宝儿康颗粒的质量标准研究

2014-04-24胡军林顾承刚吴

中国医药指南 2014年16期

关键词：太子参橙皮薄层

胡军林顾承刚吴宁

（1 湖北省食品药品检验监督研究院，湖北武汉 430064；2 武汉药谷科技开发有限公司，湖北武汉 430070）

宝儿康颗粒的质量标准研究

胡军林1顾承刚2吴宁2

（1 湖北省食品药品检验监督研究院，湖北武汉 430064；2 武汉药谷科技开发有限公司，湖北武汉 430070）

目的建立宝儿康颗粒的质量控制方法。方法用薄层色谱法对宝儿康颗粒中的太子参、甘草、白术、薏苡仁、山楂进行定性鉴别；以橙皮苷为对照品，采用HPLC法测定了宝儿康颗粒中陈皮的含量。色谱柱：Inertsil ODS-3（不锈钢柱4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.5%冰醋酸溶液（40∶60）；检测波长：283 nm。结果太子参、甘草、白术、薏苡仁、山楂均能以薄层色谱鉴别；含量测定中橙皮苷线性范围0.054～0.54 μg（r=0.9999），回收率为99.2%（RSD=0.63%，n=6）。结论方法操作简便，灵敏度高，专属性和重线性好，可有效地控制宝儿康颗粒的质量。

宝儿康颗粒；橙皮苷；反相高效液相色谱法；太子参；甘草；白术；薏苡仁；山楂

宝儿康颗粒由太子参、茯苓、薏苡仁、白术等十四味中药组成，由宝儿康糖浆改变制剂成型工艺而成，具有补气健脾，开胃消食，渗湿，止泻功效。用于小儿脾胃虚弱，消化不良，食欲不振，大便异常，精神困倦，睡眠不安，夜惊、夜啼等症。原糖浆剂收载于中药部颁标准第十册，标准编号WS3-B-1967-95[1]。宝儿康糖浆保持原剂型的提取工艺不变，仅改变制剂成型工艺，将其制成宝儿康颗粒。为使新制剂质量可控，本文研究制定了本品质量标准。

1 仪器及试剂

高效液相色谱仪（北京创新通恒科技有限公司），型号P3000，检测器3000UV；CQ250超声波仪（上海超声波仪器厂），硅胶G（青岛海洋化工厂），羧甲基纤维素钠（国药集团化学试剂有限公司）。宝儿康颗粒由武汉药谷科技开发有限公司提供（批号20080601、20080602、20080603、20080604、20080701、20080702）；橙皮苷对照品（批号110721-20050，供含量测定用）、太子参对照药材（批号1004-200203，供鉴别用）、甘草对照药材（批号121303-200301，供鉴别用）、白术对照药材（批号120925-200407，供鉴别用）、薏苡仁对照药材（批号121254-200307，供鉴别用）、山楂对照药材（批号121138-200403，供鉴别用）均由中国食品药品检定研究院提供，甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 太子参薄层色谱鉴别[2]

取本品20 g，研细，加甲醇50 mL，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.2 cm，柱高15 cm），用水200 mL、20%乙醇100 mL依次洗脱，弃去水及20%乙醇洗脱液，再用40%乙醇及乙醇各100 mL洗脱，分别收集各自洗脱液，40%乙醇洗脱液预留备用，乙醇洗脱液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取不含太子参的自制样品20 g，同供试品溶液制法制成阴性对照溶液。取太子参对照药材3 g，加水煎煮2 h，离心，取上清液，通过D101型大孔吸附树脂柱，用水200 mL、20%乙醇100 mL洗脱，弃去水及20%乙醇洗脱液，再用乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，制成对照药材溶液。照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷洒1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃烘烤至斑点显色清晰。结果在与对照药材色谱相应的位置上，供试品溶液显相同颜色的斑点，阴性样品溶液无斑点显现，对结果无干扰。见图1。

图1 太子参TLC（1 阴性对照；2 太子参对照药材；3、4、5样品）

2.2 甘草薄层色谱鉴别[2]

取2.1项下预留的40%乙醇洗脱液，置水浴上蒸干，加甲醇1 mL溶解残渣，作为供试品溶液。另取不含甘草的自制样品20 g，同供试品溶液的制法配制成阴性对照溶液。再取甘草对照药材0.5 g，加乙醚40 mL，加热回流1 h，滤过，弃去乙醚液，药渣加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，加水30 mL溶解残渣，用正丁醇萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，正丁醇液蒸干，加甲醇1 mL溶解残渣，制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液各10 µL和对照药材溶液5 µL，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷洒10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃烘烤至斑点显色清晰。结果在与对照药材色谱相应的位置上，供试品溶液显相同颜色的斑点，阴性样品溶液无斑点显现，对结果无干扰。见图2。

