四逆汤对急性缺血性心肌梗死模型大鼠SOD和MDA的动态药效及各指标间相关性研究
2014-04-18尹翠翠1蔺建军1杨勇1容蓉1
尹翠翠1 蔺建军1,2 杨勇1 容蓉1
(1.山东中医药大学,山东济南 250355;2.山东医药技师学院,山东泰安 271000)
四逆汤对急性缺血性心肌梗死模型大鼠SOD和MDA的动态药效及各指标间相关性研究
尹翠翠1 蔺建军1,2 杨勇1 容蓉1
(1.山东中医药大学,山东济南 250355;2.山东医药技师学院,山东泰安 271000)
目的:观察四逆汤对急性缺血性心肌梗死模型大鼠SOD和MDA的动态药效,分析时间与SOD和MDA指标相关性。方法:将Wistar大鼠随机分为心肌缺血组、假手术组、四逆汤组。心肌缺血组:于左冠状动脉前降支起始部下2mm处结扎;假手术组:穿线不结扎;四逆汤组:预先给大鼠灌服四逆汤4d,第4日给药30min后,进行急性缺血性心肌梗死手术。分别于手术后按时间点0、5、10、20、40、60、90、120、150、180、210、360m in腹主动脉采血,检测SOD和MDA含量,分析动态药效和时间与指标间的相关性。结果:与假手术组比较,心肌缺血组大鼠SOD(40、120、150、180、210、360min)、四逆汤组SOD(5、210、360min)含量显著降低,心肌缺血组MDA(10、60、90、150、210min)、四逆汤组MDA(210min)含量显著升高;在造模后40m in时,四逆汤组大鼠SOD明显高于心肌缺血组;造模后10、60、120、150m in时,四逆汤组大鼠MDA含量明显低于心肌缺血组。心肌缺血组、四逆汤组SOD含量与时间变化均为负相关关系,四逆汤组MDA含量与时间变化为正相关关系。结论:四逆汤能够有效地清除氧自由基,减轻脂质过氧化反应,减轻对缺血心肌的损伤,对大鼠缺血心肌具有一定的保护作用。但通过与时间相关性分析,提示四逆汤所具有的减轻氧自由基损伤作用可能不是其抗急性缺血性心肌梗死的主要途径。
缺血性心肌梗死 四逆汤 SOD MDA 实验研究
四逆汤始载于《伤寒论》,由炮附子、干姜、炙甘草组成,具有回阳救逆之功效,在现代临床中应用广泛,疗效较好。作为回阳救逆的经典医方,四逆汤对心血管系统有良好的保护和治疗作用。现代医学研究表明,四逆汤具有明显的抗心脏、肠、脑等器官缺血-再灌注损伤的作用,其机制可能与清除氧自由基和增加组织灌流量有关[1-3]。超氧化物歧化酶(SOD)在生物体内具有清除自由基的首要作用;丙二醛(MDA)是一种脂质过氧化代谢产物,它具有的细胞毒性可引起细胞代谢及功能障碍,因此通过测定MDA的含量能反映机体内脂质过氧化的程度,间接反映细胞损伤的程度。这些研究表明,SOD、MDA的含量及其变化可以作为心肌梗死损伤程度的观测指标。本研究通过观察急性缺血性心肌梗死模型大鼠经四逆汤治疗后不同时间点血浆中SOD、MDA含量,以分析四逆汤通过抗自由基损伤途径防护心肌缺血的动态效应作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物Wistar大鼠,SPF级,雌雄各半,132只,体重250~300g,由山东鲁抗动物实验中心提供,动物许可证编号:SCXK(鲁)20080002。饲养环境:室温22~26℃,相对湿度40%~70%RH。
1.2 实验仪器BL-420E生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司);UV2201紫外分光光度计(日本岛津);JA5003型电子天平(上海精科天平厂);GL-20A型全自动高速冷冻离心机(湖南离心机厂)。
1.3 实验试剂丙二醛(MDA)试剂盒,批号:20111216;总超氧化物歧化酶(T-SOD)试剂盒,批号:20110827,由南京建成生物工程研究所提供。
1.4 实验药材附子,产地四川省江油,为毛茛科多年生草本植物乌头Aconitum carmichaeli Debx的子根的加工品。甘草,产地河北,为豆科(Leguminosae)植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根及根茎。干姜,产地广西来宾,为姜科多年生草本姜Zingiber officinale Rosc.的干燥根茎。以上药材均购于山东济南建联药店,经山东中医药大学中药学院李峰教授鉴定合格。以传统临床常用处方(黑附子30g、干姜20g、炙甘草30g)用量比例,按照本课题前期优化的提取方法[4],将各单味药分别提取,合并四逆汤提取液,药物浓度为2g生药材/mL,4℃冷藏备用。
1.5 动物分组与模型制备Wistar大鼠共132只,随机分假手术组36只、心肌缺血组36只和四逆汤组60只。心肌缺血模型制备:用4%水合氯醛腹腔麻醉后,气管插管,行人工呼吸;左侧第3、4肋间开胸,剪开心包,暴露心肌,并用圆形无创缝合针6/0丝线置于左冠状动脉前降支起始部下2mm处备用;结扎左冠状前降支动脉,以ECGⅡ导联ST段明显抬高或T波高耸、心肌颜色变暗红色为结扎成功的标志。心肌缺血组和四逆汤组大鼠按此方法造模,假手术组大鼠穿线不结扎。四逆汤组大鼠造模前预先给四逆汤灌胃4d,大鼠给药剂量为21.60g生药材/kg体重,第4日给药30m in后进行造模。
