,季晓平,张运. 美国心脏病学会和美国心脏病协会发布关于ST段抬高型急性心肌梗死治疗指南（2004年修订版）[J]. 中华医学杂志,2005,85(1):62-4.

[4] Gibler WB,Cannon CP,Blomkalns AL,et al. Practical Implementation of the Guidelines for Unstable Angina/Non-ST-Segment Elevation Myocardial Infarction in the Emergency Department[J]. Circulation,2005,111(20):2669-710.

[5] 王晓芳. 血细胞与急性冠脉综合征关系的研究进展[J]. 中国老年学杂志,2012,32(11):5086-9.

[6] 吴钱红,刘喆. 过氧化物酶体增殖物激活受体γ在炎症过程中调控作用的研究进展[J]. 广西中医学院学报,2011,14 (2):79-81.