图2 甘草TLC（1.阴性对照；2.甘草对照药材；3、4、5.样品）

2.3 白术薄层色谱鉴别[2]

取本品25 g，研细，加甲醇50 mL加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水25 mL使溶解，用石油醚（60～90 ℃）振摇萃取3次，每次20 mL，合并石油醚液，水液预留备用，石油醚液挥干，加石油醚（60～90 ℃）1 mL溶解残渣，作为供试品溶液。另取不含白术的自制样品25 g，同供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。再取白术对照药材1.5 g，加水100 mL，煎煮2 h，过滤，滤液浓缩至20 mL，用石油醚（60～90 ℃）振摇萃取3次，同法制成对照药材溶液。照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯（7∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷洒5%对二氨基苯甲醛硫酸溶液，在105 ℃烘烤10 min，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果在与对照药材色谱相应的位置上，供试品溶液显相同颜色的斑点，阴性样品溶液无斑点显现，对结果无干扰。见图3。

图3 白术TLC（1.阴性对照；2.白术对照药材；3、4、5.样品）

2.4 薏苡仁的薄层色谱鉴别[2]

取不含薏苡仁的自制样品25 g，照2.3项下的供试品溶液制法配制成阴性对照溶液。另取薏苡仁对照药材2 g，加石油醚（60～90 ℃）20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥至约1 mL，制成对照药材溶液。照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取2.3项下供试品溶液及上述两种溶液各10 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-醋酸乙酯-甲酸（10∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果在与对照药材色谱相应的位置上，供试品溶液显相同颜色的斑点，阴性样品溶液无斑点显现，对结果无干扰。见图4。

图4 薏苡仁TLC（1.阴性对照；2.薏苡仁对照药材；3、4、5样品）

2.5 山楂薄层色谱鉴别[2]

取2.3项下的水液，用醋酸乙酯萃取2次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，加甲醇1 mL溶解残渣，作为供试品溶液。另取不含山楂的自制样品25 g，照供试品溶液制法配制成阴性对照溶液。再取山楂对照药材2 g，加水100 mL，煎煮2 h，滤过，滤液浓缩至20 mL，以稀盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯振摇提取2次，同法制成对照药材溶液。照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯-甲酸（20∶20∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷洒2%三氯化铁乙醇溶液，在105 ℃烘烤至斑点显色清晰。结果在与对照药材色谱相应的位置上，供试品溶液显相同颜色的斑点，阴性样品溶液无斑点显现，对结果无干扰。见图5。

图5 山楂TLC（1.阴性对照；2.山楂对照药材；3、4、5样品）

2.6 橙皮苷的含量测定[2]

2.6.1 色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：Inertsil ODS-3（不锈钢柱4.6mm×250mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.5%冰醋酸溶液（40∶60）；检测波长：283 nm；柱温：30 ℃；流速：1 mL/min；进样量：10 μL；检测灵敏度：1.0000AUFS；理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。色谱图见图6。

图6 样品、对照品、阴性样品色谱峰

2.6.2 溶液制备：精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成25 μg/1 mL的溶液，作为对照品溶液。取本品适量，研细，取约0.7 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，置水浴上加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。另取不含陈皮的自制样品适量，同法制备成阴性对照溶液。

2.6.3 方法学考察

线性关系考察：精密称取橙皮苷对照品5.40 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成0.0540 mg/mL的溶液。分别精密吸取上述对照品溶液1、2、3、5，7，10μL，分别进样，测定。以横坐标为橙皮苷的量，以纵坐标为峰面积，测得回归方程y=723804.4x-2437.04，r=0.9999。结果表明橙皮苷进样量在0.054～0.54μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同—份对照品溶液10 μL，按色谱条件，重复进样6次，测定峰面积，结果RSD=0.62%，表明仪器精密度良好。

供试品溶液稳定性试验：分别精密吸取同—份供试品溶液10 μL，分别在0、2、4、6、8、10 h进样，测定峰面积，结果RSD为0.69%（n=6）。结果表明供试品溶液在10 h内保持稳定，能满足测定的时间要求。

重复性试验：取同一批（批号为20080601）样品6份，按供试品溶液制备方法提取制备并测定，计算含量，测得平均值为0.79 mg/g，RSD（%）=1.06%，表明方法的重现性良好。

准确度试验：取已知含量的样品（批号为20080601，含量为0.79 mg/g）6份，分别精密加入浓度为12.1 μg/μL的橙皮苷对照品溶液各25 μL（即0.3025mg），照供试品溶液制法制备溶液，测定含量，计算回收率。结果见表1。