三酰甘油及脂联素在大鼠重症急性胰腺炎中的检测水平及意义

杨培秀 陆其明

（嘉兴市第二医院，浙江嘉兴 314000）

三酰甘油及脂联素在大鼠重症急性胰腺炎中的检测水平及意义

杨培秀 陆其明

（嘉兴市第二医院，浙江嘉兴 314000）

目的探讨三酰甘油对大鼠重症急性胰腺炎的影响及三酰甘油和脂联素在重症急性胰腺炎中的关系。方法40只SD大鼠，随机等分为4组：正常对照组、高脂血症组、重症急性胰腺炎组、高脂血症性重症急性胰腺炎组。正常组及重症急性胰腺炎组喂以基础饲料，另两组喂以高脂饲料。1个月后，重症急性胰腺炎组及高脂血症性重症急性胰腺炎组逆行胰胆管注射3.5%牛磺胆酸钠，同样的方法正常对照组和高脂血症组注射0.9%氯化钠。12小时后收集标本，检测淀粉酶、三酰甘油、脂联素，取胰腺组织HE染色，参照Grewal法进行病理学评分。结果高脂血症性重症急性胰腺炎组胰腺组织坏死程度较重症急性胰腺炎组严重，评分值比较差异有统计学意义（P＜0.05）。高脂血症性重症急性胰腺炎组脂联素水平与三酰甘油存在负相关（r＝－0.844）。结论高脂血症能加重重症急性胰腺炎。在伴高脂血症性重症急性胰腺炎中三酰甘油水平升高，脂联素水平降低，两者存在相关性。

高脂血症；重症急性胰腺炎；脂联素；三酰甘油

近年来由于高脂血症的人群增多，高脂血症性胰腺炎的发病率也逐年增高。高脂血症也成为继胆源性和酒精性之后急性胰腺炎的常见病因。脂联素是一种由脂肪细胞分泌的激素，具有抗炎、保护内皮功能、抗动脉粥样硬化形成、增加胰岛素敏感性、调节糖类和脂质代谢等多种生物学效应［1］，低脂联素与肥胖、血脂代谢紊乱等密切相关。本实验通过建立高脂血症以及非高脂血症条件下重症急性胰腺炎大鼠模型，探讨三酰甘油及脂联素的变化情况，有助于评估伴高脂血症性重症急性胰腺炎病情的发展。

1 材料与方法

1.1 实验材料 健康SD大鼠，性别不限，鼠龄约8周，体质量（220.87±27.13）g，共40只，由浙江省医学科学院动物实验中心提供，动物合格证号：Scxk（浙）2008－0033。动物饲养房温度20～22℃，相对湿度40%～70%，按实验要求提供相应饲料。仪器微量注射泵Wz50c，全自动酶标仪，旋转式石蜡病理组织切片机LEICA RM2135，微量移液器，牛磺胆酸钠，脂联素ELISA试剂盒。

1.2 实验方法

1.2.1 40只大鼠，随机等分为4组：正常对照组、高脂血症组、重症急性胰腺炎组、高脂血症性重症急性胰腺炎组。正常对照组和重症急性胰腺炎组用基础饲料，高脂血症组和高脂血症性重症急性胰腺炎组用高脂饲料（主要成份为87.8%基础饲料加10%猪油加2%胆固醇加0.2%胆酸钠），分别喂养1个月。实验前大鼠禁食12小时，自由饮水。10%水合氯醛腹腔注射（0.3mL／100g）麻醉，无菌操作下行上腹正中切口进腹，采用一次性静脉输液针穿过十二指肠对系膜缘经乳头逆行插入主胰管，用微量输液泵以0.2mL／min恒速向主胰管注射3.5%牛磺胆酸钠溶液（1mL／kg）制备重症急性胰腺炎模型。同样的方法正常组和高脂血症组注射0.9%氯化钠。

1.2.2 造模成功后12小时再次开腹，腹腔主动脉采血2mL，3000r／min离心后，分离血清保存于－20℃备用，用全自动生化分析仪检测血淀粉酶、三酰甘油含量。

1.3 观察指标

1.3.1 脂联素水平测定 －20℃保存血清，按脂联素酶联免疫试剂盒说明书操作，采用典型的竞争法酶联免疫吸附测定大鼠血清脂联素。

1.3.2 病理切片 术后12小时取胰腺组织，用10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色后显微镜下观察胰腺组织（第386页彩图1～4），并参照Grewal法［2］对胰腺组织损伤进行半定量评估。评分标准：水肿：0分为无水肿，1分为轻度叶间隙增宽，2分为重度叶间隙增宽，3分为腺泡间隙增宽，4分为细胞间隙增宽；坏死：0分为无坏死，1分为坏死面积1%～10%，2分为坏死面积＞10%～20%，3分为坏死面积＞20%～30%，4分为坏死面积＞30%；炎症：以每高倍视野计，每5个炎细胞计0.5分，超过30个计4分；出血：0分为无出血，1分为有出血。