1.6 指标检测各组大鼠造模成功后,4%水合氯醛腹腔注射麻醉,按时间点0、5、10、20、40、60、90、120、150、180、210、360m in(心肌缺血组、假手术组每个时间点3只大鼠,四逆汤组每个时间点5只大鼠),分别腹主动脉采血,肝素抗凝,置冷冻离心机中,3000r/m in离心10min,取上清,-20℃保存待用。按试剂盒说明采用紫外分光光度计检测SOD、MDA含量。
1.7 统计学方法实验数据采用SPSS17.0软件统计分析,计量数据均以(±s)表示,采用单因素方差(LSD检验)进行组间差异分析,以P<0.05为差异具有统计学意义。采用Pearson相关性分析进行各指标时间点间的差异性分析,以P<0.05为差异呈显著性线性相关。
2 实验结果
2.1 各组大鼠不同时间点血浆中SOD含量与假手术组比较,心肌缺血组大鼠在40、120、180、210、360min时间点,四逆汤组在5、210、360min时间点,血浆中SOD含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。与心肌缺血组比较,四逆汤组大鼠在40min时间点血浆SOD含量明显升高(P<0.05)。见表1、图1。
表1 各组大鼠不同时间点血浆中SOD含量比较±s)U/mL
表1 各组大鼠不同时间点血浆中SOD含量比较±s)U/mL
注:与假手术组比较,*P<0.05,**P<0.01,与心肌缺血组比较,△P<0.05
图1 各组大鼠不同时段SOD含量变化
2.2 各组大鼠不同时间点血浆中MDA含量与假手术组比较,心肌缺血组大鼠在10、60、120、150、210min时间点,四逆汤组在210min时间点,血浆MDA的含量明显升高(P<0.05或P<0.01)。与心肌缺血组比较,四逆汤组大鼠在10、60、120、150min时间点血浆MDA含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。见表2、图2。
表2 各组大鼠不同时间点血浆中MDA含量比较(±s)nmol/mL
表2 各组大鼠不同时间点血浆中MDA含量比较(±s)nmol/mL
注:与假手术组比较,*P<0.05,**P<0.01;与心肌缺血组比较,△P<0.05,△△P<0.01。
图2 各组大鼠不同时段MDA含量变化
2.3 各组时间与SOD、MDA含量间的相关性分析
2.3.1 假手术组时间与SOD、MDA含量间的相关性分析时间与SOD、MDA含量间的指数相关系数分别为-0.415、0.363(P>0.05),尚不认为它们之间有线性相关关系,见图3。
图3 假手术组时间与SOD、MDA含量间的相关性分析
2.3.2 心肌缺血组时间与SOD、MDA含量间的相关性分析
时间与SOD含量的指数相关系数为-0.686(P<0.05),为负相关关系;时间与MDA含量的指数相关系数为0.156(P>0.05),尚不认为它们之间有线性相关关系。见图4。
图4 心肌缺血组时间与SOD、MDA含量间的相关性分析
2.3.3四逆汤组时间与SOD、MDA含量间的相关性分析时间与MDA含量的指数相关系数为0.791(P<0.05),为正相关关系;时间与SOD含量的指数相关系数为-0.804(P<0.01),为负相关关系。见图5。
图5 四逆汤组时间与SOD、MDA间的相关性分析
3 讨论
本研究结果显示,假手术组SOD含量与时间尚无相关性关系,心肌缺血组、四逆汤组SOD含量与时间呈负相关关系。假手术组、心肌缺血组MDA含量与时间尚无相关性关系,四逆汤组MDA含量与时间呈正相关关系。提示虽然四逆汤提取物能清除氧自由基,减轻缺血心肌的损伤,对大鼠心梗模型具有一定的保护作用,但随着时间的增加,四逆汤抗大鼠急性心肌缺血的作用,与其增加机体SOD的含量,降低MDA含量的变化不是十分密切。通过相关性数据分析,提示四逆汤减轻氧自由基损伤不是其抗急性缺血性心肌梗死的主要途径,有可能通过其他机制起作用,有待进一步研究。
[1]孙慧兰,吴伟康,罗汉川,等.四逆汤有效部位抗心肌缺血-再灌注损伤作用.中草药,2006,37(1):77
[2]刘克玄,吴伟康,罗汉川,等.四逆汤对大鼠肠缺血再灌注后肠上皮细胞超微结构的影响.中国病理生理杂志,2004,20(4):636
[3]颜建云,吴伟康,陆立鹤,等.四逆汤对大鼠局灶性脑缺血后bax、bcl-2表达的影响.中国病理生理杂志,2005,21(4):669
[4]王晓莉,巩丽丽,容蓉,等.3种方法制备的四逆汤中甘草苷、甘草酸含量测定.中国实验方剂学杂志,2012,18(6):71
R542.220.5
A
1672-397X(2014)02-0075-03
尹翠翠(1987-),女,硕士研究生。研究方向:经方的现代研究。
杨勇,yy7204@yahoo.com.cn
2013-07-20
编辑:吴宁
山东省高等学校科技计划项目(Z09LF31)