1.4 统计学处理 应用SPSS18.0统计软件进行分析，数据用（±s）表示，采用t检验、方差分析及Pearson相关分析。

2 结 果

2.1 血清指标比较 高脂血症组三酰甘油值与正常对照组比较升高（P＜0.05）。重症急性胰腺炎组血清淀粉酶较正常对照组升高（P＜0.05）。高脂血症性重症急性胰腺炎组脂联素值较重症急性胰腺炎组降低（P＜0.05）。详见表1。

表1 四组大鼠血清指标的比较（±s）

表1 四组大鼠血清指标的比较（±s）

与正常对照组比较*P＜0.05，与重症急性胰腺炎组比较△P＜0.05

组 别n淀粉酶（U／L）三酰甘油（mmol／L）血脂联素（μg／L）正常对照组10794.60±176.070.32±0.061.02±0.23高脂血症组10925.90±150.920.85±0.07*0.57±0.07*重症急性胰腺炎组103681.10±1506.67*0.34±0.060.92±0.11高脂血症性重症急性胰腺炎组102786.60±974.99*△0.87±0.07*△0.50±0.08*△

2.2 胰腺组织病理评分 高脂血症性重症急性胰腺炎组水肿、坏死、炎症、出血评分均高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），高脂血症性重症急性胰腺炎组的坏死评分值（3.60± 0.55）分，高于重症急性胰腺炎组的坏死评分值（2.20±0.45）分，差异具有统计学意义（P＜0.05）。详见表2。

表2 胰腺组织病理评分（±s）

表2 胰腺组织病理评分（±s）

与正常对照组比较*P＜0.05，与高脂血症组比较△P＜0.05，与重症急性胰腺炎组比较▲P＜0.05

出血正常对照组100.40±0.5500.20±0.270高脂血症组100.80±0.4500.50±0.500重症急性胰腺炎组102.80±0.84*△2.20±0.45*△2.40±0.96*△0.60±0.55*组 别n水肿坏死炎症高脂血症性重症急性胰腺炎组103.80±0.45*3.60±0.55*▲3.40±0.82*1.00±0.00*

2.3 高脂血症性重症急性胰腺炎组脂联素与三酰甘油的关系 在高脂血症性重症急性胰腺炎组检测结果中，以三酰甘油值为横坐标，脂联素值为纵坐标，经Pearson线性相关分析，脂联素与三酰甘油存在负相关（r＝－0.844，P＝0.002）。

3 讨 论

在诱导高脂血症动物模型上，本文采用高脂饲料喂养法［3］，表1结果示高脂血症组三酰甘油水平显著高于正常组，故认为高脂血症模型可行。

通常实验采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射诱发重症急性胰腺炎模型［4］。从表1和表2结果可见，重症急性胰腺炎组较正常对照组淀粉酶升高，显微镜下有水肿、炎症细胞浸润、出血及坏死表现。高脂血症性重症急性胰腺炎组坏死评分值高于重症急性胰腺炎组。

结合表1和表2可见通过高脂饲料喂养诱发大鼠高三酰甘油血症和牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射诱发重症急性胰腺炎相结合的方法，可成功建立高脂血症性重症急性胰腺炎大鼠模型，且本实验验证了伴高脂血症下重症急性胰腺炎胰腺病理改变更为严重。

重症急性胰腺炎时胰腺及胰周的三酰甘油被胰脂肪酶水解，产生大量游离脂肪酸，对胰腺腺泡细胞和毛细血管内皮细胞有直接的细胞毒作用，并可激活胰蛋白酶原引起胰腺自身消化。脂联素通过激活磷酸腺苷－蛋白激酶（cAMP－PKA）信号通路，抑制TNF－α介导的NF－κB磷酸化，从而抑制NF－κB的活化，增加肌细胞对游离脂肪酸的摄取和氧化，减少游离脂肪酸，减轻了胰腺炎的病理损害。当发生肥胖时，血清脂联素水平降低［5］，血脂紊乱，使脂联素对NF－κB的抑制减弱，NF－κB激活水平增高，参与炎症的发生、发展。

［1］ 高迪，李榕．脂联素相关研究进展．中华临床医师杂志，2013，7（17）：7897

［2］ Grewal H P，Mohey el Din A，Gaber L．Amelioration of the physiologic and biochemical changes of acute pancreatitis using an anti－TNF－alpha polyclonal antibody．Am J Surg，1994，167（1）：214

［3］ 蒙缜之．化学物质诱导大鼠高脂血症模型研究进展．广西中医学院学报，2008，11（1）：71

［4］ Zhang X P，Ye Q，Jiang X G，et al．Preparation method of an ideal model of multiple organ injury of rat with severe acute pancreatitis．World J Gastroenterol，2007，13（34）：4566

［5］ Gu D，Wang Z，Dou X，et al．Inhibition of ERK1／2 pathway suppresses adiponectin secretion via accelerating protein degradation by Ubiquitin－proteasome system：Relevance to obesity－related adiponectin decline．Metabolism：clinical and experimental，2013，62（8）：1137